目的:了解我国HIV CRF01_AE亚型及其相关重组亚型的包膜糖蛋白(envelope glycoprotein，ENV)分子流行情况，建立ENV共识序列以了解氨基酸突变及蛋白质三级结构。方法:收集Los Alamos数据库中2015—2021年我国HIV-1 CRF01_AE亚型及其相关重组亚型的完整ENV基因序列，构建系统发育进化树并建立ENV共识序列，使用Protscale及PROVEAN对ENV共识序列广谱中和抗体表位中的氨基酸亲疏水性变化及有害性突变进行预测，同时分析氨基酸突变对ENV三级结构的影响。结果:系统发育分析结果显示，有70.0%（14/20）的CRF01_AE亚型序列属于进化簇4，在ENV共识序列的广谱中和抗体表位V1/V2及Loop D中分别存在4个和1个的氨基酸突变使亲疏水性发生变化，PROVEAN预测结果显示V1/V2位点的G152D及β23/V5/β24表位的M476I为有害突变。ENV共识序列的蛋白质三级结构pLDDT值为86.2，在V1/V2表位存在由于有害突变所产生的新α螺旋。结论:我国HIV-1 CRF01_AE亚型基因谱系众多，加剧了重组病毒的形成。在ENV共识序列V1/V2结构域中由于氨基酸突变使其蛋白空间结构发生改变，这种改变可能会对后续广谱中和抗体的诱导产生影响。

目的:以痘苗病毒中和抗体表位D8L区为重组位点进行外源基因替换，从而降低载体自身免疫原性。方法:通过同源重组技术，插入表达流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)序列，对D8L区进行替换，构建重组痘苗病毒流感疫苗，同时以表达相同HA的TK区重组痘苗病毒疫苗为对照。Western blot对HA的表达进行验证；小鼠实验、ELISA、血凝抑制试验检测每次免疫后2周的血清抗体效价，攻毒保护试验评价重组痘苗病毒的保护效力。结果:Western blot表明构建的重组疫苗均能正确表达HA D8L蛋白。ELISA、血凝抑制试验显示，初次免疫后，D8L区突变的重组痘苗病毒疫苗HA抗体效价略高于TK区突变的重组疫苗，并随着免疫次数的增多差异有统计学意义( P<0.05)；其免疫原性显著低于TK区突变的重组疫苗( P<0.05)，随着免疫次数增加，二者差异无统计学意义( P>0.05)。H1N1pdm攻毒后保护效力评价结果显示，D8L区突变组可完全清除病毒，且小鼠肺部炎症水平更低、组织损伤更少。 结论:通过将外源基因插入到痘苗病毒载体中和抗体表位D8L区，有助于降低载体自身的免疫原性，并提高外源基因的免疫原性，为痘苗病毒载体在疫苗或基因治疗领域作为递送工具提供了参考。

目的 研究左束支不同部位起搏对心电图QRS波时限、形态及起搏参数的影响.方法 选取2020年3月至2022年10月该院符合起搏适应证并成功行左束支起搏(LBBP)的94例患者作为研究对象.根据起搏后的体表心电图形态,将受试者分成左束支主干起搏(LBTP)组与左束支分支起搏(LBFP)组,LBFP组再细分为左后分支起搏(LPFP)组与左前分支起搏(LAFP)组.记录各组起搏后心电图QRS波的时限、形态,术中、术后3个月的起搏参数(包括起搏阈值、电极感知、电极阻抗),术前、术后3个月的血B型钠尿肽(BNP)水平.观察各组患者术中及术后并发症发生情况.结果 LBTP组起搏后QRS波时限(103.91±7.86)ms低于LBFP组的(108.43±8.72)ms,差异有统计学意义(P＜0.05),而LPFP组起搏后QRS波时限(108.51士8.93)ms与LAFP组(108.29±8.51)ms比较差异无统计学意义(P＞0.05).起搏后V1导联QRS波形态分布以Qr型为主,各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).LBTP组与LBFP组、LPFP组与LAFP组术中和术后3个月起搏阈值、电极感知、电极阻抗比较差异无统计学意义(P＞0.05).LBTP组与LBFP组术前和术后3个月BNP水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LBTP在心室电同步性方便优于LBFP,两者术中和术后3个月起搏参数均较理想.

目的:针对乙型肝炎病毒S蛋白,制备全人单克隆抗体,对其亲和力、中和病毒活性及抗体所结合的抗原表位进行研究.所制备的全人抗体可应用于乙肝病毒的暴露后预防,为阻断母婴传播提供治疗手段.方法:通过流式分选和单细胞RT-PCR技术获得单克隆抗体;利用间接ELISA法检测抗体结合活性,进行表位分析;HepG2-NTCP细胞用于病毒感染,KHB乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒检测细胞上清中HBeAg的指标.结果:获得三株具有中和活性,可以结合三种乙肝病毒亚型S蛋白的抗体,其中1 F2、2 A1两株抗体的结合依赖于抗原蛋白的天然构象,2 H2抗体的结合依赖于连续的氨基酸序列;1F2、2H2抗体结合的位置位于S蛋白胞外区第一个免疫环状区域.结论:利用单细胞RT-PCR技术成功制备了针对乙肝病毒S蛋白的抗体,其具有中和作用.抗原表位位于S蛋白胞外区的第一个免疫环状区域内.

目的 分析我国无偿献血人群艾滋病病毒I型(HIV-1)感染者病毒亚型及env基因C2-V4区序列特征.方法 针对我国13个省市献血人群筛选的115例HIV-1阳性标本,扩增HIV-1的env基因C2-V4区片段并测序;构建最大似然树(Maximum Likelihood)分析不同亚型env基因序列的进化关系;分析该基因区序列变异以及2G12、PGT135、PGT 128中和表位特征.结果 从115例HIV阳性标本中成功扩增C2-V4区76份,经测序分析发现HIV-1基因亚型7种,其中,亚型CRFO 1_AE和CRF07 BC所占比例最高,分别占46.0％(35/76)和39.5％(30/76),其他亚型CRF08_BC、B、CRF65_CPX、CRF59_0 1B、CRF61_BC所占比例分别为5.3％ (4/76)、5.3％ (4/76)、1.3％ (1/76)、1.3％ (1/76)、1.3％(1/76).V3环顶端四肽存在GPGQ、GPGR、GPGK、GQGR四种类型,辅助受体以CCR5 (90.8％)为主.97.1％的CRF01_AE毒株分别缺失2G12和PGT 135抗体识别的相关糖基化位点,而CRF07_BC毒株100％缺失2G12抗体识别相关的糖基化位点,80％毒株未缺失PGT135抗体识别相关的糖基化位点.结论 我国献血人群HIV-l感染者以CRF01_AE和CRF07 BC为主要流行毒株;各毒株亚型V3顶端四肽以GPGQ变异型为主,且主要使用CCR5为辅助受体;2G12、PGT135及PGT 128中和抗体表位呈现不同程度的变异.该研究为进一步开展针对献血人群的艾滋病预防与控制提供了参考数据.

目的 分析阜新市艾滋病病毒1型(HIV-1) env基因C2 ～ V4区序列及代表性广谱单克隆中和抗体的表位变异,为HIV-1变异趋势研究及阐明V3环与病毒生物学特征提供依据.方法 采集2018-2019年在阜新市卫生健康服务中心确证阳性的112例HIV-1感染者全血标本,采用巢式PCR扩增env基因C2～V4区核苷酸序列并测序,采用MEGA软件鉴定分型,采用HIV Database等软件分析V3环顶端四肽、辅助受体、净电荷和特征性氨基酸.结果 获得101条有效基因序列,发现5种V3环顶端四肽类型,其中GPGQ 77条,占76.24％,存在于CRF01_AE、CRF07_BC、CRF65_cpx和G亚型;GPGR 19条,占18.81％,存在于CRF01_AE、CRF07 BC和B亚型;GPGH 3条,GPGK和GPGA各1条,均只存在于CRF01_ AE亚型.辅助受体主要使用CCR5,84条占83.17％.CRF01_AE、CRF07_BC、B、CRF65_cpx和G亚型V3环净电荷数分别为3.28±1.17、3.22±0.92、4.25±0.83、2.50±0.50和3.结合b12和VRC01中和抗体表位氨基酸位点突变率为0～9.90％;295位和332位氨基酸N-糖基化位点缺失率分别为18.81％和14.85％,未发现两者同时缺失的情况.结论 2018-2019年阜新市HIV-1毒株主要是以CCR5为辅助受体的巨噬细胞嗜性非合胞体诱导型病毒,V3环顶端四肽以GPGQ为主,复制速度较慢,逃逸中和抗体能力较低.