猪苓菌核栽培中种苓质量不稳定是影响猪苓菌核品质和产量的关键问题,该文拟对根癌农杆菌介导的猪苓遗传转化体系进行研究,为通过分子育种从而获得优质种苓提供技术保障.采用根癌农杆菌介导法探究抗生素浓度、菌株类型、菌液浓度、受体材料、侵染时间、共培养时间和筛选条件对猪苓遗传转化效率的影响,利用潮霉素抗性标记基因、特异引物PCR以及荧光检测方法筛选并检测转化子.结果表明,根癌农杆菌GV3101菌株可对猪苓菌丝进行遗传转化,菌液浓度A600nm=0.6,受体材料猪苓菌丝,侵染30 min,共培养3 d为最佳侵染条件;9 μg·mL-1潮霉素初筛和13 μg·mL-1潮霉素复筛两步筛选法为最优筛选条件.经潮霉素抗性筛选、特异引物PCR检测和荧光检测分析,结果表明外源基因eGFP已转入猪苓菌丝内整合到基因组中并成功表达,在最优条件下,转化率可达到2.3％,遗传转化周期从大于90 d缩短到小于60 d.该研究建立并优化了根癌农杆菌介导的猪苓菌丝遗传转化体系,为解析猪苓生长发育的分子机制及分子育种奠定基础.

目的:分析陕西省首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1猪流感病毒（EA H1N1 SIV）的基因特征。方法:采集患者咽拭子标本，接种MDCK细胞进行病毒分离获得毒株，采用全基因组深度测序方法获得分离株的8个基因节段序列，通过GenBank数据库中Blast程序进行核苷酸同源性分析，构建系统进化树，分析病毒基因特征。结果:病例咽拭子标本经实验室确诊为EA H1N1 SIV，后分离毒株命名为A/Shaanxi-Weicheng/1351/2022（H1N1v）。同源性分析显示，该分离株的PB2、NP、HA、NA和M基因均与A/swine/Beijing/0301/2018（H1N1）核苷酸同源性最高，分别为98.29%、98.73%、97.41%、97.52%和99.08%。进化树显示，该分离株属于G4基因型EA H1N1 SIV，其中PB2、PB1、PA、NP和M基因来自pdm/09 H1N1，HA和NA基因来自EA H1N1，NS基因来自三源重配H1N1。其HA蛋白裂解位点为IPSIQSR↓G，为低致病性流感病毒的分子特征。NA蛋白未出现与神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。PB2蛋白701N、PA蛋白P224S突变、NP蛋白Q357K突变、M蛋白P41A突变和NS蛋白92D均说明其对哺乳动物的适应性增强。结论:该患者为陕西省首例人感染G4基因型EA H1N1 SIV病例，该病毒为低致病性，但其对哺乳动物的适应性增强，需要加强对此类SIVs的监测。

目的:验证EndoClot多聚糖术中止血装置（EndoClot polysaccharide hemostatic system，EndoClot PHS）用于肝素化上消化道动脉性出血（Forrest Ⅰa）内镜下治疗的有效性和安全性。方法:将12只巴拿马猪以计算机简单随机分组的方法随机分为实验组（ n=6）和对照组（ n=6），建立胃动脉性出血动物模型。实验组和对照组分别使用Endoclot PHS和Hemospray喷洒创面止血，胃镜下持续观察30 min，比较2组达到有效止血的时间、止血颗粒使用量、送粉管堵塞及更换次数等。术后观察实验猪存活情况，并发症发生情况等。10 d后，所有实验猪行安乐死并行病理解剖。 结果:12只实验猪均达到喷射性或搏动性出血。实验组和对照组达到有效止血的时间［（8.75±0.84）min比（9.83±0.62）min， t=-2.53， P=0.030］及达到有效止血的止血颗粒使用量［（6.71±0.39）g 比（14.10±1.62）g， t=-10.86， P<0.001］比较差异均有统计学意义。2组送粉管堵塞及更换次数差异无统计学意义［（0.64±0.02）次比（0.67±0.04）次， t=-1.64， P=0.131］。实验组气源更稳定，内镜下视野更清晰。实验组和对照组均未出现胃损伤、穿孔及气栓形成，血糖、血常规和肝肾功能均正常，均未出现主要器官的血栓形成及栓塞。 结论:EndoClot PHS用于肝素化上消化道动脉性出血（Forrest Ⅰa）动物模型的内镜下治疗是安全有效的。

目的:对四川省一例由野生动物(猪獾)咬伤发病的疑似狂犬病病例的唾液标本进行狂犬病病毒的全基因组序列测定，从分子水平对病毒进行遗传变异特征分析，了解四川省野生动物狂犬病病毒的流行和变异情况。方法:从疑似狂犬病病例的唾液标本中提取总病毒RNA，采用PCR的方法以特异性引物进行狂犬病病毒序列扩增，将获得的基因片段进行测序，并运用生物学软件将所得序列进行拼接从而得到狂犬病病毒株的全基因组序列。对全基因组进行遗传变异特征分析。结果:经测序获得1株猪獾源狂犬病病毒(以下简称SCR23-052)全基因组核苷酸序列，经NCBI在线BLAST及与多个参考序列比对表明，SCR23-052全基因组序列的组成和结构符合弹状病毒科狂犬病毒属特征；分别与宁夏毒株(J)、重庆毒株(CQ92、02050CHI)之间各个基因区域核苷酸与氨基酸序列相似性最高，SCR23-052基因组序列差异性在氨基酸水平明显低于核苷酸水平，说明蛋白质编码基因的核苷酸变异大多属于同义突变。种系发生分析显示SCR23-052属于基因V型，其糖蛋白主要抗原位点未见明显突变，在线网址预测糖蛋白在第56和338位发生了氨基酸糖基化，SCR23-052与参考疫苗株CTN181的信号肽序列相比氨基酸差异最少。本研究病毒在核蛋白主要抗原位点与所有参考疫苗株均发生了相同的突变(332位A→T)，在B细胞表位仅与参考疫苗株CTN181相比发生了379位L→V的突变，SCR23-052与基因Ⅴ型的参考毒株在核蛋白研究位点均一致。结论:获得了1株野生动物猪獾源基因V型狂犬病病毒株全基因组序列，不同于四川以往报道流行的犬源狂犬病病毒基因I型毒株。SCR23-052与各参考株基因组序列相比有不同程度差异，但主要毒力特征未改变。

目的:通过对胸痹心痛病古籍文献的整理分析，挖掘疾病的相关中药方剂、方剂所对应的主要证候要素以及服药护理内容。方法:以《中华医典》数据库（第5版）为数据源，检索相关古籍条文，建立数据库，提取相关中药方剂、证候要素及服药护理的相关内容，并对其进行统计分析及探讨。结果:所纳入的102首方剂中共提取出主要证候要素4个，分别为寒凝、气滞、血瘀、痰浊；所对应的服药护理措施具体包括服药温度、时间、频次、送服溶液及食忌等5个方面的内容。其中服药温度主要为温服、热服；服药时间主要为食前、食后、空腹、空心、日午、临卧、不计时候服等；服药频次主要为日二服、日三服、日三夜一服等；中药送服溶液以酒、粥/米饮、姜汤、橘皮汤、陈皮汤、醋汤等为主；服药食忌主要是忌生葱、猪肉、生冷、菘菜、羊肉等。结论:通过对基于证候要素理论胸痹心痛服药护理的研究有利于促进疾病的理论和临床研究，可促进服药护理的规范化，提高护理人员的辨证施护能力，为中医临床的服药护理提供参考。

目的:分析2017年山东省戊型肝炎病毒（HEV）的基因型分布和分子流行病学特征。方法:选取山东省2017年1—12月通过国家法定传染病报告系统报告的戊型肝炎病例为研究对象，对其进行个案调查，并采集其血清标本，共1 045例。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法复核检测HEV-IgM和HEV-IgG抗体，对HEV-IgM阳性者的血清提取病毒核酸，采用逆转录PCR方法扩增HEV开放式阅读框架2区域内长度为644 bp的核苷酸片段，直接测序后与GenBank下载的参考病毒株序列进行同源性和系统进化分析。结果:HEV-IgM复核检测阳性者638例（61.1%），其中男性病例年龄为（57.9±12.2）岁，阳性率为61.5%（496/807），女性病例年龄为（58.1±15.0）岁，阳性率为59.7%（142/238）；复核检测阳性者中共检出163株HEV毒株，检出率为25.6%（163/638），其中，东、中和西部地区检出率分别为23.0%（71/309）、33.6%（72/214）和17.4% (20/115)。检出的163株HEV病毒株均属于基因Ⅳ型，以4d亚型为主，占85.9%（140株），其次为4b亚型（7.4%，12株），以及少量的4a和4h亚型，分别占3.7%（6株）和3.1%（5株）。4a、4b和4h基因亚型组病例以东部为主，分别占3/5、11/12和4/6；4d基因亚型组以中部为主，占50.0%（70/140）。163株HEV的核苷酸序列同源性为82.7%~100.0%，其中140株HEV 4d亚型毒株与山东省猪源（KF176351）、牛源（KU904278）和羊源（KU904267）HEV毒株亲缘关系较近，核苷酸同源性分别为93.1%～98.3%、92.7%～97.9%和92.7%～97.9%。结论:山东省HEV优势流行株属于基因Ⅳ型4d亚型，跨种间传播可能是山东省人HEV感染的主要来源。

目的:评价新型主从操作式经尿道手术机器人系统的性能，验证其安全性和有效性。方法:2021年9月北京协和医院2名泌尿外科医生(A和B)应用经尿道手术机器人样机进行仿真人体组织模型实验。本研究采用的经尿道手术机器人系统包括：主端控制平台、从端手术平台和末端执行器。主端控制平台采用Omega7力反馈主手作为主控制器，自由度包括：上下平移、左右平移、前后平移、末端旋转、末端俯仰、末端摆动、末端操作。从端手术平台采用Med 7七自由度医疗协作机械臂，通过末端执行器操作电切镜。末端执行器采用模块化设计，最大化兼容现有手术器械。2名医生均分别常规组装电切镜和经尿道手术机器人各20次，计算组装时间。常规组装电切镜时间包括电切镜安装、连接镜头和光源后，医生手持电切镜进入实验模块的时间。组装手术机器人时间包括将电切镜与末端执行器安装，并连接镜头和光源后进入实验模块的时间。2名医生分别进行25次模拟前列腺电切手术和5次模拟膀胱电切手术。将猪的小肠、心脏和胃缝合构建模拟人体的尿道、前列腺和膀胱结构：尿道(猪小肠)长16~18 cm，前列腺(猪心脏)大小约5 cm×5 cm×6 cm，膀胱(猪胃)容量250~300 ml。将模型置于3D打印套盒中，模拟尿道与硅胶阴茎贴合。模拟前列腺电切手术：医生于主端控制平台操作手柄，通过人机交互控制从端执行器，直视下围绕不动点切除"前列腺"，模拟标准经尿道前列腺切除术，切除范围为从模拟膀胱颈至模拟前列腺尖部，切除两侧叶和中叶。每次手术时间40 min，记录切除组织重量。模拟经尿道膀胱电切手术：每次手术需切除模拟膀胱的三角区、两侧壁和顶部区域，记录是否发生穿孔。通过手术对机器人的主从操作距离准确度、操作姿态准确度、主从操作姿态重复度、不动点准确度、主从控制启动延迟时间和主从控制跟随延迟时间、机械臂摆动范围、极限位点等指标进行验证。结果:经尿道手术机器人性能测试结果显示，末端执行器定位精度<0.5 mm，主从操作距离准确度≤0.5 mm，重复性距离≤0.2 mm；主从操作姿态准确度角度a≤0.30°，角度b≤0.30°，角度c≤0.15°；不动点准确度≤0.6 mm，机械臂最大活动空间为半径(1 493±5) mm的半球形空间。主从控制启动延迟时间和主从控制跟随延迟时间均≤100 ms。从端机械臂末端在运动中受到外力碰撞时，系统可自动停止机械臂运动，此时外力为(70±7)N；不动点设置范围30~170 mm。医生A和医生B组装经尿道手术机器人时间分别为(111.35±57.88)s和(111.70±58.30)s( P＝0.996)，常规组装电切镜时间分别为(44.90±4.89)s和(44.90±5.16)s( P＝0.679)，2名医生间比较差异均无统计学意义；2名医生的机器人组装时间均多于常规组装时间，差异均有统计学意义( P＝0.001， P＝0.001)。随组装次数增加，机器人组装时间进行性下降，5次组装后时间稳定≤120 s。医生A和医生B切除的前列腺组织重量分别为(43.60±12.42)g和(43.45±12.63)g，差异无统计学意义( P＝0.954)。模拟膀胱电切手术中，机器人系统可顺利完成模拟膀胱的三角区、两侧壁和顶部组织切除。手术实验中系统运行流畅，未发生机械故障，无模块损伤、穿孔等并发症发生。 结论:经尿道手术机器人能够安全、有效地完成经尿道电切手术。

目的:探讨猪膀胱脱细胞基质（UBM）对小鼠骨髓源巨噬细胞的运动和极化情况的影响，为临床创面修复中支架的合理选用提供依据。方法:采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察猪UBM和可吸收敷料的微观结构。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察2种支架浸提液的蛋白质分布。取6只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠（小鼠周龄、性别、品系下同）并提取骨髓源细胞后诱导原代巨噬细胞并鉴定。取3批次巨噬细胞，均分为猪UBM浸提液组和可吸收敷料浸提液组，加入含有相应浸提液的DMEM/F12培养基培养，行划痕试验检测并计算划痕后1、3、7 d的细胞迁移率；行Transwell实验检测培养12、24 h的细胞迁移数量；培养24 h，采用流式细胞仪检测CD206或CD86阳性细胞百分比。以上细胞实验样本数均为3。取12只小鼠，于每只小鼠背部左右两侧各制作1个切口，左侧切口纳入猪UBM组、右侧切口纳入可吸收敷料组，分别植入相应支架。术后7、14 d，行苏木精-伊红染色观测支架中浸润的炎症细胞数量，采用免疫组织化学法观测支架中F4/80、转化生长因子β 1（TGF-β 1）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）阳性细胞数量和Ⅰ型胶原蛋白沉积情况，采用免疫荧光染色检测F4/80、CD86、CD206阳性细胞百分比。以上动物实验样本数均为6。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、独立样本 t检验。 结果:猪UBM的一面为致密的基底膜结构，另一面为含有纤维结构的多孔固有层。可吸收敷料的两面均呈三维多孔结构。在（50~70）×10 3的分子量区间，猪UBM浸提液的泳道出现多条非Ⅰ型胶原蛋白条带，可吸收敷料浸提液的泳道中未出现明显条带。经鉴定，小鼠骨髓源细胞已被成功诱导为巨噬细胞。划痕后1、3、7 d，猪UBM浸提液组细胞迁移率均明显高于可吸收敷料浸提液组（ t值分别为15.31、19.76、20.58， P<0.05）。培养12、24 h，猪UBM浸提液组细胞迁移数量均明显多于可吸收敷料浸提液组（ t值分别为12.20、33.26， P<0.05）。培养24 h，猪UBM浸提液组细胞中CD86阳性细胞百分比为（1.27±0.19）%，明显低于可吸收敷料浸提液组的（7.34±0.14）%（ t=17.03， P<0.05）；猪UBM浸提液组细胞中CD206阳性细胞百分比为（73.4±0.7）%，明显高于可吸收敷料浸提液组的（32.2±0.5）%（ t=119.10， P<0.05）。术后7、14 d，猪UBM组支架中浸润的炎症细胞数量均明显多于可吸收敷料组（ t值分别为6.58、10.70， P<0.05）；猪UBM组支架中F4/80、TGF-β 1、VEGF和MMP-9阳性细胞数量均明显多于可吸收敷料组（ t值分别为46.11、40.69、13.90、14.15，19.79、32.93、12.16、13.21， P<0.05）；猪UBM组支架中Ⅰ型胶原蛋白沉积较可吸收敷料组更显著；猪UBM组支架中CD206阳性细胞百分比均明显高于可吸收敷料组（ t值分别为5.05、4.13， P<0.05），CD86阳性细胞百分比均明显低于可吸收敷料组（ t值分别为20.90、19.64， P<0.05），猪UBM组支架中可见更多的M2型巨噬细胞、可吸收敷料组支架中可见更多的M1型巨噬细胞。 结论:猪UBM可增强小鼠巨噬细胞运动，诱导其发生M2型极化和发挥旁分泌功能，营造含有TGF-β 1等生长因子和MMP-9组织重塑分子的微环境，促进组织新生和细胞外基质重塑。

对海南省2021年临床分离的4株血清型2型猪链球菌进行了培养纯化、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪和生化分析鉴定、药敏试验、耐药基因检测和多位点序列分型。菌株1和菌株2为ST7型，菌株3为ST1型，菌株4为ST2302型；4株菌株对左氧氟沙星、青霉素、美罗培南、利奈唑胺、头孢曲松、头孢吡肟和达托霉素均敏感，3株对四环素、红霉素和阿奇霉素具有耐药性，2株对克林霉素和氨苄西林耐药，1株对氯霉素和万古霉素耐药，提示海南省多个地区可能存在猪链球菌感染源，猪链球菌ST分子分型呈现多样化。

目的:分析2017—2021年杭州市临床和食品来源伦敦沙门菌的耐药与基因组特征。方法:对2017—2021年杭州市分离的91株伦敦沙门菌进行药敏分析、PFGE分型和全基因组测序；利用测序数据对菌株进行多位点序列分型（MLST）、核心基因组多位点序列分型（cgMLST）和耐药基因识别，并与公共数据库菌株比较进行系统发育分析。结果:临床株和食品株对18种药物的耐药率差异均无统计学意义（均 P>0.05），其多重耐药率为75.8%（69/91），以同时耐7类药物的菌株居多，发现1株对多黏菌素E耐药且检出 mcr-1.1基因的耐8类药物菌株；50.5%（46/91）的菌株对阿奇霉素耐药且检出 mph（ A）基因；91株伦敦沙门菌均为ST155型，分为44种PFGE带型和82种cgMLST型别；系统发育分析显示，大部分杭州菌株（83/91）自行聚集成簇，簇内混杂少量来自欧洲和北美洲的人分离株以及湖北、深圳等省市的猪肉分离株；少数杭州菌株（8/91）与分离自东南亚、欧洲、北美洲的菌株进化距离较近；与临床株距离较近的主要是猪肉分离株。 结论:杭州市伦敦沙门菌的感染主要由ST155型菌株引起，以本地传播为主，同时与东南亚、欧洲、北美洲以及国内其他省市可能存在跨地传播；临床和食品来源菌株间耐药差异无显著意义，多重耐药现象较为普遍；其临床感染可能与猪肉消费密切相关。