目的:探讨促肾上腺皮质激素释放因子2型受体（CRFR2）对慢性偏头痛小鼠痛觉敏化及焦虑的调控作用及潜在机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、NBI35965组、K41498组，每组12只。后3组小鼠于第1、3、5、7、9天腹腔注射10 mg/kg硝酸甘油建立慢性偏头痛模型，NBI35965组及K41498组小鼠于第2、4、6、8天双侧三叉神经脊束尾核分别注射100 nL NBI35965、K41498溶液，对照组小鼠注射同体积生理盐水。第1、3、5、7、9天腹腔注射2 h后及第10天上午11时采用Von frey纤维丝检测小鼠眶额部机械痛阈值。于第11天上午11时采用高架十字迷宫实验检测小鼠的焦虑样行为。采用Western blotting实验检测小鼠三叉神经脊束尾核中促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、促肾上腺皮质激素释放因子1型受体（CRFR1）、CRFR2蛋白的表达。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测小鼠三叉神经脊束尾核中 CRFR1及 CRFR2 mRNA的表达。采用免疫荧光染色检测小鼠三叉神经脊束尾核中降钙素基因相关肽（CGRP）、即刻早期基因（c-fos）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及离子钙结合适配器分子1（Iba-1）蛋白的表达。 结果:（1）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠第3、5、7、9、10天的眶额部机械痛阈值较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠第7、9、10天的眶额部机械痛阈值较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（2）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠的开臂进入次数较少，开臂停留时间较短，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠的开臂进入次数较多，开臂停留时间较长，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CRF和CRFR2蛋白的表达较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CRF蛋白的表达较低，差异有统计学意义（ P<0.05）。（4）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中 CRFR2 mRNA的表达较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（5）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CGRP、c-fos、Iba-1、GFAP蛋白的表达均较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CGRP及c-fos蛋白的表达较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:CRFR2通过调控三叉神经脊束尾核的神经元活化及CGRP释放而影响慢性偏头痛小鼠眶额部痛觉敏化及焦虑样行为的发生发展。

目的:探讨龟鹿二仙胶(Guilu Erxian Jiao，GEJ)对创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder，PTSD)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)轴负反馈功能影响及其可能机制。方法:采用单一延长应激(single prolonged stress，SPS)的方法制备PTSD大鼠模型。96只SD大鼠按照随机数字表分为正常组(Control)、模型组(SPS)、龟鹿二仙胶组(GEJ)和帕罗西汀组(paroxetine，PRX)，每组24只。除正常组外，其余大鼠均进行造模。造模后第8天开始，龟鹿二仙胶组(3.6 g/kg)和帕罗西汀组(10 mg/ kg)大鼠分别灌胃给药，连续21 d；正常组和模型组大鼠则给予等量纯水灌胃，1次/d。连续灌胃21 d后，每组随机选取12只大鼠用于地塞米松抑制实验(dexamethasone suppression test，DST)，6只大鼠用于RT-PCR实验，6只大鼠用于免疫组化实验。采用Elisa法检测血浆促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone，ACTH)含量，RT-PCR和免疫组化法检测海马和杏仁核中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor，GR)、盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor，MR)、促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体(corticotropin releasing factor 1 receptor，CRF1R)和促肾上腺皮质激素释放因子Ⅱ型受体(corticotropin releasing factor 2 receptor，CRF2R)的表达。结果:(1)在DST中，模型组血浆ACTH含量较正常组明显下降[(145.89±19.41)μg/L，(203.59±35.78)μg/L， t＝3.16， P<0.01]；帕罗西汀组和龟鹿二仙胶组较模型组则显著升高[(218.47±37.55)μg/L， t＝3.98， P<0.01；(205.33±66.54)μg/L， t＝3.26， P<0.01]。(2)在RT-PCR实验中，模型组海马GR mRNA、MR mRNA表达较正常组明显升高[(1.29±0.02)，(1.00±0.06); t＝6.88， P<0.01; (1.38±0.02)，(1.00±0.05)， t＝7.97， P<0.01]；龟鹿二仙胶组较模型组则显著下降[(0.96±0.07)， t＝7.87， P<0.01; (0.86±0.13)， t＝11.03， P<0.01]。(3)免疫组化实验结果显示，模型组海马GR、MR阳性细胞表达较正常组明显升高[(84.33±12.82)，(69.33±8.19)， t＝2.50， P<0.05; (77.33±6.65)，(56.33±11.79)， t＝2.25， P<0.05]；龟鹿二仙胶组较模型组则显著下降[(68.33±4.55)， t＝2.67， P<0.05; (59.50±4.18 )， t＝2.25， P<0.05]。杏仁核中，模型组GR、MR和CRF1R阳性细胞表达较正常组均明显下降[(62.67±6.89)，(77.17±10.70)， t＝3.10， P<0.05; (60.50±11.66)，(91.83±15.63)， t＝3.43， P<0.05；(54.50±19.96)，(88.17±22.43)， t＝2.31， P<0.05]，龟鹿二仙胶组较模型组则显著上升[(74.33±5.85)， t＝2.11， P<0.05; (83.67±12.55 )， t＝2.53， P<0.05; (88.67±16.28)， t＝2.35， P<0.05]。 结论:龟鹿二仙胶能抑制SPS引起的HPA轴负反馈功能增强，其作用机制可能和龟鹿二仙胶调节海马和杏仁核中GR、MR和CRF1R的表达有关。

21－羟化酶缺陷症(21-OHD)是以皮质醇缺乏，伴或不伴醛固酮缺乏和高雄激素血症为主要特征的一类疾病，需终生补充外源性糖/盐皮质激素治疗。为控制高雄激素血症常需超常规剂量的外源性糖皮质激素，但效果仍不理想。促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)1型受体拮抗剂可直接阻断促肾上腺皮质激素生成，抑制肾上腺源性雄激素产生，减少糖皮质激素治疗剂量，从而降低不良反应发生率。现就21-OHD治疗及CRF1型受体拮抗剂研究现状作一综述。

目的:基于胶质细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)/CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)双信号探讨柴金解郁安神片(CJJY)含药血清对体外抑郁模型中大鼠前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)神经元突触损伤的保护机制.方法:原代培养SD大鼠ACC脑区星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元,并分别进行鉴定;采用200 μmol/L皮质酮(corticosterone,CORT)联合1 mg/L脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立模拟抑郁环境的体外细胞模型,实验设正常组、模型组(CORT+LPS)、GR阻断剂(GR-)组(CORT+LPS+RU486)、GR激动剂(GR+)组(CORT+LPS+dexamethasone)、CX3CR1阻断剂(CX3-)组(CORT+LPS+AZD8797)、CX3CR1激动剂(CX3+)组(CORT+LPS+fractalkine)、CJJY组(CORT+LPS+CJJY含药血清)、CJJY联合GR激动剂(CJJY/GR+)组(CORT+LPS+CJJY含药血清+dexamethasone)组和CJJY联合CX3CR1激动剂(CJJY/CX3+)组(CORT+LPS+CJJY含药血清+fractalkine);高内涵细胞成像分析技术观察星形胶质细胞、小胶质细胞和ACC神经元形态学变化;ELISA法检测细胞上清液中促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)、CORT、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和谷氨酸(glutamate,Glu)水平;免疫荧光染色检测星形胶质细胞中GR和囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGluT1)表达水平,以及小胶质细胞中CX3CR1和腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor,A2AR)表达水平;Nissl染色和β-tubulin染色观察神经元突触损伤情况.结果:CJJY含药血清能减轻体外抑郁模型中大鼠星形胶质细胞损伤,抑制小胶质细胞激活,同时抑制细胞上清液中ACTH、CRH、CORT、TNF-α、IL-1β、IL-6和Glu水平异常增高(P<0.05或P<0.01),有效调控GR、VGluT1、CX3CR1和A2AR表达异常(P<0.05或P<0.01),并减轻大鼠ACC神经元树突和树突棘损伤.结论:CJJY含药血清通过调控胶质细胞GR/CX3CR1双信号而减轻体外抑郁模型中大鼠ACC神经元突触损伤.

目的 探讨芍药甘草颗粒对斑秃样小鼠毛发生长、行为学及下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响.方法 C3H/HeJ小鼠42只,随机分为空白对照组、模型组、芍药甘草颗粒高、中、低剂量组、促肾上腺皮质激素释放激素1型受体拮抗剂组、复方甘草酸苷片组,每组6只,分别予以不同药物干预.进行照片和毛发镜拍摄、体重称量、行为学测定,以及促肾上腺皮质激素释放激素、促肾上腺皮质激素、皮质醇、糖皮质激素受体、脑源性神经营养因子检测.结果 与模型组比较,高剂量芍药甘草颗粒可加速斑秃样小鼠毛发再生及体重增长(P＜0.05),增加旷场实验运动总路程及中央区运动路程占总路程百分比(P＜0.05),减少强迫游泳实验及悬尾实验不动时间(P＜0.05),降低外周血促肾上腺皮质激素释放激素、促肾上腺皮质激素、皮质醇水平(P＜0.05),增加海马体糖皮质激素受体及脑源性神经营养因子表达(P＜0.05).结论 芍药甘草颗粒能促进斑秃样小鼠毛发生长、改善其行为学表现,其作用的发挥可能与下调促肾上腺皮质激素释放激素、促肾上腺皮质激素、皮质醇水平,上调糖皮质激素受体、脑源性神经营养因子表达,抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴过度活化相关.

目的 探讨杜仲改善大鼠产后抑郁的作用机制.方法 受孕雌鼠随机分为正常组、产后抑郁组和杜仲低、高剂量组(1.34、2.68 g/kg,以生药计),每组10只.除正常组外其余各组大鼠运用孕期旁观电击法建立产后抑郁大鼠模型;造模的同时,给药组大鼠灌胃相应药物,正常组及产后抑郁组大鼠灌胃生理盐水,持续21 d.观察各组大鼠实验期间的一般情况,通过旷场实验、Morris水迷宫实验和糖水偏好实验进行行为学评价,检测各组大鼠血清中皮质酮(CORT)、下丘脑中促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)和尿皮质素(UCN)、垂体中促肾上腺皮质激素(ACTH)水平,以及海马组织中CRF受体1(CRFR1)、CRFR2及电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)蛋白表达水平,海马组织凋亡细胞比例及JC-1高电位细胞比例,并观察海马组织形态.结果 与产后抑郁组比较,杜仲高剂量组大鼠食欲、精神、毛色均有所改善,体重有所增加;垂直运动、水平运动、自我梳理得分均显著升高(P＜0.05);第2～4天逃避潜伏期均显著缩短;穿越平台次数显著增加,每次穿越时间显著延长(P＜0.05);孕20 d及产后30 d糖水消耗比率显著升高(P＜0.05);CRF、UCN、ACTH、CORT水平,噬仔率,CRFR2、VDAC1蛋白表达水平,海马组织凋亡细胞比例均显著降低(P＜0.05);JC-1高电位细胞比例显著升高(P＜0.05);神经元细胞周围水肿现象明显改善.结论 杜仲可能通过抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴的过度激活,降低CRFR2的表达水平,进而抑制VDAC1的表达,并减少神经元细胞的凋亡,从而改善产后抑郁症状.

目的:基于促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)/CRF受体1(CRFR1)通路探讨培土抑木针法对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠黏膜屏障功能的影响及机制.方法:将40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、激动剂组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠采用番泻叶浸液灌胃联合慢性不可预知性温和刺激构建IBS-D大鼠模型.针刺组大鼠于造模后针刺一侧"天枢",电针"足三里""太冲"(2 Hz/15 Hz),每次 20 min,隔日左右交替,干预 14 d;激动剂组尾静脉注射CRFR1激动剂尿促皮素后 30 min进行针刺,针刺方法及时间均同电针组.干预后检测各组大鼠内脏痛阈值,进行粪便Bristol评分,采用高架十字迷宫实验和旷场实验评价大鼠焦虑抑郁行为,采用ELISA法检测大鼠血清CRF、CRFR1的含量,采用免疫组织化学法检测结肠组织中CRF、CRFR1,紧密连接蛋白闭锁连接蛋白 1(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白1(Claudin-1)阳性表达.结果:与空白组相比,模型组大鼠内脏痛阈值,高架十字迷宫开臂时间比(OT%)、旷场实验运动总距离,结肠ZO-1、Occludin、Claudin-1阳性表达下降(P<0.01,P<0.05),粪便Bristol评分,血清CRF、CRFR1含量,结肠CRF、CRFR1阳性表达上升(P<0.01).与模型组相比,干预后电针组内脏痛阈值,OT%、旷场实验运动总距离,结肠ZO-1、Occludin、Claudin-1阳性表达均上升(P<0.05,P<0.01),粪便Bristol评分,血清CRF、CRFR1含量,结肠CRF、CRFR1阳性表达下降(P<0.01);激动剂组粪便Bristol评分,血清CRF含量和结肠CRF阳性表达显著下降(P<0.01).结论:培土抑木针法可以显著改善IBS-D大鼠的内脏高敏、焦虑抑郁状态,其机制可能与抑制CRF/CRFR1通路,恢复肠道紧密连接蛋白表达有关.

目的:观察腧穴"解郁方"对慢性不可预测轻度应激(CUMS)抑郁大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴和脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶 B受体(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响.方法:40 只无特定病原体(SPF)级Sprague Danley(SD)雄性大鼠随机分为空白组(10只)、模型组(10只)、西药组(10只)、针刺组(10 只),除空白组外,其余 3 组连续28d构建CUMS抑郁大鼠模型,造模成功后,西药组连续 14d灌胃盐酸帕罗西汀混悬液,每日 1次;针刺组针刺百会、太冲、神门,每日 1次,每次 20 min,连续针刺 14 d.苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马病理变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)水平;免疫组化(IHC)检测海马 BDNF、TrkB表达情况,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)及实时荧光定量-聚合酶链式反应(PCR)测定海马BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA的表达.结果:与空白组比较,模型组血清 CRH、ACTH和 CORT含量上升(P<0.01),海马病理损伤严重,海马BDNF、TrkB 平均光密度降低(P<0.01),BDNF、TrkB、CREB蛋白及 mRNA明显下降(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,针刺组血清 CRH、ACTH、CORT含量下降(P<0.05),海马病理损害明显减轻,BDNF、TrkB平均光密度明显增加(P<0.05),BDNF、CREB、TrkB蛋白及 mRNA表达水平上升(P<0.05).结论:腧穴"解郁方"可能通过调节 HPA轴和调控 BDNF/TrkB/CREB信号通路,改善 CUMS诱导的大鼠抑郁样行为.

目的:观察半夏泻心汤对功能性消化不良(FD)大鼠抑郁样行为、下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其受体CRF-R1、CRF-R2 的影响.方法:48 只 SPF级 Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、半夏泻心汤低、中、高剂量组,共六组,每组各 8 只.空白组正常饲养,其余五组采用不规则喂养+夹尾激惹刺激法造模,造模成功后半夏泻心汤低、中、高各剂量组分别给予 0.62、1.24、2.48 g/ml剂量灌胃,氟西汀组给予 2 mg/kg 氟西汀,空白组及模型组均给予同等容积的蒸馏水,各组连续灌胃 14d.干预结束后采用糖水偏好实验和旷场实验测试各组抑郁样行为;HE染色观察大鼠胃窦组织基本形态;RT-qPCR和 Western blot检测大鼠下丘脑中 CRF、CRF-R1和CRF-R2 mRNA和蛋白的表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠体重、糖水偏好度、旷场实验移动总距离和直立次数均明显下降(P<0.05);下丘脑中CRF、CRF-R1 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01),CRF-R2 mRNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.01).与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组大鼠的体重、糖水偏好度、旷场实验移动总距离和直立次数均明显增加(P<0.05);半夏泻心汤各剂量组 FD大鼠下丘脑中 CRF、CRF-R1 mRNA 的表达量均明显降低(P<0.01),CRF-R2 mRNA的表达明显升高;半夏泻心汤高剂量组 FD大鼠下丘脑中 CRF蛋白表达均明显降低(P<0.01),半夏泻心汤各剂量组 FD大鼠下丘脑中CRF-R1 蛋白表达明显降低(P<0.01),CRF-R2 蛋白表达升高(P<0.05).结论:半夏泻心汤可通过调控 CRF通路,恢复 CRF-R1 和 CRF-R2 的平衡状态,发挥抗抑郁的作用.

目的:明确酸枣仁-五味子对孤养结合束缚应激(RS)模型大鼠的抗焦虑药效,并预测酸枣仁-五味子药对配伍后治疗焦虑症的作用靶点和信号通路.方法:采用RS模型大鼠,设置空白组、模型组、阳性药组、酸枣仁组、五味子组、酸枣仁-五味子合煎液组,通过旷场实验和高架十字迷宫实验对酸枣仁-五味子药对配伍前后治疗焦虑症的药效学进行评价;并对大鼠脑内神经递质、脑源性神经营养因子含量进行测定.通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和文献挖掘获得酸枣仁、五味子主要化学成分,通过SwissTargetPrediction平台预测药物相关靶点,利用GeneCards、TTD、DisGeNET、OMIM数据库获得焦虑症的潜在靶点.取药物-疾病交集基因,再利用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.根据拓扑学参数筛选酸枣仁、五味子配伍后治疗焦虑症的关键靶点.通过DAVID进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.利用Cytoscape 3.8.0 构建药物-活性成分-疾病-靶点-通路网络.结果:药效学实验结果显示,与空白组相比,模型组可造成大鼠焦虑;与模型组相比,酸枣仁-五味子药对明显增加RS模型大鼠进入旷场中央区的次数及停留时间(P<0.05),显著增加大鼠进入开臂次数的百分比(P<0.01);明显降低模型大鼠脑内 5-羟色胺(5-HT)的含量(P<0.05);明显提高模型大鼠脑内多巴胺(DA)的含量(P<0.05),显著提高脑源性神经营养因子(BDNF)的含量(P<0.01);但对γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、Glu/GABA、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和皮质酮(CORT)含量没有显著影响.网络药理学结果显示,药物-活性成分-疾病-靶点-通路网络中包含酸枣仁、五味子有效成分 13 个,有酸枣仁碱、当药黄素、胡萝卜甾醇、五味子乙素、五味子丙素、戈米辛A等,潜在作用靶点 148 个,包括Akt丝氨酸/苏氨酸激酶 1(Akt1)、肿瘤坏死因子(TNF)、钠依赖型 5-HT转运蛋白(SLC6A4)、钠依赖型多巴胺转运蛋白(SLC6A3)等,主要涉及的通路包括神经递质配体-受体相互作用通路、含血清素神经突触信号通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路、环磷酸鸟苷酸-环磷酸鸟苷酸效应蛋白激酶G(cGMP-PKG)信号通路,还涉及与激素调节相关的通路,如雌激素信号通路、促性腺激素分泌通路、催乳激素信号通路.结论:酸枣仁-五味子药对配伍后抗焦虑药效显著,其抗焦虑作用机制与调节 5-HT、DA、BDNF等含量,调控多条信号通路密切相关.本研究为酸枣仁-五味子药对治疗焦虑症的临床应用提供了理论和实验依据.