目的:探究下调G蛋白偶联受体C家族5A（GPRC5A）表达对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞（GFs）炎症反应的影响并探索其机制，为深入探讨G蛋白偶联受体（GPCR）在牙周炎中的调控作用及其机制奠定基础。方法:于2022年12月至2023年2月在山东大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科、牙周科收集3名牙周健康者（牙周健康组）和3例牙周炎患者（牙周炎组）的牙龈组织，采用免疫组化染色检测两组牙龈组织中GPRC5A的表达。收集健康牙龈组织提取GFs，健康牙龈组织来自2022年12月至2023年2月在山东大学齐鲁医学院口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科招募的6例16~20岁需拔除埋伏阻生齿的患者。应用胶原酶消化法提取并培养GFs，设置30、50和80 μmol/L浓度转染GPRC5A小干扰RNA（siGPRC5A）的实验组和阴性对照小干扰RNA（siNC），利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测siGPRC5A的沉默效率；设置阴性对照、脂多糖、siGPRC5A+脂多糖和siGPRC5A 4个组，通过RT-qPCR和蛋白质印迹法分别验证应用siGPRC5A对1 mg/L脂多糖诱导的GFs炎症状态下GPRC5A在基因和蛋白水平的表达；下调GPRC5A表达后，RT-qPCR检测脂多糖诱导的GFs白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）基因的表达；通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色检测核因子-κB（NF-κB）信号通路的激活情况。结果:免疫组化结果显示，牙周炎组牙龈组织中GPRC5A表达（0.132±0.006）显著高于牙周健康组（0.036±0.019）（ t=8.24， P=0.001）。RT-qPCR结果显示，在脂多糖作用2、6、12和24 h时，脂多糖组GPRC5A基因水平表达量（分别为0.026±0.002、0.042±0.005、0.004±0.000、0.016±0.000）均分别显著高于阴性对照组（分别为0.004±0.000、0.004±0.000、0.002±0.000、0.007±0.000）（均 P<0.001），且6 h时达峰值。50 μmol/L siGPRC5A（31.16±3.29）与siNC组（100.00±4.88）相比能有效沉默GFs中GPRC5A的表达（ F=297.98， P<0.001）。RT-qPCR和蛋白质印迹法结果显示，脂多糖组GPRC5A在基因和蛋白水平的表达（分别为1.30±0.10、1.43±0.03）均显著高于阴性对照组（分别为1.00±0.01、1.00±0.00）（均 P<0.001），siGPRC5A组（分别为0.27±0.03、0.71±0.00）均显著低于阴性对照组（分别为1.00±0.01、1.00±0.00）（均 P<0.001），siGPRC5A+脂多糖组（分别为0.39±0.03、1.06±0.16）均显著低于脂多糖组（分别为1.30±0.10、1.43±0.03）（均 P<0.001）。RT-qPCR结果显示，脂多糖组IL-8、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTGS2基因表达水平均显著高于阴性对照组，siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组（均 P<0.001）。蛋白质印迹法结果表明，脂多糖组p65和IκBα蛋白磷酸化水平均显著高于阴性对照组，而siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组（均 P<0.01）。免疫荧光染色结果显示，对照组NF-κB p65集中表达于胞质，在脂多糖刺激下p65部分向核内转位，应用siGPRC5A后能一定程度上抑制脂多糖诱导的p65核内转位。 结论:GPRC5A在GFs炎症状态下表达增加，下调GPRC5A的表达能抑制脂多糖诱导的炎症反应，且GPRC5A可通过NF-κB信号通路发挥炎症调控的作用。

双特异性抗体(BsAb)是一种新型免疫疗法，能够通过主要组织相容性复合体(MHC)非限制性识别并结合肿瘤抗原，激活T细胞并靶向杀伤肿瘤细胞。目前，BsAb已成为血液肿瘤领域的研究热点。在复发/难治性多发性骨髓瘤(RRMM)患者中，针对B细胞成熟抗原(BCMA)，G蛋白偶联受体家族C组5成员D(GPRC5D)和Fc受体同源物(FcRH)5靶点BsAb的早期临床试验已显示出良好的有效性和安全性，治疗反应率达70%~83%，其主要治疗不良反应为低级别细胞因子释放综合征(CRS)、血细胞减少和感染。笔者拟就BsAb的分类和功能、BsAb治疗RRMM的靶点及应用的最新研究进展进行阐述。

目的 ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用.然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group 5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚.本研究探讨了 GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响.方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性.采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖.采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系.结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调.GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠.与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感.注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060).此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达.结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖.GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究.

[目的]采用网络药理学与生物信息预测分析并结合体内与分子实验验证百合抗焦虑抗抑郁的作用机制.[方法]采用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索百合抗焦虑抗抑郁的潜在活性成分;通过治疗靶点数据库(Therapeutic Target Database,TTD)检索活性成分抗焦虑抗抑郁的潜在作用靶标,构建成分与靶标网络;采用REACTOME与g:Profiler软件进行基因本体(gene ontology,GO)分析,京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、REAC 和 WikiPathways 代谢通路(WikiPathways,WP)富集分析.以行为绝望抑郁悬尾和强迫游泳实验评价百合水提液抗抑郁活性,以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测ICR小鼠海马内神经递质含量,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)分析抑郁小鼠脑内抑郁相关基因表达水平.[结果]百合通过β-谷甾醇、3-去甲基秋水仙碱与26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基胆甾烷-16,22-二氧基-3-0-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷等5个潜在活性成分,可通过调控hsa-miR-203和hsa-miR-206等miRNAs与特异性蛋白 1(specificity protein 1,SP1)、RE1沉默转录因子(RE1 silencing transcription factor,REST)和CCCTC 结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)等转录因子的表达,进而共同调控蛋白激酶C epsilon型(protein kinase C epsilon,PRKCE)、γ-氨基丁酸 B 型受体亚基 2(gamma-aminobutyric acid type B receptor subunit 2,GABBR2)、γ-氨基丁酸 A 型受体亚基 p2(gamma-aminobutyric acid type A receptor subunit beta 2,GABRB2)和溶质载体家族6 成员 4(solute carrier family 6 member 4,SLC6A4)等基因的表达,可能最终影响了 γ-氨基丁酸通路、5-羟色胺通路、G蛋白偶联受体通路和单胺氧化酶通路等,增加抑郁小鼠脑内神经递质含量,发挥抗焦虑抗抑郁作用.[结论]采用网络药理学、生物信息预测以及实验验证百合抗焦虑抗抑郁的活性成分、潜在靶标和信号通路,为百合抗焦虑抗抑郁研究提供参考.

目的·探究炎症信号通路对G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein-coupled receptor class C group 5 memberA,GPRC5A)表达的调控作用.方法·给予核因子κB(NF-κB)启动子驱动荧光酶转基因小鼠腹腔注射细菌内毒素脂多糖(LPS),诱导肺组织炎症,活体动物可见光成像系统下观察小鼠肺部NF-κB信号通路激活情况.在C57BL/6J小鼠,腹腔注射LPS,Western blotting检测肺组织GPRC5A表达情况.体外实验中,对人肺癌细胞Calu-1、H322,人胚胎肾细胞HEK293T给予肿瘤坏死因子α(TNF-α)或转染p65表达质粒,而后用Western blotting、RT-PCR、荧光素酶报告基因实验、免疫荧光等方法检测分析炎症对GPRC5A表达的影响.结果·小鼠腹腔注射LPS可以诱导NF-κB炎症信号通路激活,并抑制肺组织中GPRC5A的表达.炎症因子TNF-α可明显抑制Calu-1细胞GPRC5A的蛋白和mRNA表达.在HEK293T细胞,转染p65表达质粒后,可以抑制GPRC5A启动子驱动的荧光素酶报告质粒的表达.被转染并表达绿色荧光蛋白-p65的H322细胞中几乎没有GPRC5A的表达.结论·NF-κB信号通路可以抑制GPRC5A启动子的转录活性,抑制其mRNA和蛋白的表达.

目的 探讨G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)基因对肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其与表皮生长因子受体(EGFR)的相关性.方法 构建GPRC5A基因真核表达质粒pLenti6.3-MCS-GPRC5A,通过脂质体法转染A549细胞,经过新霉素筛选获得阳性单克隆细胞.用qRT-PCR和Western blot检测转染前后GPRC5A、EGFR基因的mRNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞迁移能力的变化.结果 真核表达质粒转染A549细胞后,GPRC5AmRNA表达上调,蛋白表达水平升高,EGFR mRNA表达下降,蛋白表达水平降低.高表达GPRC5A后,细胞增殖和迁移能力显著减弱.结论 GPRC5A可能与EGFR结合,抑制EGFR通路的过度激活,从而影响了A549细胞的增殖和迁移能力.

目的:基于生物信息数据挖掘阐明G蛋白偶联受体C家族5A基因(G protein-coupled receptor family C,member 5,group A,GPRC5A)在胰腺癌中的表达及临床意义.方法:检索Oncomine,TCGA,Human Protein Atlas等基因数据库,分析GPRC5A在胰腺癌中的表达差异,并分析其在不同肿瘤中的表达.采用Western印迹技术在武汉大学人民医院小样本队列中验证GPRC5A在胰腺癌及癌旁组织中的蛋白表达水平,采用Kaplan-Meier进行患者生存分析,并对GPRC5A与靶向药物敏感性关系进行分析.结果:对Oncomine数据库中有差异表达的295项研究数据进行差异性分析,发现胰腺癌组织GPRC5A基因的表达明显高于正常胰腺组织.对GPRC5A在不同肿瘤组织中表达的4184项研究进行荟萃分析,发现GPRC5A在胰腺癌组织中显著表达增高.通过生存分析发现高表达GPRC5A胰腺癌患者生存期明显低于低表达者,高表达患者预后更差.此外,GPRC5A表达与靶向药物厄洛替尼的药物敏感性有一定关联.结论:GPRC5A在胰腺癌组织中呈现高表达,与患者预后显著相关,其有可能成为胰腺癌诊断及药物治疗的新靶点.

流行病学研究结果显示,大肠癌的发病率达334/10万～783/10万[1].临床上大肠癌的总体治疗有效率不足35％[2].在探讨大肠癌的发病机制过程中,越来越多的研究揭示出基础生物学领域相关因子对于恶性肿瘤发生的影响.核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是重要的转录因子,其能够促进肿瘤信号通路的激活,导致肿瘤细胞的增殖及分化障碍[3];G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein coupled receptor C type group 5 member A,GPRC5A)和细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达,能够维持细胞周期的正常调控,稳定细胞的生理过程,延缓肿瘤细胞过度增殖导致的病情进展[4-5].为进一步揭示NF-κB、GPRC5A和SOCS3在大肠癌患者病灶组织中的表达情况,本研究选取2015年1月至2017年1月我院保存的大肠癌组织120例,探讨相关因子的蛋白表达水平,现报道如下.

目的 探讨G蛋白偶联受体C型家族5A基因(GPRC5A)在胰腺癌组织中的表达情况及对患者预后的预测作用,探究GPRC5A对胰腺癌有氧糖酵解的影响.方法 利用Gene Expression Omnibus(GEO)、The Cancer Genome Atlas(TCGA)及The Genotype-Tissue Expression(GTEx)公共数据库及仁济医院胆胰外科课题组表达谱芯片检测胰腺癌及癌旁组织中GPRC5A在mRNA水平上的表达情况,并利用TCGA公共数据库验证GPRC5A表达对患者的预后影响,进一步通过Seahorse检测仪检测GPRC5A对胰腺癌细胞系糖酵解能力的影响.结果 GPRC5A在胰腺癌组织中的mRNA表达水平在3个GEO数据库GSE15471(P<0.0001)、GSE16515(P=0.0157)、GSE28735(P<0.0001)及仁济表达谱芯片数据(P<0.0001)中均显著高于癌旁组织,将TCGA数据库中的肿瘤组织测序结果同GTEx数据库中的正常组织测序结果比对也得出同样结论(P=0.0311).同时,在TCGA数据库中GPRC5A mRNA高表达组患者预后更差(P=0.0069);对仁济表达谱芯片进行的基因富集分析提示GPRC5A mRNA高表达组在糖酵解通路(Glycolysis pathway)存在富集.细胞实验发现干扰GPRC5A表达后胰腺癌细胞的细胞外酸化率出现下调.结论 GPRC5A在胰腺癌组织中高表达,其高表达与较差预后相关,并能影响胰腺癌细胞的糖酵解能力.

目的 探讨G蛋白偶联受体C家族5A(G protein-coupled receptor,family C,group 5,member A,GPRC5A)、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在结直肠癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法 选取76例结直肠癌组织和30例癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学法检测组织中GPRC5A、SOCS3和STAT3的表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用Spearman相关分析方法分析三者表达的相关性.结果 在结直肠癌组织中,GPRC5A和STAT3的阳性表达率均高于癌旁正常组织(59.2％vs 33.3％,P=0.016;69.7％vs 30.0％,P=0.001),而SOCS3的阳性表达率则低于癌旁正常组织(38.2％ vs 80.0％,P=0.001).GPRC5A表达水平与结直肠癌患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.05),SOCS3和STAT3的表达水平与结直肠癌患者的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.05).Spearman相关分析显示,SOCS3与STAT3和GPRC5A的表达均呈负相关(r=-0.308,P=0.007;r=-0.340,P=0.003),GPRC5A与STAT3表达呈正相关(r=0.327;P=0.004).结论 GPRC5A在结直肠癌组织中高表达,可能对SOCS3的表达具有负调控作用,对STAT3的表达有正调控作用,三者可能与结直肠癌的发生发展密切相关.