目的 研究丹参通络解毒汤含药血清调控转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)的保护作用及机制.方法 体外培养大鼠CMECs,构建缺氧/复氧损伤细胞模型,转染过表达/沉默空白MALAT1慢病毒,将细胞分为过表达空白+中药组、过表达MALAT1+中药组、过表达MALAT1组、沉默空白+中药组、沉默MALAT1组、沉默MALAT1+中药组,分别予相应血清培养,免疫荧光染色检测Beclin-1蛋白表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(SRPK1)、丝氨酸丰富剪接因子1(SRSF1)、血管内皮生长因子(VEGF)及Bax蛋白表达,RT-PCR检测MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达.结果 与过表达空白+中药组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达升高,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),VEGF蛋白表达显著降低(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与过表达MALAT1组比较,过表达MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与沉默空白+中药组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与沉默MALAT1组比较,沉默MALAT1+中药组Beclin-1蛋白表达降低,SRPK1、SRSF1、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),VEGF表达显著升高(P<0.01),MALAT1、SRPK1、SRSF1 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05).结论 上调MALAT1表达可促进缺氧/复氧损伤模型CMECs自噬,丹参通络解毒汤含药血清能通过抑制MALAT1表达抑制自噬、促进血管新生,其机制可能与下调SRPK1、SRSF1表达有关.

目的 观察丹参通络解毒汤对瘀热壅毒、毒损心营证不稳定型心绞痛(unstanble angina,UA)患者的血脂以及血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的影响.方法 选择瘀热壅毒、毒损心营型冠心病不稳定型心绞痛患者60例.将60例患者随机分为两组,对照组30例给予常规西药治疗,观察组30例在对照组治疗基础上加服丹参通络解毒汤治疗,观察两组治疗2个月后的中医证候积分、心电图疗效、心绞痛疗效以及治疗前后血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、ICAM-1和VCAM-1的水平变化.结果 观察后,观察组中医证候积分心电图疗效,心绞痛疗效均较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后两组TC、TG、LDL-C、ICAM-1和VCAM-1水平较治疗前降低, HDL-C水平较治疗前增加,且观察组血脂、黏附因子水平改善程度优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 丹参通络解毒汤治疗瘀热壅毒,毒损心营型冠心病不稳定型心绞痛疗效确切,其作用机制可能与调节血脂代谢、降低ICAM-1和VCAM-1水平有关.

目的 探讨丹参通络解毒汤联合骨髓干细胞移植对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌纤维化的影响及作用机制.方法 采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离和培养骨髓间充质干细胞(BMSCs).经结扎冠状动脉的左前降支(LAD)建立心梗模型.大鼠随机分为假手术组、AMI模型组、BMSCs移植组、中药组(丹参通络解毒汤组)、联合组(丹参通络解毒汤+BMSCs移植组).除假手术组外其余组造模,术后中药组与联合组分别灌胃丹参通络解毒汤,其余各组用等量生理盐水灌胃,1次/d,连续14 d.Masson染色观察心肌组织胶原含量,ELISA法测定血清Ⅲ型前胶原末端肽(PⅢP)、Ⅳ型前胶原末端肽(PⅣP)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)浓度.蛋白印迹法检测心肌组织中内皮细胞蛋白c受体(EPCR)和血栓调节蛋白(TM)的表达水平.采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析.结果 与假手术组比较,各组大鼠EPCR及TM蛋白表达下降,NO水平降低,ET-1、PⅢP、PⅣP水平升高,心肌有不同程度的胶原纤维产生,差异有显著性(P<0.01);与AMI模型组比较,BMSCs移植组、中药组和联合组EPCR和TM蛋白表达及NO水平均显著上升,ET-1、PⅢP及PⅣP水平均降低,胶原纤维产生均减少,差异具有显著性(P<0.01);与BMSCs移植组比较,中药组EPCR和TM蛋白表达及NO水平均上升,ET-1、PⅢP及PⅣP水平均降低,胶原纤维产生均减少,差异具有显著性(P<0.01);与中药组比较,联合组EPCR和TM蛋白表达及NO水平均上升,ET-1、PⅢP及PⅣP水平均降低,胶原纤维产生均减少,差异具有显著性(P<0.01).结论 丹参通络解毒汤联合BMSCs移植能够抑制心肌纤维化产生,其机制可能与上调AMI大鼠心肌EPCR及TM蛋白表达,保护血管内皮功能有关.

目的 运用高效液相色谱法(HPLC)同时测定丹参通络解毒汤中羟基红花黄色素A(HSYA)和丹酚酸B(Sal B))含量.方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,流动相乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长280 nm.结果 HSYA在21.2 ～ 63.3μg/mL呈良好的线性关系(r =0.999 6),平均回收率为99.23％,RSD为1.15％.Sal B在16.8～50.4 μg/mL呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率为99.01％,RSD为1.12％.结论 此方法简便、准确、重复性好,可作为丹参通络解毒汤的质量控制的检测方法.

目的:探讨丹参通络解毒汤对缺血再灌注(ischemia reperfusion,IRI)模型大鼠心肌细胞自噬的作用,并观察其对IRI心肌细胞MALAT1、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路的调节作用.方法:取雄性SD大鼠60只,随机分成5组:空白组,模型组(心肌缺血再灌注),丹参通络解毒汤组,TLR4抑制剂组(TAK-242),丹参通络解毒汤+TLR4抑制剂组.采取结扎左冠状动脉左前降支30 min后松解结扎线30 min的方法建立IRI模型.丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+TLR4抑制剂组以3.9 mL·kg-1的丹参通络解毒汤灌胃,每日1次,空白组、模型组、TLR4抑制剂组给予相同体积的生理盐水灌胃,每日1次.选用酶联免疫吸附法测定血清中磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CK)水平;免疫组织化学法测定心肌组织中LC3Ⅱ蛋白的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定心肌组织中TLR4及NF-κB蛋白的表达,RT-PCR测定MALAT1基因表达.结果:与空白组比较,模型组的心肌细胞损伤明显,血清中CK含量显著升高,LC3Ⅱ、TLR4、NF-κB蛋白和MALAT1基因的表达显著升高(P＜0.01).与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+TLR4抑制剂组、TLR4抑制剂组能明显改善大鼠受损心肌,血清中CK水平明显降低,LC3Ⅱ、TLR4、NF-κB蛋白和MALAT1基因的表达显著降低(P＜0.01),且丹参通络解毒汤组CK水平、LC3Ⅱ、TLR4、NF-κB蛋白和MALAT1基因的表达量低于TLR4抑制剂组.结论:丹参通络解毒汤能够抑制IRI心肌细胞自噬,其作用机制可能与通过下调MALAT1基因表达和抑制TLR4/NF-κB信号通路有关.

目的 观察丹参通络解毒汤药物血清对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管生成的影响,探讨其作用机制.方法 建立CMECs缺氧/复氧损伤模型,将CMECs随机分为空白组、模型组、丹参通络解毒汤药物血清组、3-MA自噬抑制剂组,除空白组外其余各组均置于低糖无血清DMEM培养基中培养,同时置于37℃、94％N2、1％O2、5％CO2培养箱中缺氧2h,换正常DMEM培养基,给氧3 h,再给予相应药物干预.倒置显微镜观察CMECs细胞生长及形态,检测试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、p62及血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫荧光检测CMECs细胞特征性表面标志物蛋白CD34表达.结果 与空白组比较,模型组CMECs细胞坏死程度增加,培养液中LDH含量明显增加(P＜0.01),Beclin 1、VEGF蛋白表达明显升高(P＜0.01,P＜0.05),p62蛋白表达明显降低(P＜0.01),CD34蛋白红色荧光明显减弱;与模型组比较,丹参通络解毒汤药物血清组和3-MA自噬抑制剂组CMECs细胞坏死程度减轻,培养液中LDH含量明显减少(P＜0.01),Beclin 1蛋白表达明显降低(P＜0.01),p62、VEGF蛋白表达明显升高(P＜0.01,P＜0.05),CD34蛋白红色荧光明显增强.结论 丹参通络解毒汤能适度抑制缺氧/复氧CMECs细胞自噬,从而促进血管生成,达到保护CMECs细胞的目的.

目的 观察丹参通络解毒汤联合内皮祖细胞(EPCs)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其可能的作用机制.方法 密度梯度离心法及差数贴壁法分离EPCs,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、EPCs组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+EPCs组(联合组)、丹参通络解毒汤+EPCs+PI3K阻断剂组(阻断剂组),每组10只.分别给予相应处理,14 d后生物信号采集系统测定大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,Western blot检测大鼠心肌组织p-PI3K、p-Akt蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织损伤明显,心肌纤维排列紊乱、肿胀,炎性细胞大量浸润,部分心肌细胞坏死;左心室形成压(LVDP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室射血分数(LVEF)明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.01).与模型组比较,EPCs组、丹参通络解毒汤组及联合组心肌组织损伤程度均有不同程度改善;LVDP、LVSP、LVEF明显升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),且联合组效果优于EPCs组和丹参通络解毒汤组(P<0.01).与EPCs组、丹参通络解毒汤组、联合组比较,阻断剂组心肌组织损伤程度加重,LVDP、LVSP、LVEF明显降低,p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 丹参通络解毒汤联合EPCs移植可保护大鼠MIRI,其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路有关.

目的 观察丹参通络解毒汤对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)/成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)通路的影响,探讨其对小鼠肺纤维化的影响及机制.方法 取C57B/L小鼠50只随机分为空白组、模型组、1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+TWEAK/Fn14抑制剂PDL192组.模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠气管内注射博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型.造模成功后,空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水10 mL·kg-1;1,25(OH)2D3组小鼠每日经腹腔注射1,25(OH)2D35μg·kg-1;丹参通络解毒汤组小鼠每日灌胃丹参通络解毒汤汤剂0.039 mL·g-1(按成人60 kg体质量计算,相当于生药15.65 g·kg-1);丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠每日灌胃丹参通络解毒汤汤剂0.039 mL·g-1,并经腹腔注射PDL1923 mg·kg-1;各组小鼠均每日给药1次,连续给药28 d;末次给药后12 h测体质量,然后经腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉、固定,采集肺支气管肺泡灌洗液(BALF),开胸取肺组织,测肺质量,计算小鼠肺系数.采用酶标仪检测5组小鼠BALF中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.苏木精-伊红染色和Masson三色法染色法观察5组小鼠肺组织病理学变化.实时荧光定量聚合酶链式反应法检测5组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达.Western blot法检测5组小鼠肺组织炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及肺组织TWEAK/Fn14通路因子TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、母亲信号蛋白同源物3(Smad3)、磷酸化母亲信号蛋白同源物3(p-Smad3)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)、酪氨酸磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白相对表达量.结果 空白组小鼠肺组织结构正常,无结缔组织增生,无明显胶原沉积;模型组小鼠肺组织基本形态结构被破坏,支气管结构较为模糊,部分支气管上皮细胞坏死,间质周围炎症细胞浸润,肺组织有大量的胶原沉积;1,25(OH)2D3组小鼠肺组织基本形态结构被破坏,上皮细胞坏死,坏死区域肺泡腔较为狭窄,内含大量细胞碎片和炎症细胞,部分区域可见成纤维细胞增生,胶原沉积明显减少;丹参通络解毒汤组小鼠部分区域肺组织结构被破坏,支气管结构较为完整清晰,部分肺泡结构模糊,肺泡腔狭窄,间质及周围未见水肿或炎症细胞浸润,胶原沉积明显减少;丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织结构较为正常,各级支气管结构完整清晰,肺泡结构较为清晰,肺泡腔内可见少量炎症细胞散在分布,间质及周围未见水肿或炎症细胞浸润,胶原沉积明显减少.空白组、模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组小鼠肺系数显著增高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数显著降低(P<0.05);与1,25(OH)2D3组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数显著降低(P<0.05);1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺系数与丹参通络解毒汤组比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组、1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组小鼠BALF中IL-1β、TNF-α、IL-4水平显著升高(P<0.05),丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、TNF-α、IL-4水平显著降低(P<0.05);与1,25(OH)2D3组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、IL-4水平显著降低(P<0.05);与丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠BALF中IL-1β、IL-4水平显著降低(P<0.05).与空白组比较,模型组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量及1,25(OH)2D3组小鼠肺组织TWEAK mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组小鼠肺组织Fn14 mRNA相对表达量及丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05).1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1 mRNA相对表达量各组间比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白组比较,模型组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1蛋白相对表达量及1,25(OH)2D3组、丹参通络解毒汤组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);与1,25(OH)2D3组比较,丹参通络解毒汤组和丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织IL-1β蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);与丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织IL-1β 蛋白相对表达量显著降低(P<0.05).与空白组比较,模型组小鼠肺组织中TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),1,25(OH)2D3组小鼠肺组织中TWEAK、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织中TWEAK、α-SMA、p-Smad3、STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,1,25(OH)2D3组小鼠肺组织p-Smad3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织TWEAK、Fn14、TGF-β1、α-SMA、p-Smad3、STAT3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05).丹参通络解毒汤组、丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织Fn14、TGF-β1、α-SMA、Smad3、p-Smad3、p-STAT3蛋白相对表达量及丹参通络解毒汤小鼠肺组织TWEAK、STAT3蛋白相对表达量与1,25(OH)2D3组比较差异无统计学意义(P>0.05);丹参通络解毒汤+PDL192组小鼠肺组织中TWEAK、STAT3蛋白相对表达量与1,25(OH)2D3组比较显著降低(P<0.05).结论 丹参通络解毒汤能够减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制肺组织炎症和TWEAK/Fn14信号通路有关.

目的 探讨丹参通络解毒汤(DSTLJD)联合内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)移植对心肌缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)模型大鼠促血管新生作用的影响及其机制.方法 采用密度梯度离心法及差数贴壁法分离和培养EPCs,采用免疫荧光法鉴定EPCs.通过结扎左冠状动脉左前降支的方法建立IRI模型,采用随机数字表法分为SH组(假手术组)、IRI组(模型组)、EPCs组(EPCs移植组)、DSTLJD组(丹参通络解毒汤组)、DSTLJD+EPCs组(丹参通络解毒汤+EPCs移植),每组10只.4周后,采用HE染色法观察心肌组织的病理形态,用免疫组化法测定各组大鼠心肌微血管计数(microvessel count,MVC)、心肌微血管密度(microvessel density,MVD),并检测各组大鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的蛋白表达.结果 与IRI组比较,EPCs组、DSTLJD组、DSTLJD+ EPCs组大鼠细胞肿胀及坏死程度减轻,MVC、MVD及VEGF、bFGF蛋白表达显著增高(P＜0.01);与EPCs组相比,DSTLJD组、DSTLJD+ EPCs组大鼠炎性细胞浸润及细胞肿胀程度轻微,MVC、MVD及VEGF、bFGF蛋白表达增高(P＜0.05,P＜0.01);与DSTLJD组相比,DSTLJD+ EPCs组大鼠肌束排列较整齐,无明显细胞坏死,MVC、MVD及VEGF、bFGF蛋白表达明显增高(P＜0.01).结论 丹参通络解毒汤联合EPCs移植可能通过上调VEGF、bFGF的表达,促进心肌IRI大鼠的血管新生,从而保护IRI心肌.

目的 观察丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响,探讨其治疗MIRI的作用机制.方法 将大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、丹参通络解毒汤组和自噬抑制剂组,除空白组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型,假手术组只穿线不结扎.造模结束后,丹参通络解毒汤组每日予丹参通络解毒汤(15.66 g/kg)灌胃,其余各组大鼠均灌胃等体积生理盐水,连续7 d.自噬抑制剂组术后腹腔注射3-甲基腺嘌呤溶液(15 mg/kg),透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平;ELISA检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;免疫组化检测大鼠心肌组织LC3蛋白表达;RT-PCR检测心肌组织Beclin-1 mRNA表达;Western blot检测大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1和LC3蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列不整齐,结构破裂,有自噬小体形成;血清LDH、CK-MB和MDA水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.01);心肌组织LC3蛋白表达显著升高(P<0.01),Beclin-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),Atg5、Beclin-1蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P<0.01).与模型组比较,丹参通络解毒汤组大鼠心肌纤维排列整齐,线粒体轻微损伤,自噬小体数量减少;血清LDH、CK-MB和MDA水平显著降低,SOD水平显著升高(P<0.01);心肌组织LC3蛋白表达显著降低(P<0.01),Beclin-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),Atg5、Beclin-1蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(P<0.01).结论 丹参通络解毒汤可减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,保护受损心肌细胞,其机制可能与抑制自噬有关.