目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达.体外分离培养人VSMC,随机分为 对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics 组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控.结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(尸＜0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P＜0.05).与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA 组、miR-513b-5p mimics 组细胞 GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67 阳性率、迁移率、侵袭数及 N-cadherin、Vimentin 蛋白表达降低(P＜0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P＜0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P＜0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P＜0.05).结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡.

目的:探讨趋化素在特发性肺纤维化（IPF）中的表达及其作用。方法:分别使用定量PCR与蛋白质免疫印迹法测定对照与IPF患者肺部组织中趋化素的mRNA及蛋白表达水平，通过酶联免疫吸附实验检测临床血清样本中趋化素的含量。构建肺纤维化体外模型，将分离得到的原代成纤维细胞分成对照组、TGF-β组、TGF-β+趋化素组和趋化素组，使用免疫荧光法检测各组成纤维细胞α-平滑肌蛋白（α-SMA）表达水平。构建肺纤维化体内模型，采用随机分组法将C57BL/6小鼠分成对照组、博来霉素组、博来霉素+趋化素组和趋化素组，通过肺组织病理学染色观察各组小鼠肺纤维化严重程度。通过定量PCR与免疫组化染色法分别检测肺纤维化体外与体内模型中上皮间充质转化（EMT）标记基因的表达情况。结果:与对照组相比，IPF患者肺组织与血清中趋化素表达量均下调。免疫荧光结果显示，TGF-β组α-SMA表达水平较对照组明显增强，TGF-β+趋化素组中α-SMA表达水平则与对照组相仿。病理学染色结果显示，博来霉素组小鼠较对照组肺组织纤维化病变明显，趋化素表达量显著下调；博来霉素+趋化素组小鼠肺组织受损程度则有所缓解。定量PCR与免疫组化结果显示，趋化素在A549细胞与小鼠肺组织中分别减弱了由TGF-β与博来霉素诱导的EMT作用。结论:趋化素在IPF患者中表达降低；趋化素可能通过调控EMT而在肺纤维化的发生中发挥保护作用。

目的:探讨自噬是否参与屋尘螨(HDM)诱导的哮喘气道重塑，评估自噬抑制剂氯喹(CQ)在小鼠哮喘模型中的临床疗效。方法:用转化生长因子-β(TGF-β)单独或联合自噬抑制剂CQ共同体外培养人支气管上皮细胞，蛋白质印迹法(Western blot)检测气道重塑相关蛋白胶原蛋白Ⅰ(Collagen-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及自噬相关蛋白(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达。2、用6~8周龄的BALB/c小鼠建立HDM诱导过敏性哮喘动物模型，正常对照组用生理盐水替代；HDM+CQ组小鼠在HDM激发第4周开始同时给与CQ(50 mg/kg)鼻内注射2周，收集支气管肺泡灌洗液，进行嗜酸性粒细胞，中性粒细胞分析计数，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TGF-β、白细胞介素(IL)-4、IL-5含量，采用两样本 t检验、单因素方差分析统计数据。 结果:TGF-β可增强人支气管上皮细胞Collagen-Ⅰ、α-SMA及自噬标志物LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达，加用自噬抑制剂CQ后Collagen-Ⅰ、α-SMA表达均被到抑制HDM+CQ组嗜酸细胞数低于HDM组[(1.36±0.17)×10 5比(2.54±0.13)×10 5， t＝13.275， P<0.01]；HDM+CQ组中性粒细胞数低于HDM组[(0.45±0.06)×10 5比(0.59±0.08)×10 5， t＝72.582， P<0.05]；HDM组TGF-β高于对照组[(16.82±1.35) ng/ml比(5.90±1.03) ng/ml， t＝11.234， P<0.01]；HDM+CQ组TGF-β低于HDM组[(13.13±1.98) ng/ml比(16.82±1.35) ng/ml， t＝17.035， P<0.05]；HDM+CQ组IL-4低于HDM组[(52.75±5.12) pg/ml比(61.13±4.57) pg/ml， t＝10.790， P<0.05]。Western blot检测肺组织匀浆中Collagen-Ⅰ、α-SMA及LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达：HDM组Collagen-Ⅰ、α-SMA及LC3-Ⅱ的表达较对照组均明显增强，给与自噬抑制剂CQ后Collagen-Ⅰ、α-SMA的表达明显减弱。 结论:自噬参与了过敏性哮喘的气道重塑，自噬抑制剂可减轻哮喘模型小鼠中气道炎性细胞的聚集及气道重塑因子的生成。

目的:在体内外实验中探讨中药组合物夏丹芪(冬虫夏草、丹参、黄芪)对小鼠氡暴露肺组织损伤的防治效果。方法:建立氡暴露小鼠模型，分为健康对照组、氡暴露组和夏丹芪干预氡暴露组，每组6只。HE和Masson染色观察120 WLM时各组小鼠肺组织病理变化，免疫组织化学法检测肺组织α-SMA蛋白和Vimentin蛋白表达；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测各组肺组织氧化应激水平。同时，利用生态氡室构建氡暴露细胞模型和氡暴露+夏丹芪干预细胞模型，粘附试剂盒检测不同组细胞粘附能力；Transwell迁移实验确定各组细胞迁移能力；Western blot法检测各组细胞E-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。结果:与氡暴露组相比，2 mg/g夏丹芪干预可使氡暴露小鼠肺组织MDA浓度降低( t＝4.43， P<0.05), SOD活性升高( t＝3.22， P<0.05)；肺组织α-SMA和Vimentin蛋白表达降低( t＝3.08、7.57， P<0.05)。在体外实验中，与单纯氡暴露组相比，150和200 μg/ml夏丹芪干预后氡暴露细胞迁移能力下降( t＝4.78、13.01， P<0.05)，细胞粘附性能增强( t＝3.41、12.55， P<0.05)；E-cadherin蛋白表达增高( t＝2.96、19.57， P<0.05)，Vimentin蛋白表达明显下降( t＝21.00、33.32， P<0.05)。 结论:中药组合物夏丹芪可通过降低辐射诱发的氧化应激、减弱氡暴露诱发的上皮细胞间质转化和纤维化，对氡暴露损伤具有一定的辐射防护作用，有望成为氡损伤的辐射防护剂。

目的:研究蛋白激酶D-1(PKD-1)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达以及PKD-1信号调控NEN细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制，探讨其与NEN转移的相关性。方法:通过免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法，检测人胰腺NEN组织中PKD-1以及波形蛋白(Vimentin)、白细胞共同抗原(CD45)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及分布，分析转移性肿瘤细胞中PKD-1的表达；通过体外培养BON细胞，分别激活和阻断PKD-1信号，或以表皮生长因子(EGF)处理细胞，以免疫荧光染色、蛋白质印迹法(Western blot)和反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法，检测BON细胞中EMT相关标志物的表达，分析PKD-1信号对BON细胞EMT的调控机制。两样本间比较采用 t检验，多样本间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:NEN组织中Vimentin +转移性肿瘤细胞有在小动脉周围聚集现象，且PKD-1在NEN肿瘤细胞转移过程中呈动态变化；PKD-1信号能够促进BON细胞Vimentin的表达[(56.67±1.93)%比(35.55±2.22)%， t＝7.178， P<0.01]并升高PKD-1和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平，EGF能刺激BON细胞发生间质样形态变化，并降低E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达(0.517±0.005比1.000±0.004， t＝74.63， P<0.001)而增加Vimentin的表达(9.632±0.646比1.004±0.061， t＝13.29， P<0.001)。 结论:NEN中PKD-1信号是调控肿瘤细胞EMT的重要机制；血管内皮细胞分泌EGF可能通过PKD-1信号诱导肿瘤细胞EMT，促进肿瘤转移。

目的:研究艾拉莫德是否能够抑制TGF-β 1诱导的人肺成纤维细胞（HLFs）活化及胶原分泌。 方法:在体内，建立小鼠肺纤维化模型，分为3组：正常对照组、博莱霉素组和博莱霉素+艾拉莫德组，苏木精-伊红（HE）染色观察肺形态，马松染色观察肺内胶原积累程度，组织免疫荧光检测肺内肌成纤维细胞标志蛋白纤维连接蛋白（fibronectin）和平滑肌22蛋白（SM22），氯胺-T法检测肺组织羟脯氨酸含量。在体外，用原代人肺成纤维细胞（pHLFs）进行细胞实验评估艾拉莫德对TGF-β 1刺激的影响，分为4组：正常对照组、艾拉莫德组、TGF-β 1组、TGF-β 1+艾拉莫德组，流式细胞术检测细胞的凋亡情况，实时荧光定量（qRT）-PCR检测细胞Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平，蛋白质印迹法和细胞免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、fibronectin、p-Smad2和p-Smad3以及转录辅助激活因子p300的蛋白水平。数据均采用单因素方差分析，两两比较用LSD- t检验或Kruskal-Wallis检验。 结果:羟脯氨酸含量：正常对照组为（0.552±0.075）μg/mg，博莱霉素组为（1.293±0.081）μg/mg，博莱霉素+艾拉莫德组（0.833±0.053）μg/mg （ F=169.672， P<0.01），艾拉莫德降低了小鼠肺组织羟脯氨酸含量，减少了肺内胶原积累，从而降低了博莱霉素诱导的肺纤维化程度，改善了小鼠肺部病理改变。在细胞实验中，艾拉莫德对细胞凋亡比例差异无统计学意义（ F=0.83， P=0.54）；Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量：正常对照组为（100.4±1.2），TGF-β 1组为（299.0±13.0），TGF-β 1+艾拉莫德组（202.5±7.0）（ F=468.7， P<0.01）；Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达量：正常对照组为（99.8±1.9），TGF-β 1组为（350.6±8.0），TGF-β 1+艾拉莫德组（220.3±9.9）（ F=468.7， P<0.01）；α-SMA蛋白相对表达量：正常对照组为（0.193±0.038），TGF-β 1组为（0.530±0.061），TGF-β 1+艾拉莫德组为（0.410±0.065）（ F=35.620， P<0.01）；Fibronectin蛋白相对表达量：正常对照组为（0.200±0.020），TGF-β 1组为（0.700±0.020），TGF-β 1+艾拉莫德组为（0.410±0.066）（ F=123.326， P<0.01）；p-Smad3蛋白相对表达量：正常对照组为（0.120±0.020），TGF-β 1组为（0.573±0.586），TGF-β 1+艾拉莫德组为（0.327±0.252）（ F=92.987， P<0.01）；p300蛋白相对表达量：正常对照组为（0.180±0.055），TGF-β 1组为（0.923±0.025），TGF-β 1+艾拉莫德组（0.650±0.050）（ F=207.676， P<0.01）。艾拉莫德显著降低TGF-β 1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平，抑制α-SMA、Fibronectin、p300蛋白表达，以及Smad2、Smad3蛋白的磷酸化。 结论:艾拉莫德能够经Smad3/p300通路抑制TGF-β 1介导的人肺成纤维细胞活化及胶原分泌，它可能作为一种有效的抗纤维化药物用于延缓PF的进展。

目的:采用分子对接法筛选酪氨酸蛋白激酶受体B2（EphB2）小分子抑制剂，研究其对皮肤鳞状细胞癌（CSCC）的影响及可能机制。方法:利用Schrodinger对接工具预测EphB2蛋白的三维结构及其配体结合位点，通过分子对接进行高通量虚拟筛选EphB2抑制剂，通过体内外实验验证筛出的EphB2抑制剂山奈苷与芦荟大黄素（AE）抗CSCC的作用及机制。体外实验中，将人CSCC细胞系A431、SCL-1及人永生化表皮细胞HaCaT分别分为空白对照组、二甲基亚砜组、AE组与山奈苷组，通过MTT实验（AE浓度：20、40、80、160 μmol/L；山奈苷浓度：12.5、25、50、100 μmol/L）、划痕实验及Transwell小室实验（AE浓度：80 μmol/L，山奈苷浓度：50 μmol/L）分析EphB2抑制剂对CSCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。体内实验中，SPF级BALB/c雌性裸鼠皮下注射0.2 ml A431细胞悬液，待成功长出瘤体以后，随机分为4组（ n = 6），空白对照组、二甲基亚砜组、AE组（腹腔注射AE 20 mg·kg -1·d -1 AE）与山奈苷组（腹腔注射山奈苷25 mg·kg -1·d -1）；每周测量裸鼠的肿瘤大小和体重；连续给药28 d后，剥取裸鼠移植瘤进行HE染色，qRT-PCR与Western blot分析AE和山奈苷对裸鼠移植瘤中上皮钙黏着蛋白、波形蛋白、磷酸化葡萄糖合成激酶3β（p-GSK-3β）、β联蛋白及GSK-3β表达的影响。组间比较采用单因素方差分析及 t检验。 结果:筛选出对EphB2具有较高抑制活性的两个小分子化合物AA-504/20999031（山奈苷）和AA-466/21162055（AE）。MTT实验结果表明，与HaCaT细胞相比，AE对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性，且随AE浓度升高毒性变强（ F = 17.95， P<0.001），作用48 h时，IC50分别为124.59 μmol/L和80.85 μmol/L；山奈苷对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性，且随山奈苷浓度升高毒性变强（ F = 11.34， P<0.001），作用48 h时，IC50分别为119.64 μmol/L和64.96 μmol/L。划痕实验显示，与二甲基亚砜组细胞迁移距离（88.1±1.4） μm相比，AE组和山奈苷组A431细胞迁移距离[（36.7±1.0） μm和（44.7 ± 3.5） μm]显著缩短（ F = 52.34， P < 0.001），而HaCaT细胞迁移距离差异无统计学意义（ F = 1.73， P = 0.238）。Transwell小室实验表明，与二甲基亚砜组A431细胞跨膜细胞数量（195.3 ± 5.7）相比，AE组和山奈苷组A431细胞显著抑制（145.0 ± 2.5和94.7 ± 4.1， F = 72.85， P < 0.001），而对HaCaT细胞则无明显抑制作用（ F = 3.91， P = 0.055）。动物实验表明，与二甲基亚砜组裸鼠移植瘤体积（841.88 ± 84.63） mm 3相比，AE组和山奈苷组显著下降[（407.42 ± 70.37） mm 3与（368.77 ± 62.7） mm 3， F = 73.78， P < 0.001]。HE染色证实，AE和山奈苷干预可改善其病理变化。qRT-PCR与Western印迹结果显示，AE和山奈苷明显上调瘤体组织中上皮钙黏着蛋白与p-GSK-3β mRNA和蛋白表达水平（均 P < 0.001），下调波形蛋白、β联蛋白及GSK-3β mRNA和蛋白表达水平（均 P < 0.001）。 结论:分子对接筛选的小分子抑制剂与EphB2可形成稳定复合物，并通过影响Wnt/β联蛋白通路诱导的上皮间质转化现象来抑制CSCC进程。

目的:探讨核心蛋白聚糖(DCN)对膀胱癌细胞生长的影响。方法:以膀胱癌T24细胞株为研究对象，采用MTT法检测不同浓度、不同时间的DCN对T24细胞存活率的作用，采用流式细胞术分析DCN对T24细胞周期及凋亡的影响，采用ELISA和Western blot法检测DCN对转化生长因子-β1(TGF-β1)和P21蛋白表达的影响。结果:与其他浓度相比，40、50 μg/mL DCN作用72 h时对T24细胞的抑制作用最强，差异有统计学意义( P<0.05)，且G1期细胞达到最高值，S期细胞达最低值( P<0.001)。5、10、20、30、40、50 μg/mL DCN作用72 h后均能促进T24细胞凋亡，且在40 μg/mL时达到最大值( P<0.001)；与0 μg/mL相比，5、10、20、30、40、50 μg/mL DCN作用72 h对TGF-β1表达均有抑制作用，最明显的抑制作用浓度为40 μg/mL( P<0.001)；与0 μg/mL相比，40 μg/mL DCN能促进P21蛋白上调( P<0.001)。 结论:DCN在体外能够抑制膀胱癌T24细胞生长，诱导其凋亡，其可能的作用机制为下调TGF-β1及上调P2l蛋白表达。

人外周血B细胞来源于骨髓，是异质性的。EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)可在体外感染静止B细胞(naive B cells)，利用其潜伏基因表达产物改变B细胞生命周期，从而形成永生化B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines，B-LCLs)，是近年来常用的B细胞永生化的有效方法。B-LCLs常被用作外周血B细胞的替代物和DNA的资源库，通过其单克隆抗体分泌功能、抗原提呈作用和相对稳定的遗传背景等广泛应用于生命科学的各个领域。

目的:探讨SLE患者外周血初始CD4 + T细胞的TGF-β受体Ⅰ（TGF-βRⅠ）mRNA表达水平和疾病活动的相关性。 方法:磁珠分选法分离纯化SLE患者及健康对照组外周血单个核细胞中的初始CD4 +T细胞，实时定量PCR法检测初始CD4 + T细胞的TGF-βRⅠ mRNA水平，流式细胞术检测CD4 + T细胞中CD69阳性细胞的百分率。采用 t检验及Pearson相关性分析统计数据。 结果:SLE患者初始CD4 + T细胞的TGF-βRⅠ mRNA水平显著低于健康对照组[（0.674±0.873）与（1.445±1.112）， t=2.301， P<0.05]。SLE患者初始CD4 +T细胞的TGF-βRⅠ mRNA水平与SLEDAI评分（ r=-0.376， P<0.05），ESR（ r=-0.376， P<0.05）、血清肌酐（ r=-0.323， P<0.05）和尿蛋白定量（24 h）（ r=-0.331， P<0.05）均呈负相关，与血清补体C3（ r=0.528， P=0.001）呈正相关。累及肾脏的SLE患者初始CD4 + T细胞的TGF-βRⅠ mRNA水平较未累及肾脏的SLE患者更低[（0.505±0.536）与（1.071±1.007）， t=2.198， P<0.05]。血清抗dsDNA抗体阳性组初始CD4 + T细胞的TGF-βRⅠ mRNA水平较抗dsDNA抗体阴性组水平低[（0.344±0.315）与（0.958±1.076）， t=2.277， P<0.05]。体外实验中，SLE患者初始CD4 + T细胞活化后TGF-βRⅠ mRNA表达水平显著降低[（0.047±0.013）与（1.008± 0.129）， t=14.38， P<0.01]，地塞米松可上调活化的CD4 + T细胞TGF-βRⅠ mRNA表达水平[（0.240±0.042）与（0.047± 0.013）， t=7.845， P<0.01]，同时地塞米松可显著下调CD4 + T细胞的CD69表达水平[（15.0±2.1）%与（34.9±2.0）%， t=32.57， P<0.01]。 结论:SLE患者初始CD4 + T细胞的TGF-βRⅠ低表达可能参与了SLE疾病的发生发展，糖皮质激素治疗可上调初始CD4 + T细胞的TGF-βRⅠ mRNA水平，靶向TGF-βRⅠ可能成为治疗SLE的新方法。