目的:探讨小续命汤治疗中风的药效物质及作用机制.方法:基于UHPLC-Q Exactive Plus HRMS鉴定小续命汤中的成分,网络药理学预测小续命汤治疗中风的活性成分及潜在机制,鹌鹑胚绒毛尿囊膜(qCAM)实验可视化小续命汤的促血管生成作用.结果:从小续命汤中鉴别出麻黄碱、升麻素苷和黄芩苷等68个成分,包括氨基酸类、生物碱类、黄酮类、香豆素类、萜类、丁基苯肽类等化合物;成分与中风的交集靶点建立了蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,共筛选出IL-6、TNF、EGFR、PDGFRB和PIK3CA等33个核心靶点;麻黄碱、黄芩苷和人参皂苷Rg1等57种活性成分;核心靶点的富集分析表明小续命汤治疗中风可能主要通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)和血管生成因子(VEGF)信号通路等与血管生成相关的通路.qCAM实验中阳性对照组(Gas,0.02 mg)和小续命汤高剂量组(XXMD-H,2 mg,折合生药量16.69 mg)的血管相对面积比空白组显著增加(P＜0.05),较好地可视化了小续命汤促进血管生成.结论:本研究通过结合UHPLC-Q Exactive Plus HRMS和网络药理学的方法阐明了小续命汤治疗中风的药效物质,得出潜在作用机制可能与作用于PI3K-AKT、VEGF等信号通路促进血管生成有关,并通过qCAM实验评价其促进血管生成活性,RT-qPCR进一步验证相关靶点,为小续命汤的质量研究与进一步开发提供参考.

目的:探讨人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型脑片神经元自噬小体相关蛋白表达的影响及其分子机制。方法:选取6周龄SD大鼠断头取脑制备海马脑片，将海马脑片随机分为空白对照组、模型组及低、中、高浓度Rg1组，每组10张脑片。模型组人工脑脊液中加入Aβ 1-42(终浓度5 μmol/L)处理2 h造模，低、中、高浓度Rg1组加入Aβ 1-42(终浓度5 μmol/L)作用2 h造模后分别加入Rg1致终浓度分别为60 μmol/L、120 μmol/L、240 μmol/L作用3 h；空白对照组不给予任何干预药物。干预结束后采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组海马脑片病理学改变情况；采用透射电镜检测各组海马脑片自噬小体情况；采用Western blot检测各组脑片自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平以及Aβ 1-42和Shank蛋白表达水平。 结果:HE染色结果显示，模型组海马神经元排列紊乱，存在神经元死亡和缺失，Rg1各组海马神经元排列及缺失情况较模型组改善，以高浓度Rg1组改善最明显；透射电镜结果显示，模型组脑片自噬小体较空白对照组明显增多，Rg1各组脑片中自噬小体均较模型组减少。蛋白质印迹结果显示，与空白对照组比较，模型组脑片Shank1、P62和LC3-Ⅰ蛋白水平减少(均 P<0.05)，Aβ 1-42、LC3-Ⅱ蛋白水平升高(均 P<0.05)；与模型组比较，各Rg1组脑片Shank1、P62和LC3-Ⅰ蛋白表达水平均升高(均 P<0.05)、Aβ 1-42、LC3-Ⅱ蛋白水平均降低(均 P<0.05)，其中以高浓度Rg1组最明显。 结论:人参皂苷Rg1可能通过上调AD大鼠模型海马脑片Shank1、P62、LC3-Ⅰ蛋白表达，抑制自噬作用，发挥大脑神经元的保护作用。

目的:探讨人参皂苷Rg1(GS-Rg1)调控间充质干细胞分泌外泌体(MSC-Exo)及对血管生成相关微小RNAs(miRNAs)表达的影响。方法:将人脐带血间充质干细胞(hUCBMSCs)分为实验组和对照组，实验组加入终浓度为40 mg/L的GS-Rg1，对照组加入等体积的PBS，均培养24 h。采用透射电子显微镜观察MSC-Exo形态，蛋白免疫印迹法鉴定其特征性表面标志物，二辛丁酸蛋白定量法检测MSC-Exo浓度，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MSC-Exo中8种与血管新生相关miRNAs的表达。结果:培养24 h后，可见呈圆形膜囊泡结构的MSC-Exo。MSC-Exo特征性表面标志物CD9、CD63和TSG101的表达均呈阳性。干预24 h后，实验组与对照组MSC-Exo蛋白浓度分别为(1.080±0.019)μg/μl和(0.881±0.032)μg/μl，差异有统计学意义( P<0.01)。实验组miR-126-3p、miR-21、miR-146a-5p、miR-126b-5p表达显著高于对照组，miR-16-5p表达低于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:GS-Rg1能够促进MSC-Exo的分泌，并能增强Exo内与血管生成相关miRNAs的表达，促进血管新生。

目的:利用动物实验、网络药理学与分子对接技术研究人参-三七-川芎药对延缓心脏衰老的作用机制。方法:将小鼠按随机数字表法分为空白对照组、衰老模型组、二甲双胍组、中药组。除空白对照组外，其余各组小鼠采用皮下注射D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型。2周后，二甲双胍组灌胃二甲双胍混悬液150 mg/kg，中药组灌胃人参、三七、川芎冻干粉溶液650 mg/kg，空白对照组与衰老模型组灌胃等体积超纯水，1次/d，6次/周，连续灌胃10周。采用PCR检测心脏组织端粒酶蛋白催化亚基（TERT）mRNA水平，采用免疫组化染色观察心脏组织p53表达，采用HE染色观察心脏组织形态。检索TCMSP、Swiss Target Prediciton数据库中人参、三七、川芎的活性成分和靶点；利用TTD、OMIM、Gene、HAGR、DisGeNET数据库筛选心脏衰老靶点；将药物与疾病靶点取交集后得到人参-三七-川芎活性成分作用心脏衰老靶点；采用STRING数据库、Cytoscape 3.8.0软件构建交集靶点PPI网络，筛选核心靶点；利用FunRich软件对核心靶点进行细胞组分、分子功能、生物过程及通路富集分析；运用Schr?dinger Maestro软件对药物活性成分与核心靶点进行分子对接，使用PyMOL2.1软件将对接结果可视化。结果:实验结果表明，人参-三七-川芎可明显改善心脏衰老小鼠心脏组织损伤，升高TERT mRNA水平，降低p53阳性表达。共获得人参-三七-川芎活性成分32个，共对应637个靶点基因；心脏衰老靶点263个，药物活性成分靶点与心脏衰老交集靶点67个，筛选得到核心靶点31个。富集分析显示，分子功能与转录因子活性、蛋白酪氨酸激酶活性有关；生物过程涉及信号转导、细胞交流；信号通路涉及PDGFR-beta、PI3K-Akt、S1P1、Glypican、TRAIL、Glypican 1通路等。分子对接显示，人参-三七-川芎药对中山柰酚、苏齐内酯、人参皂苷Rg5和p53结合能力较强。结论:人参-三七-川芎可通过抑制p53表达延缓心脏衰老，可为益气活血药延缓心脏衰老的作用机制研究提供依据。

目的:验证人参皂苷Rg1通过长链非编码RNA(lncR)-Malat1/微小RNA(miR)-124-3p/层粘连蛋白γ1(Lamc1)信号轴调控星形胶质细胞(AS)促进脊髓损伤修复。方法:原代AS来源于新生大鼠的脑组织(补充组织来源)。使用免疫荧光染色鉴定细胞纯度。通过细胞转染分别改变lncR-Malat1和miR-124-3p在AS中的表达量，使用实时荧光定量聚合酶联反应技术(RT-qPCR)检测lncR-Malat1、miR-124-3p和Lamc1的基因表达变化。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-Malat1与miR-124-3p之间存在靶向结合位点。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测最有利于AS生长的人参皂苷Rg1浓度。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测人参皂苷Rg1对AS分泌神经生长因子(NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)表达量的影响及lncR-Malat1表达量改变后对人参皂苷Rg1该功能的影响。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:lncR-Malat1与miR-124-3p的基因表达存在负相关性(3.152±0.128比1.046±0.089、0.580±0.023比1.212±0.029， t＝30.240、38.180， P<0.05)。miR-124-3p模拟物(mimic)使野生型Malat1(Malat1-wt)的荧光素酶活性显著降低(1.086±0.040比0.532±0.043， t＝20.900， P<0.05)，而突变型Malat1(Malat1-mut)的荧光素酶活性无明显改变(1.070±0.016比1.092±0.036， t＝1.266， P>0.05)。miR-124-3p mimic使AS中Lamc1的基因表达较NC组下降(0.512±0.023比1.260±0.045， t＝36.330， P<0.05)。小干扰RNA(siRNA)-Malat1转染组的Lamc1表达低于NC组(0.503±0.003比1.042±0.094， t＝12.870， P<0.05)，而加用miR-124-3p抑制剂(inhibitor)共转染逆转了这一抑制作用(2.258±0.134比0.503±0.003， t＝29.350， P<0.05)。人参皂苷Rg1干预AS的最佳浓度为40 μg/ml[(90.950±0.031)%， F＝3.875， P<0.05]。人参皂苷Rg1能够上调AS神经营养因子NGF、bFGF、GDNF(0.856±0.037比0.682±0.027、1.118±0.162比0.713±0.009、1.110±0.094比0.754±0.013， t＝4.303、6.587、6.493， P<0.05)以及有利于轴突再生的细胞外基质LN、FN(0.951±0.043比0.655±0.030、1.159±0.077比0.745±0.034， t＝8.573、9.824， P<0.05)的蛋白表达，而这一作用受lncR-Malat1调控(0.528±0.018比0.856±0.037、0.511±0.021比1.118±0.162、0.421±0.026比1.110±0.094、0.519±0.042比0.951±0.043、0.550±0.039比1.159±0.077， t＝13.850、6.441、12.220、12.510、12.300， P<0.05)。 结论:人参皂苷Rg1通过lncR-Malat1/miR-124-3p/Lamc1信号轴上调AS表达NGF、bFGF、GDNF、LN、FN并促进脊髓损伤修复。

目的:利用网络药理学和体外细胞实验,探究人参皂苷Rg1治疗多发性骨髓瘤(MM)的作用机制.方法:利用 TTD、DisGeNet、GeneCards、PharmGKB、PubChem、Super-PRED、PharmMapper预测MM靶标,利用CTD和SymMap数据库预测人参皂苷Rg1靶标,取交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用网络.基于基因本体(GO)和KEGG-pathway数据库,富集Rg1治疗MM的主要生物功能和信号通路.分子对接验证核心靶点与Rg1之间的结合能力.利用CCK-8、流式细胞术、Western blot实验,分别检测不同剂量人参皂苷Rg1(5、10、20 μmol/L)对RPMI 8226细胞的细胞活性、凋亡率、ROS水平及核心作用靶点Caspase3、Bax、Bc1-2、和NF-κB p65的相对表达.结果:筛选得到215个Rg1-MM靶点.GO和KEGG富集分析提示Rg1改善MM的作用机制可能涉及氧化应激、细胞凋亡及炎症相关信号通路.分子对接提示Rg1可能通过调控NFKB1、STAT3、AKT1、MAPK3、CASP3、BCL2等靶点发挥效用.体外实验表明,与对照组比较,Rg1组(5、10、20 μmol/L)可显著抑制RPMI 8226细胞增殖(P＜0.01)、促进细胞凋亡(P＜0.01)和ROS产生(P＜0.01),同时抑制NF-κB信号通路的活化(P＜0.05).结论:人参皂苷Rg1对MM有潜在的治疗作用,能够调节RPMI 8226细胞的氧化应激、细胞凋亡和增殖,其作用机制涉及对NF-κB信号通路的调控.

目的 基于Delta样配体4(delta-like ligand 4,DLL4)/Notch1信号通路探究人参皂苷Rg-3对氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(azoxymethane/dextran sulphate sodium,AOM/DSS)诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠血管形成机制.方法 48只C57BL/6J APCMin/+小鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg-3组(10 mg/kg),每组16只.建立AOM/DSS诱导的结直肠癌模型,采集腹主动脉血与完整结直肠组织,检测血常规与炎症指标,HE染色观察肠组织形态,免疫组化、Western blotting检测肠组织DLL4、Notch 1表达.肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)分为对照组、人参皂苷Rg-3组、人参皂苷Rg-3+DLL4组,通过MTT、克隆形成、划痕、Transwell与血管形成实验检测细胞增殖、迁移、血管形成能力,Western blotting检测DLL4/Notch信号通路、血管形成相关分子表达情况.结果 与对照组相比,模型组、人参皂苷Rg-3组RBC、Hct、Hb水平降低(P＜0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、DLL4、Notch1表达水平升高(P＜0.05);与模型组相比,人参皂苷Rg-3组RBC、Hct、Hb水平提高(P＜0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、DLL4、Notch1 表达水平下降(P＜0.05),肿瘤数量、2～3.5 mm 及＞3.5 mm 的肿瘤数量减少(P＜0.05).细胞实验结果显示,与对照组相比,人参皂苷Rg-3组肿瘤细胞、HUVECs增殖、克隆形成、迁移、血管形成能力下降(P＜0.05),DLL4、Notch1、VEGF、VEGFR2、转录因子重组信号结合蛋白 Jκ(recombination signal binding protein-Jκ,RBP-Jκ)、Hes1 表达水平降低(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg-3通过抑制DLLA/Notch1信号通路促进血管形成,抑制AOM/DSS诱导结直肠癌进展.

目的 探讨日本落叶松根际土壤水浸提液对林下山参的化感作用,为提高林下山参道地药材的品质以及规范化栽培与选址提供参考.方法 研究了3种不同浓度(0.25、0.05、0.01 g·mL-1)的日本落叶松根际土壤水浸提液对林下山参种子萌发(发芽率、发芽势、发芽指数)、3年生林下山参显微性状(主根木质部、韧皮部、周皮及皮层)、人参皂苷含量[人参皂苷-Rg1、-Re、-Rf、-Rb1、-Rg2、-Rc、-Rb2、-Rb3、-Rd以及原人参三醇型人参皂苷(PPT)、原人参二醇型人参皂苷(PPD)和9种人参皂苷总量]的影响,结合液质联用技术对化感物质进行分析,并查阅相关文献对化感物质进行筛选.结果 日本落叶松根际土壤水浸提液对林下山参的发芽指标有显著化感抑制作用,且随浓度增加抑制作用增强;化感作用会导致林下山参主根发生腐烂病变、皮层木栓化程度增强;化感作用对人参皂苷含量的积累具有显著促进作用.通过结果分析结合文献查阅,认为根皮素等5种物质可能是日本落叶松对林下山参作用的化感物质.结论 结合上述研究结果,考虑到林下山参苗成活率、药材性状、劳动力成本、农药残留等因素,不建议在日本落叶松纯林下生产高品质林下山参.

目的 探究农田参对外源磷肥的需求规律,为配方施肥和专用肥研发奠定基础.方法 以二年生和三年生人参苗为试验材料,采用过磷酸钙及无磷霍格兰德营养液(Hoagland溶液)为供试肥料,设置P2O5浓度分别为0 mmol·L-1、0.5 mmol·L-1、1.5 mmol·L-1、3 mmol·L-1、6 mmol·L-1、8 mmol·L-1,监测不同浓度磷肥对人参农艺指标、光合特性以及对人参皂苷Rg1、Rb1、Re积累的影响.结果 外施1.5-3.0 mmol·L-1磷肥对二年生及三年生人参的株高、茎粗、根重、叶面积、叶绿素相对含量及叶片净光合速率、总皂苷含量均有显著的促进作用.其中二年生人参根重较无磷组提高16%,皂苷含量增加24%;三年生人参根重较无磷组可提高89%,皂苷含量可增加132%.P2O5适宜施用量分别为每株26.6 mg、53.3 mg.结论 外施适宜浓度磷肥,可提升人参外部形态特征、改善光合生理特性并增加活性成分含量.

目的 根据三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞过度表达葡萄糖转运蛋白 1(glucose transporter type 1,Glut1),而人参皂苷Rg3(ginsenoside Rg3,Rg3)的葡萄糖基可与Glut1 底物高度结合的特点,以Rg3 为脂质体膜材,制备包载雷公藤红素(celastrol,Cel)的靶向治疗TNBC的脂质体(Cel/Rg3-LPs),并对其靶向行为及抗TNBC疗效进行考察.方法 采用薄膜分散法制备 Cel/Rg3-LPs 并采用单因素考察法优化处方,对优化处方的 Cel/Rg3-LPs 进行形态、粒径、ζ 电位、体外释放和稳定性的考察;通过Cel/Rg3-LPs在体外鼠源 4T1 细胞的摄取实验、及对BALB/c原位荷 4T1 瘤株小鼠的治疗效果综合评价其靶向性.结果 Cel/Rg3-LPs优化处方为水化温度50℃,Cel为1.5 mg,Rg3为3.0 mg,大豆磷脂为21.0 mg,制备得到的脂质体外观呈圆球形,分布均匀,其粒径和 PDI 分别为(148.4±0.23)nm 和 0.19±0.01,ζ 电位为(-29.70±0.34)mV,Cel在脂质体中包封率为(96.69±0.03)%,载药量为(5.62±0.01)%.Cel/Rg3-LPs在 4T1 细胞中的摄取作用显著增强,且显著抑制 4T1 细胞增殖;原位荷瘤小鼠体内实验表明,Cel/Rg3-LPs能降低肿瘤组织脂质,并明显抑制肿瘤生长,具有良好的肿瘤靶向性,无明显肝肾毒性和组织毒性.结论 利用Rg3 替代胆固醇作为脂质体膜材可使雷公藤红素具有较好的TNBC靶向性,其药效相比胆固醇作为膜材显著增强,值得进一步研究.