人类白细胞抗原-G（human leucocyte antigen G，HLA-G）作为非经典的主要组织相容性复合物Ⅰ类分子，在母-胎界面的绒毛膜外滋养层细胞上特异性表达。妊娠期间，胎儿同种异源的绒毛膜外滋养细胞侵入子宫黏膜，却免于母体来源的免疫细胞攻击，其中HLA-G起到极其关键的作用。关于HLA-G在母-胎界面特殊调控方式的研究，特别是与各类免疫细胞及膜表面受体作用的分子机制，引起学者的广泛关注。本文将着重对HLA-G在母-胎界面的表达、调节及与相关免疫细胞作用机制进行综述。

目的:评价脾脏浆细胞样树突状细胞(pDCs)活化对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:动物实验：SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠36只，10周龄，体质量22～27 g，按照随机数字表法分为3组( n＝12)：假手术组(Sham组)、心肌缺血组(MI组)和心肌缺血再灌注组(MI/R组)。MI组阻断小鼠左冠状动脉前降支(LAD)40 min，MI/R组阻断LAD 40 min再灌注1 h，Sham组仅穿线不结扎。造模成功后，随机选取各组3只摘取心脏采用TTC-亚甲蓝双染色法测定心肌梗死面积，随机选取各组3只摘取心脏采用HE染色法观察心肌组织病理学结果，其余各组6只先采集腹主动脉血样，采用ELISA法检测血浆干扰素α(IFN-α)浓度，再摘取心脏后收集小鼠心脏灌洗液(CP)。细胞实验：SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠12只，10周龄，体质量22～27 g，采用免疫磁珠法分离脾脏pDCs(阳性细胞比例>85%)，采用随机数字表法分为Sham组CP刺激pDCs组(pDCs＋CP-Sham组)、MI组CP刺激pDCs组(pDCs＋CP-MI组)、MI/R组CP刺激pDCs组(pDCs＋CP-MI/R组)和PBS刺激pDCs组(pDCs＋PBS组)，分别采用Sham组、MI组、MI/R组小鼠CP和PBS刺激8 h。采用流式细胞术检测各组pDCs表面CD45、共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合物Ⅱ(MHC Ⅱ)分子的表达，采用ELISA法检测各组细胞培养上清液IFN-α的浓度。 结果:动物实验：与Sham组和MI组比较，MI/R组小鼠心肌梗死体积百分比升高，血浆IFN-α浓度增加( P<0.05)，心肌细胞出现明显空泡变性，心肌纤维断裂严重，大量炎症细胞浸润；Sham组各指标与MI组比较差异无统计学意义( P>0.05)。细胞实验：与pDCs＋CP-Sham组比较，pDCs＋CP-MI组CD80、CD86和MHCⅡ分子表达上调( P<0.05)，pDCs＋CP-MI/R组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与pDCs＋CP-MI/R组比较，pDCs＋CP-MI组上述指标表达上调( P<0.05)；与pDCs＋CP-Sham组和pDCs＋CP-MI/R组比较，pDCs＋CP-MI组细胞培养上清液IFN-α浓度增加( P<0.05)，pDCs＋CP-Sham组与pDCs＋CP-MI/R组IFN-α浓度比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:小鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与心肌缺血后脾脏pDCs受刺激活化产生IFN-α有关。

目的:探讨抗原加工相关的转运蛋白1(TAP1)是主要组织相容性复合体-Ⅰ(MHC-Ⅰ)类抗原呈递途径所必需，在肿瘤免疫学监测重要标志性作用。方法:通过慢病毒转导3种胶质瘤细胞株(U87、U251和GL261)中过表达和敲低TAP1的表达水平，实验分为正常对照组、慢病毒过表达空载体对照组、慢病毒敲除空载体对照组、TAP1过表达组和敲除组；蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链反应(qPCR)检测TAP1和MHC-Ⅰ的表达和相互关系；使用Transwell系统检测细胞增殖和侵袭功能；流式细胞检测MHC-Ⅰ在TAP1过表达和敲低的GL261细胞表面的表达；免疫组织化学检测TAP1对肿瘤免疫应答的作用。采用方差分析做多组比较、独立样本 t检验做两两比较。 结果:TAP1过表达和敲低3种细胞系成功，细胞计数试剂盒(CCK-8)吸光度中G261细胞的增殖每组无变化和侵袭功能通过 t检验，差异无统计学意义( t＝1.265，df＝4， P>0.05)；TAP1的过表达和胶质瘤细胞的敲低表明TAP1和MHC-Ⅰ表达 t检验，差异有统计学意义( t＝4.560，df＝4， P<0.05)；TAP1过表达和敲低G261细胞与体内存活和CD8 ＋的免疫化学染色相关( t＝5.806，df＝4， P<0.05)；MHC-Ⅰ类在TAP1过表达和敲低GL261细胞表面表达。 结论:TAP1可能通过调节CD8 ＋T细胞而成为胶质瘤的关键抑癌基因。

目的:针对猫对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的高度易感性，筛选猫主要组织相容性复合物I类（major histocompatibility complex class I，MHC I）分子FLA-K*00701呈递SARS-CoV-2来源的多肽，并探索复合物制备方法，为研究猫感染SARS-CoV-2的T细胞免疫特征打下基础。方法:对可能与FLA-K*00701具有亲和力的SARS-CoV-2来源多肽进行预测并合成。采用稀释复性法，使猫白细胞抗原（feline leukocyte antigen，FLA）I类多肽复合物在体外合适环境下复性，纯化复合物后，用坐滴蒸汽扩散技术筛选晶体的生长条件，X射线衍射区分收集的蛋白结晶是否为晶体。结果:成功筛选到一条与FLA-K*00701具有高度结合能力的SARS-CoV-2来源多肽，并得到高纯度FLA-K*00701蛋白，初步筛选得到FLA多肽复合物晶体，X射线衍射分辨率为2.7?。结论:首次在SARS-CoV-2易感动物猫中筛选到与其FLA I具有高度亲和力的多肽，并得到高分辨率的复合物蛋白晶体，本研究为进一步探索猫抵抗SARS-CoV-2的细胞免疫机制及SARS-CoV-2多肽疫苗的研发提供有价值的参考。

目的 探究肺炎支原体肺炎患儿血清主要组织相容性复合物I链相关基因A(MICA)、骨桥蛋白(OPN)水平及其与反复呼吸道感染的相关性.方法 选取该院2019年3月至2021年3月收治的肺炎支原体肺炎患儿106例作为研究组,另选取同期于该院进行体检的健康儿童106例作为对照组,根据肺炎支原体肺炎患儿是否发生反复呼吸道感染分为反复呼吸道感染发生组和反复呼吸道感染未发生组;使用全自动微生物鉴定系统和纸片扩散试纸进行病原菌检测以及耐药性试验;血清MICA、OPN水平检测采用酶联免疫吸附试验;采用多因素Logistic回归分析影响肺炎支原体肺炎反复呼吸道感染发生的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MICA、OPN单独及联合检测对肺炎支原体肺炎患儿发生反复呼吸道感染的预测价值.结果 106例肺炎支原体肺炎患儿共分离出116株菌株,其中革兰阴性菌77株(66.38％),包括流感嗜血杆菌29株(25.00％),肺炎克雷伯菌17株(14.66％),鲍曼不动杆菌14株(12.07％),铜绿假单胞菌8株(6.90％),阴沟肠杆菌6株(5.17％),其他菌3株(2.59％);革兰阳性菌39株(33.62％),包括金黄色葡萄球菌16株(13.79％),表皮葡萄球菌10株(8.62％),肠球菌6株(5.17％),溶血葡萄球菌5株(4.31％),其他菌2株(1.72％).流感嗜血杆菌耐药率较高的为头孢哌酮,占75.86％,肺炎克雷伯菌耐药率较高的为氨苄西林,占88.24％.16株金黄色葡萄球菌中,对红霉素耐药12株(75.00％),对环丙沙星耐药8株(50.00％),对四环素耐药6株(37.50％),对苯唑西林耐药4株(25.00％),对克林霉素耐药2株(12.50％),未发现对万古霉素和利奈唑胺耐药的金黄色葡萄球菌.研究组血清MICA、OPN水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05)o 46例患儿发生反复呼吸道感染,60例患儿未发生反复呼吸道感染.反复呼吸道感染发生组使用药物不当比例,血清MICA、OPN水平均明显高于反复呼吸道感染未发生组,差异均有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,MICA水平升高(95％CI:1.782～3.949)、OPN水平升高(95％CI:1.989～5.012)均为肺炎支原体肺炎发生反复呼吸道感染的危险因素(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清MI-CA预测肺炎支原体肺炎反复呼吸道感染的曲线下面积(AUC)为0.899(95％CI:0.836～0.962),截断值为153.702 pg/mL,灵敏度为76.51％,特异度为87.24％.血清OPN预测肺炎支原体肺炎反复呼吸道感染的AUC 为 0.898(95％CI:0.835～0.960),截断值为 101.231 μg/mL,灵敏度为 78.29％,特异度为 84.41％.二者联合检测预测肺炎支原体肺炎反复呼吸道感染的AUC为0.954(95％CI:0.918～0.989),灵敏度为88.35％,特异度为80.24％.二者联合检测预测肺炎支原体肺炎患儿发生反复呼吸道感染的AUC优于血清MICA、OPN各自单独预测的AUC(Z联合vs.MICA=2.624、Z联合vs.OPN=2.735,P＜0.05).结论 肺炎支原体肺炎患儿血清MICA、OPN水平明显升高,二者与反复呼吸道感染密切相关.

所有有核细胞均表达主要组织相容性复合物I和干扰素-γ(IFNγ)受体,但上皮细胞所具有的IFNγ信号传导或通过主要组织相容性复合物I进行抗原呈递的特异性功能尚未被探索.

目的 探讨CD8+细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)亚群表面T细胞受体(TCR)和NKG2D(即CD314)抗原识别受体在发挥抗肿瘤特别是卵巢癌免疫效应中的功能.方法 CIK细胞由卵巢癌志愿者外周血单个核细胞(PBMCs)制备而成,采用磁性细胞分选(MACS)技术从培养1周的CIK细胞中富集CD8+亚群并继续培养扩增,获得高度均质性的CD8+CIK细胞后进行表型检测.将CD8+CIK细胞分别在CD3抗体和NKG2D抗体包被的培养板中进行培养,以CD137为CD8+CIK细胞激活标志物,应用流式细胞术(FCM)检测CD137表达,评估CD8+CIK细胞的激活状况.并检测经CD3抗体、NKG2D抗体刺激或与红白血病细胞株人类白细胞抗原(HLA)-主要组织相容性复合体-Ⅰ类相关分子(MIC)A/B+K562细胞共培养对CD8+CIK细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)的影响.选用 K562细胞作为 CD8+CIK 细胞作用的靶细胞,应用 NKG2D 抗体阻断 NKG2D与MICA/B相互作用,测试激活的CD8+CIK细胞在NKG2D阻断状态下对靶细胞K562的杀伤能力.结果 TCR能够提供CD8+CIK细胞的激活信号,而NKG2D不具备该功能.外周血单个核细胞(PBMC)中CD8+细胞占24.2%,该细胞群中 NKG2D阳性率为16.3%.CIK培养后CD8+细胞比例增至88.1%,这些CD8+CIK细胞均表达NKG2D,但其中仍含10% 左右的CD8-细胞;CD3抗体组中CD137阳性率为88.8%;CD3抗体刺激后24h,约50% 的CD8+CIK细胞呈IFN-γ染色阳性,而NKG2D抗体刺激后,IFN-γ阳性率(4.8% 和5.6%)高于对照组(2.9%),但明显低于CD3抗体;CD8+CIK细胞经CD3抗体刺激24h后IFN-γ检测阳性率为41.9%,但与K562细胞按1:1比例共培养后阳性率仅为0.5%.CD8+CIK细胞对K562细胞具有杀伤功能,即能够以HLA非限制的方式杀伤靶细胞.而在CD3-TCR复合物激活的CD8+CIK细胞上阻断NKG2D与 MICA/B相互作用后,CD8+CIK细胞杀伤活性受到抑制.结论 CD8+CIK细胞的激活主要通过CD3-TCR受体复合物,而非通过NKG2D受体.CD8+CIK细胞的NKG2D受体与靶细胞表面相应配体结合后可以介导 HLA非限制的抗癌功能,但NKG2D受体的此种作用比较有限.

I型主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex class I, MHC I)是造成免疫排斥的重要分子, 该研究利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspersed short palindromic repeats)技术靶向其β2微球蛋白(beta-2 microglobulin, B2M)亚基实现MHC I的敲除, 并在分子和细胞水平进行验证.设计针对B2M基因的gRNA(guide RNA)并构建对应的CRISPR/Cas9基因敲除质粒, 通过电穿孔转染技术将同时带有Cas9蛋白与gRNA骨架的质粒瞬时转入HEK293细胞中进行蛋白表达与基因组核酸切割, 流式分选得到HEK293 B2M阴性细胞, 提取其基因组并对gRNA靶向区域与脱靶区域进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR), 将PCR产物连接T载体测序检测基因打靶与脱靶情况.同时, 利用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)与实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction, Real-time PCR)测定B2M基因在RNA水平的表达.综上所述, 该研究发现了一种利用CRISPR/Cas9技术快速便捷、低成本的可用于敲除B2M基因的方法, 经检测可使目的细胞中B2M基因发生移码、插入、缺失、单碱基突变, 且未发现脱靶现象, 这在未来解决免疫排斥相关难题上意义重大.

目的 研究透明质酸(HA)修饰的聚合物纳米粒共递送佐剂和抗原对小鼠骨髓树突状细胞(BMDCs)的成熟与活化效应.方法 以HA修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)及阳离子脂质DOTAP为纳米载体(DOTAP-PLGA)共递送佐剂CpG与模型抗原卵清蛋白(OVA),其中CpG共价结合到纳米粒表面的HA上,OVA物理共混于DOTAP-PLGA纳米载体中.采用透射电子显微镜和动态光散射表征纳米粒;考察纳米粒中CpG和OVA的体外释放情况;利用流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜研究纳米粒在小鼠BMDCs中的摄取和分布;利用流式细胞术和酶联免疫吸附实验分别评价小鼠BMDCs的成熟和细胞因子的表达.结果 制备了共负载CpG和OVA的纳米粒CpG-HA-OVA-PLGA,平均粒径为(305.1±2.2)nm,多分散系数为0.203,透射电子显微镜可观察到经HA修饰的纳米粒有明显的核-壳结构.细胞实验结果表明,CpG-HA-OVA-PLGA纳米粒可被小鼠BMDCs有效摄取并促进CpG的溶酶体释放和抗原OVA的胞质递送;与游离OVA组和游离OVA+CpG组相比,CpG-HA-OVA-PLGA纳米粒组可显著提高BMDCs的共刺激分子CD86和CD40(均P<0.01)、主要组织相容性复合物I以及细胞因子肿瘤坏死因子-α(均P<0.001)的表达.结论 HA修饰的CpG和OVA的纳米粒共递送载体能有效促进树突状细胞的成熟与活化,为研制新型疫苗载体共递送抗原和佐剂提供了依据.

目的 探讨胸腔镜下肺癌根治术与传统开胸肺癌根治术对老年肺癌病人围术期T淋巴细胞亚群及肿瘤微转移的影响.方法 2015年6月至2017年6月三门峡市中心医院收治的限期行肺癌根治术病人,选取75例行胸腔镜肺癌根治术病人作为胸腔镜组,93例行传统开胸肺癌根治术病人为开胸组,比较两组手术情况、术后疼痛视觉模拟评分(VAS)、T淋巴细胞亚群、NK细胞水平及基质金属蛋白酶-7mRNA(MMPs-7mRNA)、可溶性主要组织相容性复合体I类相关分子A(sMICA)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平.结果 两组手术时间、淋巴结清扫数目比较差异无统计学意义(P>0.05);胸腔镜组较开胸组术中出血量、术后引流管放置时间、术后引流量及术后住院时间均明显减少(P<0.05),术后并发症发生率明显降低(P<0.05).胸腔镜组术后1 d、术后3 d、术后7 d的疼痛VAS评分均明显低于开胸组(P<0.05).术后3 d,胸腔镜组CD+4、CD+8、NK细胞及CD+4/CD+8水平分别为(32.46±4.21)％、(27.69±3.57)％、(23.15±4.45)％、(1.17±0.23),均明显高于开胸组的(27.57±2.79)％、(22.28±3.49)％、(20.11±3.12)％、(0.97±0.26),差异有统计学意义(P<0.05).术后3 d,胸腔镜组MMP-7mRNA、sMICA、VEGF水平分别为(20.41±4.56)、(291.54±67.87)pg/mL、(1.64±0.43)ng/mL,均明显低于开胸组的(24.55±5.36)、(322.58±74.43)pg/mL、(1.89±0.51)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05).结论 胸腔镜肺癌根治术治疗较传统开胸肺癌根治术可能有着一定优势,能够促进围术期免疫功能恢复,降低血清肿瘤微转移因子水平.