目的:观察rhGLP-1（7-36）对肝细胞Akt/GSK3信号通路的影响。方法:培养人HL7702细胞系至对数生长期，将其分为实验组和空白对照组，分别用含rhGLP-1（7-36）100nM的培养基、不含rhGLP-1（7-36）的培养基培养90min。用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测两组Akt、糖原合成酶激酶3（glycogen synthase kinase，GSK3）、糖原合酶（glycogen synthase，GS）水平。结果:与空白对照组（1.00±0.00）比，实验组p-Akt（Thr308）蛋白相对表达水平（1.81±0.28）明显增加（ P=0.01），Akt及p-Akt（Ser473）蛋白表达水平无明显变化；实验组p-GSK3α（Ser21）（1.27±0.09）、p-GSK3β（Ser9）（1.24±0.09）蛋白表达水平明显升高（ P值分别为0.003、0.002），GSK3α及GSK3β蛋白表达水平无明显变化；实验组p-GS（Ser641）蛋白表达水平（0.70±0.16）降低（ P=0.03），GS蛋白表达水平无明显变化。 结论:GLP-1可抑制GSK3/GS信号通路，激活GS活性，促进糖原合成。

目的:探讨Circ PNN(Circ PNN/hsa_Circ_0101802)在肝癌细胞中的表达，对肝癌细胞增殖和凋亡影响，以及调控肝癌细胞的分子机制。方法:通过全转录组高通量测序分析肝癌患者血浆中Circ PNN差异表达。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞Huh-7、SK-HEP-1中Circ PNN表达。应用siRNA干扰技术沉默后，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖、流式细胞术检测凋亡、蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达。Circ Bank数据库预测Circ PNN结合的miRNA及位点。结果:Circ PNN在肝癌患者血浆中的表达量显著高于非肝癌患者[差异倍数(FC)为268.63， P<0.05]。人HCC细胞系Huh-7和SK-HEP-1中Circ PNN的表达水平明显高于人正常肝细胞系HL-7702(8.206±0.118比0.950±0.010， P<0.05；20.822±0.288比0.950±0.010， P<0.05)。在SK-HEP-1细胞中转染Circ PNN siRNA-1和siRNA-2后，siRNA-1组、siRNA-2组细胞增殖能力低于对照组(0.826±0.040比1.022±0.053， P<0.05；0.492±0.027比1.022±0.053， P<0.05)；siRNA-1组、siRNA-2组SK-HEP-1细胞凋亡能力明显高于对照组(16.633±0.404比4.800±0.608， P<0.05；27.133±0.751比4.800±0.608， P<0.05)；siRNA-1组、siRNA-2组凋亡蛋白Caspase-3的相对表达量高于对照组(1.121±0.926比0.805±0.628， P<0.05；1.372±0.161比0.805±0.628， P<0.05)，可促进细胞的凋亡能力。Circ Bank数据库生物信息学预测Circ PNN上结合的miRNA数量为10个。 结论:肝细胞癌通过增高Circ PNN表达，通过分子海绵机制作用于miRNA，下调Caspase-3表达从而促进肝癌细胞增殖、抑制凋亡，调控肝细胞癌发生、发展。

目的:探讨Kruppel样转录因子6(KLF6)基因调控谷氨酰胺酶2(GLS2)对人肝癌细胞系Bel7404、Huh7增殖的影响。方法:采用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测正常肝细胞和肝癌细胞中KLF6的mRNA和蛋白表达(上海细胞库)。沉默KLF6基因，细胞计数试剂盒(CCK-8)和细胞增殖实验(EdU)检测细胞增殖；结合前期实验基础、转录因子结合位点数据库(JASPAR)辅助筛选KLF6结合GLS2结合序列；染色质免疫共沉淀(CHIP)验证转录因子KLF6结合GLS2的序列；qPCR、Western blot检测沉默KLF6，GLS2的mRNA和蛋白的表达量。结果:KLF6在人肝癌细胞系HepG2(0.12±0.01)、HepG3B(0.11±0.02)、BEL-7404(0.44±0.02)、Huh7(0.34±0.03)中mRNA表达低于正常细胞HL7702(1.00±0.01)，具有统计学意义( t＝172.80、113.90、61.64、44.41， P<0.01)；Western blot检测KLF6在HepG2(0.57±0.02)、HepG3B(0.53±0.01)、BEL-7404(0.73±0.01)、Huh7(0.66±0.01)中蛋白表达水平低于HL7702，差异有统计学意义( t＝37.79、42.17、31.40、40.13， P<0.01)；沉默KLF6基因，CCK-8检测Huh7在0、24、48、72 h增殖能力(0.20±0.01、0.30±0.01、0.45±0.04、0.63±0.02)高于对照组(0.20±0.01、0.29±0.01、0.35±0.03、0.47±0.01)，差异有统计学意义( F＝43.46， P<0.01)；CCK-8检测Bel7404在0、24、48、72 h增殖能力(0.20±0.01、0.27±0.01、0.42±0.02、0.62±0.04)高于对照组(0.20±0.01、0.26±0.01、0.36±0.01、0.44±0.02)，差异有统计学意义( F＝141.40， P<0.01)；EdU检测Huh7中3个不同抑制剂sh-KLF6-1、sh-KLF6-2、sh-KLF6-3增殖率(56.83%、52.68%、45.43%)高于对照组(35.32%)，差异有统计学意义( t＝6.68、4.10、3.86， P<0.01)；同理检测Bel7404中3个不同抑制剂增殖率(53.61%、49.32%、42.16%)高于对照组(32.75%)，差异有统计学意义( t＝3.48、2.89、2.31， P<0.01)；沉默KLF6基因，Huh7细胞在3种不同抑制剂sh-KLF6-1、sh-KLF6-2、sh-KLF6-3中GLS2的mRNA表达(0.01±0.00、0.13±0.01、0.44±0.02)低于对照组(1.01±0.01)，差异有统计学意义( t＝94.63、23.54、27.04， P<0.01)；实验组蛋白表达(0.41±0.01、0.64±0.10、0.87±0.02)低于对照组(1.00±0.01)，差异有统计学意义( t＝15.11、9.57、3.88， P<0.01)；Bel7404细胞在sh-KLF6-1、sh-KLF6-2、sh-KLF6-3中GLS2的mRNA表达(0.04±0.01、0.29±0.10、0.33±0.02)低于对照组(1.00±0.01)，差异有统计学意义( t＝30.21、21.82、20.92， P<0.01)；实验组蛋白表达(0.36±0.01、0.66±0.10、0.72±0.02)低于对照组(1.00±0.01)，差异有统计学意义( t＝59.99、36.50、21.80， P<0.01)。 结论:KLF6介导的GLS2调控途径显著抑制肝癌细胞的增殖。

目的:探究肝癌和胱硫醚β-合成酶（cystathionine β-synthase, CBS）基因及胱硫醚γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CTH）基因的关系。方法:通过挖掘GEO（gene expression omnibus）与TCGA（the cancer genome atlas）数据库，对肝癌的临床特征与CBS及CTH基因表达进行了相关性分析。并通过对肝癌细胞系进行免疫印迹验证。结果:CBS及CTH在肿瘤中的表达较非肿瘤明显降低（ P < 0.05）。Cox回归结果显示CBS是肝细胞癌不良预后的独立危险因素（ HR = 0.65， P = 0.02）。针对CBS基因对不同肿瘤分期进行单因素 logistics回归分析，发现肝癌TNM分期II期比I期（ P =0.01， OR=0.50）、III期比I期（ P =0.03， OR=0.56）、T分期T2期比T1期（ P <0.01， OR=0.43）、T3期比T1期（ P = 0.02， OR=0.54）CBS基因显著降低。肝癌TNM分期III期比I期（ P = 0.01, OR=0.50）, Edmondson分期II期比I期（ P =0.03， OR=0.48）, III期比I期（ P <0.01， OR=0.30）, IV期比I期（ P = 0.03， OR=0.22）CTH基因表达显著降低。GSEA富集分析结果显示，与肝癌细胞CTH与CBS基因表达相关性最高的信号通路为细胞色素P450（FDR Q < 0.01，FWER P < 0.01）。免疫印迹结果显示，与人肝永生化细胞系HL-7702相比，HLE和Hep3B细胞等肝细胞癌细胞系中CTH下游蛋白CSE表达降低。 结论:肿瘤组织中的CBS及CTH基因表达低于正常组织。CBS基因是肝细胞癌不良预后的独立危险因素。与CBS及CTH基因关系最为密切的是信号通路为细胞色素P450通路。

目的:检测甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在肝细胞癌中的表达，并观察Mus81对人肝癌细胞迁移、侵袭及转移能力的影响。方法:32例组织标本选自2020年1月至2021年6月在暨南大学附属广州红十字会医院进行手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织及相应癌旁组织。分析Mus81在32例肝癌标本、癌症基因组图谱数据库的374例肝癌样本、人正常肝细胞系HL-7702和人肝癌细胞系JHH-7、Huh-7、Hep3B中的表达水平，构建Mus81敲减的JHH-7、Huh-7和过表达的Hep3B肝癌细胞系，通过划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验和裸鼠尾静脉注射转移实验观察Mus81对肝癌细胞的影响。结果:Mus81在肝癌组织或细胞系中的表达量高于癌旁组织或正常肝细胞系，差异有统计学意义(均 P<0.05)。Mus81敲减的Huh-7肝癌细胞的迁移率、转移及侵袭细胞数分别为22.24%±2.16%、49.04±5.62、3.81±1.08，阴性对照组分别为26.89%±1.15%、86.81±4.79、19.78±3.30，两组比较差异有统计学意义( t＝4.24、26.59、23.92，均 P<0.01)；Mus81过表达的Hep3B肝癌细胞迁移率、转移及侵袭细胞数分别为80.57%±5.12%、18.74±8.07、33.81±8.44，均高于空载体组的64.17%±7.20%、10.96±5.32、3.04±1.13，差异有统计学意义( t＝4.15、4.18、18.78，均 P<0.01)。裸鼠尾静脉转移实验显示，注射Mus81敲减组JHH-7细胞的裸鼠总荧光量、转移瘤重量均低于对照组，且肾、脊柱、颈部、腋下及皮下的转移率均低于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Mus81基因在肝癌中表达上调，且可促进肝癌细胞的迁移、侵袭、转移能力，提示Mus81可能是一个潜在的肝细胞癌治疗靶点。

目的 探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响.方法 常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞.将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5p mimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1 组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1 组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞.用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系.结果 HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05).由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验.与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05).通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点.双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05).与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G0/G1 期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反.结论 lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为.

目的 研究HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H细胞中的GPC3、HIF-1ɑ和SRPK2中的mRNA、蛋白表达情况,探讨其与肝细胞癌(HCC)的相关性.方法 研究这3种细胞系中GPC3、HIF-1ɑ、SRPK2 3种基因的蛋白和mRNA的表达情况,需要通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot).结果 在线网站分析结果 显示,相对这3种基因表达低的HCC患者而言,高表达的生命周期明显降低(P<0.05).体外实验证明,高表达的HCC细胞表达的GPC3和SRPK2、HIF-1ɑ的mRNA和蛋白的表达水平都比HL-7702的高,且MHCC-97H与MHCC-97L细胞相比,各基因的表达水平较高.相关性分析显示HIF-1ɑ与SRPK2呈正相关(r=0.69),GPC3与SRPK2呈正相关(r=0.23).结论 HCG的转移能力越强,GPC3、HIF-1ɑ、SRPK2 的蛋白和mRNA的表达水平也越高,而且这3种基因与GPC3的表达也呈正相关.

目的 探讨miR-320a对肝癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制.方法 采用荧光定量PCR检测不同肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Bel-7402、QGY-7701、QGY-7703和正常肝细胞中HL-7702中miR-320a的表达水平;细胞克隆形成实验和Transwell小室法检测miR-320a对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;Western blot检测细胞上皮一间质转化相关的E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达水平;双荧光素酶报告基因实验、qPCR和Western blot验证miR-320a对叉头框蛋白Q1的靶向作用.采用裸鼠皮下移植瘤实验研究miR-320a通过靶向FOXQ1对HepG2细胞体内成瘤的影响.结果 miR-320a在肝癌细胞中表达下调,过表达miR-320a抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制EMT.MiR-320a通过靶向抑制FOXQ1抑制HepG2细胞在裸鼠体内移植瘤生长,减轻瘤体体积和重量.结论 miR-320a通过靶向抑制FOXQ1抑制肝癌细胞的增殖和侵袭.

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制.方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B 和人正常肝细胞系HL-7702 中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达.将SMMC-7721、Bel-7402 细胞分组为Inhibi-tor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC +oe-KLF4 组、miR-92a-3p mimic +oe-NC组、miR-92a-3p mimic +oe-KLF4 组.qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4 的mRNA表达水平.Western blot检测KLF4 蛋白表达水平.MTT增殖实验检测细胞活力.划痕愈合、Transwell 侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力.通过 TargetScan 分析miR-92a-3p与 KLF4 的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证.结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在HCC细胞中高表达,KLF4 在HCC细胞中低表达(P<0.05).与正常表达组相比,下调 miR-92a-3p显著抑制了SMMC-7721 和Bel-7402 细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05).双荧光素酶实验验证了miR-92a-3p与KLF4 存在靶向结合位点.过表达KLF4 能够阻碍HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制过表达miR-92a-3p对HCC细胞生长的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05).结论:miR-92a-3p能够通过靶向下调KLF4 来促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭.

目的 探究去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(FTO)抑制对人肝癌细胞系HepG2 增殖的作用机制.方法将肝癌细胞系HepG2 分为对照组(转染空质粒)、FTO组(转染FTO过表达质粒)、si-FTO组(转染si-FTO)、si-FTO+si-FoxO1组(同时转染si-FTO和si-FoxO1).RT-qPCR检测细胞中FTO相对表达量;用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Dot blot检测m6A甲基化水平;蛋白质印迹检测细胞中FoxO1 蛋白表达.结果 通过人类癌基因库(TCGA)分析肝癌患者总体生存期发现FTO高表达提示更短的生存期(P＜0.05).和正常肝细胞系HL7702 相比,HepG2 细胞中FTO表达明显升高(P＜0.05).和对照组相比,si-FTO组细胞中FTO相对表达量明显降低,FTO组细胞中FTO相对表达量明显升高(P＜0.05);和si-FTO组相比,si-FTO+si-FoxO1 组细胞中FTO相对表达量明显升高(P＜0.05).si-FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m6A相对表达量均低于对照组,细胞凋亡率、FoxO1 蛋白表达均高于对照组(P＜0.05);FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m6 A相对表达量明显高于对照组,细胞凋亡率、FoxO1 蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05);si-FTO+si-FoxO1 组细胞活性、侵袭细胞数目、m6 A相对表达量均高于si-FTO组,细胞凋亡率、FoxO1 蛋白表达均低于si-FTO组(P＜0.05).结论 高表达FTO与临床预后较差相关,去甲基化酶FTO敲减可抑制肝细胞癌的增殖和侵袭,诱导肝细胞癌的凋亡,其作用机制可能和调控FoxO1 表达有关.