目的 设计合成系列以伊布替尼类似物为布鲁顿酪氨酸激酶(bruton's tyrosine kinase,BTK)激酶配体的蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeras,PROTAC)降解剂,并初步评价其体外活性.方法 以3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺为起始原料,通过取代、还原胺化、脱保护和水解等反应合成一系列新型PROTAC;通过MTS法和蛋白免疫印迹法(Western-blot)分别测定目标化合物对OCI-LY10 细胞的增殖抑制能力和BTK降解活性;通过分子对接考察分子配体与BTK蛋白的结合模式.结果 共合成了14 个BTK PROTAC降解剂,大部分化合物都具有一定的体外活性,其中化合物 15a表现出了较好的细胞增殖抑制活性(IC50=7.15 nmol·L-1)和BTK降解活性(DC50<10 nmol·L-1).结论 合成了结构新颖、活性较好的BTK PROTAC降解剂,对其构效关系进行了初步探索,可为BTK PROTAC降解剂的进一步研究提供参考.

目的 筛选养心草抗肺癌活性部位.方法 运用系统溶剂法制备养心草各提取部位;体外培养肝癌A549细胞,采用MTT法检测细胞株半数抑制浓度(IC50),以IC50作为评价指标,初步筛选出养心草抗肿瘤的有效部位.同时,建立肺癌LLC细胞移植瘤小鼠模型,通过观察肿瘤体积、小鼠体质量、脏器指数及瘤体质量的变化,对养心草的抗肿瘤效果进行评价养心草石油醚部位及乙酸乙酯部位的体内抗肺癌作用.结果 MTT实验结果表明养心草不同提取部位中石油醚部位和乙酸乙酯部位对肺癌A549细胞的增殖显示较强的抑制作用;体内小鼠肺癌LLC细胞移植瘤实验表明石油醚部位和乙酸乙酯部位可明显抑制小鼠肿瘤的生长(P＜0.05),且具有剂量依赖性,并对鼠体质量及脏器指数未产生显著影响(P＞0.05).结论 养心草的石油醚部位和乙酸乙酯部位是其抗肺癌的有效部位.

目的:制备鞣花酸纳米微囊并观察其对乳腺癌MCF-7细胞株行为学特征的影响，以分析其抗肿瘤效果有无改进。方法:采用层层自组装法制备鞣花酸壳聚糖纳米微囊，观察其体外抗氧化活性与游离鞣花酸的差异性。同时体外培养MCF-7细胞，设立MCF-7组、游离鞣花酸组和纳米微囊组(均 n＝3)，MCF-7组正常培养，游离鞣花酸组和纳米微囊组分别加入游离鞣花酸和鞣花酸纳米微囊共培养48 h，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与流式细胞实验检测细胞增殖与凋亡活力。计量资料先行正态分布和方差齐性检验，计数资料以率和构成比表示，两组间比较采用卡方检验。 结果:抗氧化测试结果显示，鞣花酸纳米微囊的吸光度( A734)值为0.652±0.134，明显低于游离鞣花酸的0.855±0.121( P<0.05)。体外细胞学实验结果显示，MCF-7组、游离鞣花酸组、纳米微囊组的 A450值依次为0.854±0.102、0.595±0.077、0.452±0.046，组间差异有统计学意义( F＝20.265， P<0.01)，且纳米微囊组高于游离鞣花酸组( F＝12.258， P<0.05)，游离鞣花酸组高于MCF-7组( F＝31.024， P<0.05)；MCF-7组、游离鞣花酸组、纳米微囊组的细胞凋亡率依次为(6.25±0.87)%、(15.63±2.22)%、(21.52±2.54)%，组间差异有统计学意义( F＝43.985， P<0.01)，纳米微囊组低于游离鞣花酸组( F＝26.071， P<0.05)，且游离鞣花酸组低于MCF-7组( F＝14.356， P<0.01)。 结论:成功制备了鞣花酸纳米微囊，并证实其体外抗氧化活性和抗乳腺癌活性优于游离的鞣花酸。

目的:探讨维纳托克(Venetoclax)在HepG2、Hep3B 2个肝癌细胞株的抗癌活性。方法:对人肝癌细胞株HepG2、Hep3B细胞株进行体外培养，采用不同浓度的Venetoclax(0、3、10、30 μmol/L)处理肝癌细胞，以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性，0，3, 10和30 μmol/L Venetoclax作用细胞48 h，锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡，0，5 μmol/L Venetoclax，作用24 h，流式细胞学检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测Venetoclax诱导半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活化，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解。组间比较采用 t检验。 结果:Venetoclax对HepG2、Hep3B细胞株均有较强活性抑制作用。不同浓度的Venetoclax处理肝癌细胞48、72 h，Venetoclax在HepG2细胞株中取得的半数细胞活性抑制率(IC 50)值分别为46.5 μmol/L和14.2 μmol/L；在Hep3B细胞的IC 50值分别为24.6 μmol/L和11.2 μmol/L。处理24 h，30.0 μmol/L的Venetoclax在HepG2和Hep3B细胞株中诱导57%[对照组、实验组凋亡率分别为(4.00±1.00)%、(56.67±8.51)%， t＝-10.650， P<0.01]和54% [对照组、实验组凋亡率分别为(5.67±1.53)%、(54.33±9.87)%， t＝-8.440， P<0.01]的肝癌细胞发生凋亡，并能诱导肝癌细胞的Caspase-3活化，PARP裂解，差异均有统计学意义。用0、3、10和30 μmol/L的Venetoclax处理48 h，在HepG2细胞株中可诱导3%(3.26±1.71)%，12%[(12.36±1.99)%，( t＝-12.36， P<0.05)]，32%[(32.38±4.57)%，( t＝-10.350， P<0.01)]和67%[(66.71±6.29)%，( t＝-16.86， P<0.01)]的细胞死亡，差异均有统计学意义；在Hep3B细胞株诱导2%(1.91±0.68)%，16%[(15.72±3.40)%，( t＝-6.890， P<0.05)]，42%[(42.39±6.86)%，( t＝-10.180， P<0.01)]和73%[(73.32±2.69)%， t＝-44.490， P<0.01]的细胞死亡，差异均有统计学意义。应用半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂预处理，Venetoclax对HepG2和Hep3B细胞的死亡率分别从56%(56.71±6.29)%降低至11%(10.70±1.43)%，( t＝12.350， P<0.01)和68%(68.05±10.16)%至12%(12.7±6.12)%，( t＝8.080， P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:Venetoclax能够通过诱导Caspase的活化，诱导肝癌细胞发生凋亡，并对肝癌细胞进行杀伤。

目的:构建靶向血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)可调控活性的小分子门控嵌合抗原受体T(smgCAR-T)细胞系统并在体外验证其抗肿瘤和可调节活性。方法:采用基因全长合成和磷酸钙转染法构建smgCAR-T及其阳性(CAR ＋-T)和阴性(CAR --T)对照细胞。同时构建表达VEGFR2的小鼠结直肠癌细胞(MCA38 VEGFR2＋)。验证并筛选构建成功的细胞后再体外验证CAR-T细胞靶向结合能力。在不同的效靶比下检测白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-γ的浓度来评估CAR-T细胞的体外分泌功能，用乳酸脱氢酶浓度评估CAR-T细胞的体外抗肿瘤活性。组间的比较采用 t检验或单因素方差分析。 结果:基因测序和流式细胞术证实CAR-T细胞和靶细胞构建成功。与对照组比较，CAR ＋-T细胞＋MCA38 VEGFR2＋组具有最强的靶细胞杀伤能力。在smgCAR-T细胞＋MCA38 VEGFR2＋组中，随着C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(Rapalog)滴度升高靶细胞杀伤率逐渐升高；当Rapalog为40 nmol/L时杀伤率达到最大值，为(66.25±13.20)%。分别向smgCAR-T细胞＋MCA38 VEGFR2＋细胞组(A和B组)加入40 nmol/L的Rapalog后，在24 h时可观察到两组杀伤率出现同步升高[(44.25±6.24)%比(49.25±5.56)%， t＝1.197， P>0.05]，差异无统计学意义。在置换培养基后，再次添加了Rapalog的A组中观察到靶细胞杀伤率升高明显；而未再次添加Rapalog的B组中靶细胞杀伤率升高缓慢；此时，A和B组杀伤率差异有统计学意义[(89.00±3.16)%比(56.50±6.61)%， t＝8.873， P<0.01]。 结论:构建的smgCAR-T细胞在体外展现出一定的抗肿瘤活性，且其活性受小分子化合物Rapalog的可逆调控。

目的:制备靶向成纤维细胞激活蛋白(FAP)的四聚体探针1，4，7，10－四氮杂环十二烷－1，4，7，10－四乙酸(DOTA)－4P[FAP抑制剂(FAPI)] 4，评价其在FAP表达阳性荷瘤裸鼠模型中的生物分布和PET显像，并探讨其用于FAP阳性肿瘤治疗的可行性。 方法:基于FAPI－46单体结构在4个FAPI活性基团之间各加入4个微型聚乙二醇(PEG)(PEG 3)，构建靶向FAP的四聚体探针4P(FAPI) 4，并经螯合剂DOTA偶联完成四聚体探针的 68Ga和 177Lu标记。通过体外细胞实验鉴定四聚体在体外对FAP结合性能。在FAP表达阳性的HT－1080－FAP荷瘤裸鼠模型中进行小动物PET显像和生物分布实验，并行核素靶向内照射治疗的实验研究(共39只)。肿瘤摄取数据比较行两独立样本 t检验分析；核素治疗中肿瘤体积数据的比较采用重复测量方差分析。 结果:细胞体外实验显示，DOTA－4P(FAPI) 4和单体FAPI－46的半数抑制浓度值相似(3.29和2.15 nmol/L)。PET显像及生物分布数据显示， 68Ga/ 177Lu标记的FAPI四聚体具有高度靶向FAP的特异性，且较其单体FAPI－46具有更高的肿瘤摄取及更持久的瘤内滞留时间：注射后48 h 177Lu－DOTA－4P(FAPI) 4和 177Lu－FAPI－46肿瘤摄取分别为(18.72±1.32)与(2.72±1.20)每克组织百分注射剂量率(%ID/g)( t＝15.55, P<0.001)。在核素治疗实验中， 177Lu－DOTA－4P(FAPI) 4较 177Lu－FAPI－46和对照组(100 μl生理盐水注射)显示出更好的抗肿瘤治疗效果：在治疗开始后第2天，四聚体治疗组肿瘤体积明显小于对照组(平均值差值67.19 mm 3， P＝0.049)；在治疗开始后第14天，四聚体治疗组肿瘤体积明显小于单体治疗组(平均值差值414.33 mm 3， P＝0.005)。 结论:与FAPI－46相比，FAPI四聚体DOTA－4P(FAPI) 4在肿瘤摄取和滞留方面均有较大幅度的提升， 177Lu－DOTA－4P(FAPI) 4有望成为一种有前景的放射性药物应用于FAP阳性肿瘤的核素内照射治疗。

目的:探讨程序性死亡受体1（PD-1）/程序性死亡受体配体1（PD-L1）通路在急性髓系白血病（AML）患者中的表达及其与临床特征、预后的关系，并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤（NK）细胞抗AML细胞的影响。方法:前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州大学附属肿瘤医院确诊的65例AML患者骨髓标本及32例AML患者外周血，同时留取24名健康人外周血作为健康对照。流式细胞术检测骨髓肿瘤细胞PD-L1、外周血NK细胞PD-1表达水平，分析骨髓肿瘤细胞PD-L1与NK细胞PD-1表达与患者临床病理特征及疗效、预后的关系。流式细胞术检测AML细胞株THP-1（靶细胞）的PD-L1、NK细胞株NKL（效应细胞）的PD-1表达水平。经及未经PD-L1抑制剂梣酮（25 μmol/L）处理的THP-1细胞分别为实验组和对照组，分别与NKL细胞按不同效靶比共培养。流式细胞术检测THP-1细胞凋亡情况和NKL细胞NKG2D的表达水平，CCK-8法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养体系上清中干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果:AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于健康对照组[38.5%（25/65）比8.3%（2/24）， P＝0.029]，AML患者外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例高于健康对照组[40.6%（13/32）比12.5%（3/24）， P＝0.035]。骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性和阴性患者间及外周血NK细胞PD-1阳性和阴性患者间性别、年龄、就诊时血象、原始细胞比例、危险度分层、染色体核型、有无基因突变（除外NPM1基因）、融合基因及法、美、英协作组（FAB）分型的构成差异均无统计学意义（均 P>0.05）。复发难治患者中骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于初治患者[58.8%（10/17）比31.2%（15/48）， P＝0.045]，复发难治患者与初治患者间外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例的差异无统计学意义[38.5%（5/13）比42.1%（8/19）， P＝0.837]。PD-L1阳性与阴性患者完全缓解（CR）率差异无统计学意义[69.6%（16/23）比74.3%（26/35）， P>0.05]；PD-1阳性与阴性患者CR率差异无统计学意义[66.7%（8/12）比70.6%（12/17）， P>0.05]。PD-L1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[12.5%（2/16）比19.2%（5/26）， P>0.05]；PD-1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[25.0%（2/8）比16.7%（2/12）， P>0.05]。流式细胞术检测示，NKL细胞PD-1阳性率为（67±6）%，THP-1细胞PD-L1阳性率为（85±5）%。与NKL细胞共培养后，与对照组相比，实验组THP-1细胞凋亡率和增殖抑制率均明显增高，NKL细胞表面NKG2D表达升高，共培养上清中IFN-γ、TNF-α水平升高。 结论:AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平较高，外周血NK细胞PD-1表达水平亦较高，复发难治AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平高于初治患者。体外抑制THP-1细胞PD-L1表达可增强NKL细胞肿瘤杀伤活性，其机制可能是抑制THP-1细胞PD-L1表达后上调了NKL细胞活化型受体NKG2D的表达以及促进了IFN-γ和TNF-α的分泌。

目的:探讨硒化亚铜（Cu 2Se）纳米的制备、物化表征及其对胃癌的抗肿瘤效应。 方法:采用透射电镜，水合粒径分析，Zeta电位分析及紫外吸收光谱分析方法分析Cu 2Se纳米的形貌、粒径大小及类芬顿性能，同时采用激光共聚焦、细胞毒性（CCK-8）、Transwell实验评估该纳米的体外抗肿瘤作用效应毒性，最后构建单侧皮下荷瘤模型探究Cu 2Se纳米的体内抗肿瘤作用。 结果:制备的Cu 2Se纳米为100 nm左右的类圆形中空结构，可催化过氧化氢生成单线氧。激光共聚焦实验表明Cu 2Se可以促进胃癌细胞活性氧生成，诱导铁死亡发生；CCK-8实验表明，Cu 2Se纳米对胃癌细胞具有浓度依赖性抑制增殖作用；Transwell实验表明，Cu 2Se纳米能抑制胃癌细胞的侵袭迁移能力；裸鼠单侧皮下荷瘤模型表明Cu 2Se纳米能安全高效抑制肿瘤增殖。 结论:Cu 2Se纳米具有良好的类芬顿效能，可诱导胃癌铁死亡发生，具备良好的体内外抑制抗肿瘤效应，是胃癌治疗的一种潜在新方法。

天然斑蝥素源自于芫青科昆虫斑蝥。斑蝥作为传统中药昆虫类药物之一，对消化道肿瘤等实体肿瘤、机体顽癣、瘰疬、赘疣、斑秃、颜面神经麻痹等具有一定的治疗作用。西医基础研究表明，斑蝥提取物斑蝥素在体外明显干预肿瘤细胞凋亡、自噬等生物学过程，具有显著的抗肿瘤活性。天然提取的斑蝥素或斑蝥虫中药炮制品毒副作用明显，相关药品的直接使用不仅对皮肤、粘膜具有剧烈的刺激作用，也会对肝、肾、胃等主要脏器功能产生显著损害，因此限制了它在临床中的广泛应用。近年研究表明，人工制备的天然斑蝥素的化学衍生物(去甲斑蝥素、斑蝥胺、斑蝥素钠等)可显著降低毒副作用并保留天然斑蝥素的部分生物学功能，有望成为包括肿瘤在内的多种疾病的潜在有效药物。文章对斑蝥素及其衍生物在肿瘤治疗中的作用机制以及应用前景作一综述。

目的:观察IL-24在体外对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者单核细胞功能的影响。方法:本研究入组25例NSCLC患者和20例健康对照，收集外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，分选单核细胞，逆转录实时定量PCR法检测单核细胞中IL-22R1、IL-20R1和IL-20R2 mRNA表达。应用不同浓度的重组人IL-24(10 ng/ml和100 ng/ml)刺激纯化的单核细胞，流式细胞术检测Fas配体(FasL)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达变化，酶联免疫吸附试验检测颗粒酶A、颗粒酶B和颗粒酶H水平变化。NSCLC患者外周血单核细胞与A549细胞共培养，观察IL-24刺激后单核细胞诱导靶细胞死亡比例，观察使用氯甲基酮Z-AAD-CMK抑制颗粒酶B后单核细胞杀伤功能的变化。组间比较采用 t检验或LSD- t检验。 结果:单核细胞中未检测到IL-22R1 mRNA表达，单核细胞中IL-20R1和IL-20R2 mRNA表达在健康对照和NSCLC及在非肿瘤部位和肿瘤部位之间的差异均无统计学意义( P>0.05)。NSCLC患者外周血和肿瘤部位单核细胞FasL、TRAIL水平及分泌颗粒酶水平均显著低于健康对照和非肿瘤部位( P<0.05)，IL-24刺激不影响FasL、TRAIL水平和颗粒酶A、颗粒酶H分泌( P>0.05)，低浓度IL-24(10 ng/ml)刺激不影响单核细胞分泌颗粒酶B( P>0.05)，高浓度IL-24(100 ng/ml)刺激显著提升颗粒酶B分泌水平( P<0.05)。低浓度IL-24(10 ng/ml)对单核细胞诱导的靶细胞死亡无显著影响( P>0.05)，而高浓度IL-24(100 ng/ml)刺激NSCLC患者单核细胞可诱导靶细胞死亡比例升高( P<0.05)，Z-AAD-CMK刺激可抑制高浓度IL-24介导的单核细胞杀伤功能提升( P<0.05)。 结论:高浓度IL-24在体外可通过提升颗粒酶B分泌增强单核细胞的杀伤功能，但在体内IL-24可能并不影响单核细胞功能。