目的:研究卫矛科雷公藤属植物东北雷公藤Tripterygium regelii Sprague et Takeda的化学成分.方法:利用硅胶柱色谱和高效液相等色谱方法对东北雷公藤根的醇提物的化学成分进行分离纯化,根据理化常数测定及波谱数据分析鉴定化合物结构.结果:从东北雷公藤根的醇提物中分离得到13个化合物,分别鉴定为:新海胆灵A(1)、β-谷甾醇(2)、(+)-丁香脂素(3)、calolongic acid(4)、caloteysmannic acid(5)、没食子儿茶素(6)、表没食子儿茶素(7)、儿茶素(8)、表儿茶素(9)、(-)-4'-O-methyl-epi-gallocatechin(10)、香草酸(11)、丁香酸(12)、3,4,5-三甲氧基苯酚(13).结论:其中,化合物1、4～7、9～13为首次从该植物中分离得到.

以雷公藤属雷公藤、昆明山海棠、东北雷公藤三味中药为基础，整合其中药及复方知识，以现有文献型数据库、药代动力学和毒性在线预测平台（ADMETlab 2.0数据库）、中药系统药理数据库（TCMSP数据库）、中医药百科全书（ETCM数据库）以及2020版《中国药典》为数据整理制作基础数据库，并对数据库内容进行重新关联及建设。雷公藤属数据库（TWD）共收集相关中成药方剂14首，方剂相关药材53味，相关化学成分4 000余个，相关疾病靶标2 000余个，相关疾病20种，内容涵盖药材产地、性味归经、指标成分、配伍禁忌、现代应用等多个维度。包括药材、方剂、成分、靶标、疾病5个子数据库及1个分析系统，通过主数据库与二级表建立超链接，实现各个数据库表数据的交互检索。通过整理、融合专业知识，结合数据库的专业前沿技术，使用中英文对照形式建立的TWD，将雷公藤属的中药信息系统、准确、全面、综合、可视化地呈现，为雷公藤属植物药的开发与临床应用奠定基础，推动雷公藤属领域研究国际化。

目的:测定雷公藤属植物叶片中5种萜类成分的含量并比较差异,研究3个物种间的化学亲缘关系.方法:采用HPLC法测定28批雷公藤属植物叶片中雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚新内酯、雷酚内酯和雷公藤红素5个成分的含量,并进行方差分析和聚类分析.结果:雷公藤属植物叶片中,雷公藤甲素、雷酚内酯和雷公藤红素的含量差异有统计学意义(P<0.05);雷公藤内酯酮和雷酚新内酯含量差异无统计学意义(P>0.05).运用系统聚类将28批雷公藤属植物聚为4类:第I类为东北雷公藤和昆明山海棠;第II类为雷公藤;第III类为雷公藤;第IV类为雷公藤和昆明山海棠.结论:雷公藤属植物叶片中部分萜类成分含量差异明显.东北雷公藤与雷公藤化学亲缘关系较远;昆明山海棠混在2者之间,与2者无明显区分.

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.)系卫矛科雷公藤属木质藤本植物,在我国被广泛开发利用的主要有3种,即分布于长江流域至西南及台湾的雷公藤,分布于长江流域至西南的昆明山海棠和主要分布于东北的黑蔓.在我国,雷公藤因其抗炎、免疫调节等作用被誉为中药抗风湿领域最引人瞩目的明珠,雷公藤片、雷公藤多苷片、复方雷公藤制剂等广泛运用于治疗RA、SLE、银屑病等自身免疫病[1-4].近几年关于雷公藤治疗RA的多项研究在《风湿病学年鉴》《内科学年鉴》等权威杂志发表,雷公藤的疗效受到了国际风湿病学界的高度关注,包括美国梅奥诊所首席风湿病学专家Mattson等多名学者均表示了对雷公藤治疗风湿病的密切关注,并期待进一步的研究成果报道.然而雷公藤的毒副作用是困扰其临床运用的关键,也是阻碍其走向世界的绊脚石.

雷公藤甲素广泛存在于卫矛科雷公藤属植物中,既有抗炎、抗肿瘤、免疫调节等药理活性,又有肝脏毒性、胃肠道毒性、生殖毒性等副作用,引起了广泛关注.本文检索了国内外近10年来有关雷公藤甲素含有量测定的文献,发现雷公藤属3个物种中雷公藤所含该成分含有量最高,昆明山海棠中次之,东北雷公藤中最低;雷公藤属植物根皮中其含有量最高,茎枝及根去皮木质部中较低.影响中药材及中成药中雷公藤甲素含有量的因素较多,包括药材使用部位,药材产地、采收、炮制方法,制剂提取工艺,药物配伍等,建议重视该成分毒性,对相关饮片和中成药进行质量控制,以期降低用药风险,保证临床安全性.

目的:克隆东北雷公藤萜类物质生物合成关键酶基因3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)基因和1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR)基因全长,并对其进行生物信息学分析.方法:根据东北雷公藤转录组数据,设计特异性引物,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术克隆东北雷公藤DXR、HMGR基因编码区的全长序列,并进行一系列生物信息学分析.结果:成功克隆东北雷公藤DXR、HMGR基因各1条,分别命名为TrDXR和TrHMGR,两者分别长1410、1770bp,编码469个和589个氨基酸.TrDXR为亲水性蛋白,亚细胞定位在叶绿体,无跨膜结构,转运肽定位于叶绿体,含有2个结合功能域和2个活性位点基序;TrHMGR为疏水性蛋白,亚细胞定位在内质网,有跨膜结构,无转运肽,含有4个结合功能域.TrDXR和TrHMGR与不同物种同源序列的相似性高,保守性强.结论:克隆获得TrDXR、TrHMGR基因cDNA全长,并对其生物功能进行了初步预测,为基因功能鉴定及东北雷公藤萜类物质分子形成机制研究奠定基础.

目的:建立大环双内酯雷公藤生物碱高分辨质谱数据库(HR-MS-database),并应用于不同种属雷公藤生物碱的快速鉴定分析.方法:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS)技术手段,借助SCIEX公司LibraryView数据库平台,建立大环双内酯雷公藤生物碱高分辨质谱-数据库(HR-MS-database),并对不同种属间雷公藤生物碱进行差异分析.结果:建立大环双内酯结构高分辨质谱数据库,包含雷公藤生物碱65种;对28个产地不同种属间雷公藤生物碱样品测定结果显示,雷公藤属植物间生物碱成分差异明显,其中包含共有成分35种,东北雷公藤显现出与昆明山海棠和雷公藤存在明显差异.结论:本研究获得了一种大环双内酯雷公藤生物碱的快速识别方法,鉴别出不同种属间雷公藤生物碱的较大差异,为雷公藤属植物的药效物质基础与质量标准研究提供参考.

目的:研究东北雷公藤正丁醇层化学成分.方法:采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20等柱色谱法以及制备型HPLC,对东北雷公藤70％乙醇提取物的正丁醇层进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构.结果:从东北雷公藤正丁醇层中共分离得到14个化合物,分别为3,21-dihydroxyolean-12-en-29-oic acid(1)、3β,22β-dihydroxy-urs-12-en-30-oic acid(2)、demethylregelin(3)、methyl3-oxo-22a-hydroxy-olean-12-ene-29-oate(4)、Wilfor-lide A(5)、wilforol F(6)、abieta-8,11,13-triene-14,19-diol(7)、(4bS,8aS)-2-isopropyl-1-methoxy-4b,8,8-trimethyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahydrophenanthren-3-ol(8)、木犀榄苷二甲酯(9)、(7R,8S,8′R)-4,9,4′,8′-四羟基-3,3′-二甲氧基-7,9′-单环氧木脂素(10)、3,4-二氢-2-(2,5-二羟基苯基)-2-氢-3,5,7-三羟基苯并吡喃(11)、phospholipase A2(12)、十六烷酸(13)、亚油酸(14).结论:化合物3、4、6、7、8、9、10、12为首次从卫矛科植物中分离得到.

目的 采用ITS2 DNA条形码技术,研究雷公藤属3种药用植物的遗传特性,揭示其地理分布格局的形成原因.方法 收集雷公藤属植物28个居群223份样本,提取基因组DNA,扩增ITS2基因序列并测序,并进行遗传多样性分析,绘制失配分布曲线检测群居历史动态变化情况,估算雷公藤属种间、种内群体间和群体内的差异及遗传分化系数.结果 雷公藤属28个居群223份样本共检测到12个碱基突变位点,构成10个单倍型.昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum共有7个单倍型,H2～H7为特有单倍型;雷公藤Trippterygium wilfordii共有4个单倍型,H8为特有单倍型;东北雷公藤Tripterygium regelii共有3个单倍型,无特有单倍型;H1为3个物种间的共有单倍型,H9和H10为雷公藤和东北雷公藤共有单倍型.群体遗传多样性分析显示,雷公藤属具有较高的单倍型多态性(Hd=0.615±0.024)和核苷酸多态性[Pi=(9.47+0.58)×10-3].群体遗传结构分析显示,雷公藤属的变异主要存在于物种之间(76.14％),种内群体间和群体内的变异分别为11.42％、12.44％.群体动态历史分析表明,雷公藤属、雷公藤和东北雷公藤曾经历过扩张,而昆明山海棠未经历过扩张.结论 雷公藤属及其属下的昆明山海棠和雷公藤的遗传多样性水平较高,而东北雷公藤遗传多样性水平较低.雷公藤属植物在第4纪冰期时,将中国西南、华中和华东的部分地区作为冰期避难所,冰期后以冰期避难所为中心向四周扩散,形成当前雷公藤属植物的分布格局.

目的:利用ITS2序列对市售火把花根药材及其混伪品进行DNA分子鉴定,以确保其临床用药的安全和有效.方法:对收集到的火把花根药材及其混伪品样品进行DNA提取,ITS2引物的PCR扩增与双向测序;采用CodonCode Aligner V 6.0.2软件对测序峰图进行校对拼接,经隐马尔夫模型的HMMer注释,并预测其二级结构;使用MEGA6.0计算遗传距离,构建NJ系统发育树.结果:火把花根药材及其混伪品的ITS2序列长度均在210～224 bp之间,其种间K2P遗传距离为0.012～0.690,火把花根与雷公藤、东北雷公藤、苦皮藤、南蛇藤及金樱根ITS2条形码变异位点分别为5、7、27、26和88个,其差异较为明显,经与GenBank数据库进行比对的结果表明,ITS2序列及其二级结构能准确区分火把花根药材及其混伪品.结论:DNA条形码ITS2序列可作为火把花根药材真伪鉴别的有效手段,也为后期火把花根片中成药的质量控制及品质评价提供了技术保障.