目的:探讨过表达三基序蛋白27（tripartite motif-containing, TRIM27）对小鼠重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）的保护作用及其可能机制。方法:24只小鼠按随机数字表法分为假手术+对照病毒组（AAV-GFP组）、假手术+过表达TRIM27组（AAV-TRIM27组）、SAP+对照病毒组（SAP+AAV-GFP组）、急性+过表达TRIM27组（SAP+AAV-TRIM27组），每组各6只。腹腔注射L-精氨酸（4 mg/kg）制作小鼠SAP模型，假手术组注射等体积生理盐水，病毒组通过腹腔注射对照或者TRIM27过表达腺相关病毒（2×10 11 μg/只）。各组小鼠建模后72 h处死收集血清及胰腺组织标本，通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α, TNF-α）、白介素1b（interleukin-1b, IL-1b）、IL-6、人巨噬细胞趋化蛋白-1（macrophage chemoattractant protein-1, MCP-1）以及胰腺组织中丙二醛（malondialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽（glutathione, GSH）等表达，通过苏木精-伊红染色观察胰腺组织病理损伤，通过免疫组化观察小鼠胰腺组织中髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）、Ly6g阳性炎症细胞表达，通过蛋白免疫印迹试验测定胰腺组织中p-p65、p65、p-ASK1、ASK1、p-JNK、JNK、p-p38、p38等蛋白表达。 结果:小鼠SAP后胰腺组织中TRIM27表达显著下调（ P<0.05）；通过腺相关病毒过表达TRIM27后，小鼠胰腺组织中TRIM27表达显著上调（ P<0.05）。AAV-GFP组与AAV-TRIM27组小鼠各指标比较差异无统计学意义（ P>0.05）。与SAP+AAV-GFP组相比，SAP+AAV-TRIM27组小鼠血清淀粉酶、脂肪酶以及TNF-α、IL-1b、IL-6、MCP-1水平显著降低，胰腺组织中MDA降低、SOD和GSH升高，MPO、Ly6g等炎症细胞表达显著减少，同时p-p65、p-ASK1、p-JNK、p-p38等蛋白表达显著下调（ P<0.05）。 结论:TRIM27过表达能够通过抑制炎症反应和氧化应激减轻小鼠急性，其机制可能是通过抑制NFκB/MAPK信号通路。

目的:构建携带含Krüppel样因子4(KLF4)基因的重组慢病毒载体，建立KLF4基因过表达的骨髓间充质干细胞株(BMSCs)，并观察颈动脉损伤后血管增生的变化。方法:以慢病毒为载体介导KLF4基因转染BMSCs。选用10周龄SD大鼠24只，随机分为3组，分别为假手术组、模型组、KLF4组(注入KLF4修饰的BMSCs细胞)。采用球囊导管构建大鼠颈动脉内皮损伤的动物模型，于14 d后股动脉放血处死大鼠，并采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组颈总动脉血管壁厚度变化及形态学变化；采用Griess法检测各组实验大鼠血清中一氧化氮(NO)的含量；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠颈动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、KLF4蛋白的表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:模型组内皮细胞增生高于假手术组(1.68±0.29比0.01±0.01， F＝244.345， P<0.05)，差异有统计学意义，而KLF4组内皮细胞增生低于模型组(0.14±0.01比1.68±0.29， F＝244.345， P<0.05)。模型组血清中NO浓度明显低于假手术组(7.22±1.40比21.29±1.83， F＝171.000， P<0.05)，差异有统计学意义，而KLF4组NO浓度明显高于模型组(16.34±1.33比7.22±1.40， F＝171.000， P<0.05)，差异有统计学意义。Western blot显示，KLF4/β-肌动蛋白(β-actin)在假手术组、模型组和KLF4组中的比值分别为0.564±0.015、0.626±0.023、0.916±0.042，差异有统计学意义( F＝125.121， P<0.05)；eNOS/β-actin在假手术组、模型组和KLF4组中的比值分别为0.852±0.043、0.383±0.017、0.707±0.014，差异有统计学意义( F＝223.879， P<0.05)。 结论:KLF4可正性调节eNOS的表达，从而增加血管中NO的浓度，通过抑制血管内皮细胞的迁移和增殖来抑制颈动脉损伤造成的血管狭窄。

目的:探讨基质相互作用分子1(STIM1)对脑缺血再灌注损伤后小胶质/巨噬细胞M1型活化的影响及机制。方法:(1)动物实验：采用随机数字表法将20只雄性C57BL/6J小鼠分为假手术组、大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)组、MCAO/R+si-Ctrl组及MCAO/R+si-STIM1组，后3组小鼠建立MCAO/R模型，MCAO/R+si-Ctrl组及MCAO/R+si-STIM1组小鼠分别转染空载体对照病毒和 STIM1基因敲除慢病毒。观察STIM1转染效率及各组小鼠中小胶质/巨噬细胞M1型活化标记物分化抗原86(CD86)的表达情况。(2)细胞实验：将原代小胶质细胞分为Ctrl组、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)组、OGD/R+si-Ctrl组、OGD/R+si-STIM1组、OGD/R+溶媒组及OGD/R+4-苯基丁酸(4-PBA)组。后5组细胞构建OGD/R模型，OGD/R+si-Ctrl组、OGD/R+si-STIM1组细胞分别转染空载体对照病毒和 STIM1基因敲除慢病毒；OGD/R+4-PBA组细胞在OGD/R造模前24 h使用1 mmol/L预处理1 h以抑制内质网应激(ERS)，OGD/R+溶媒组细胞同时间使用0.5%二甲基亚砜(DMSO)预处理1 h。采用Western blotting、ELISA、RT-qPCR等方法检测细胞模型中小胶质/巨噬细胞M1型活化标记物CD86、炎性因子肿瘤坏死因子-α( TNF-α) mRNA、IL-1β及ERS相关蛋白[转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)]的表达情况。 结果:(1)动物实验：MCAO/R+si-STIM1组STIM1表达水平较假手术组、MACO/R组及MCAO/R+si-Ctrl组均明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。与MCAO/R组及MCAO/R+si-Ctrl组比较，MCAO/R+si-STIM1组小鼠缺血灶周围CD86与Iba-1共表达的小胶质/巨噬细胞数显著降低，差异有统计学意义( P<0.05)。(2)细胞实验：与OGD/R组及OGD/R+si-Ctrl组相比，OGD/R+si-STIM1组细胞STIM1、CD86、 TNF-α mRNA表达水平及上清液中IL-1β含量均显著降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。同样地，与OGD/R组及OGD/R+si-Ctrl组相比，OGD/R+si-STIM1组细胞ERS相关蛋白ATF4、CHOP表达水平亦显著降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。此外，与OGD/R组及OGD/R+溶媒组相比，OGD/R+4-PBA组细胞中CD86表达水平、 TNF-α mRNA表达水平及IL-1β含量均显著降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:STIM1通过调控ERS水平影响脑缺血再灌注损伤后小胶质/巨噬细胞的M1型活化。

目的:制备靶向甲型流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)蛋白的广谱抗体FHA3，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，PCR扩增FHA3重链和轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FHA3。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FHA3。ELISA检测FHA3与甲型流感病毒HA的结合。假病毒感染宿主细胞试验检测抗体FHA3的体外中和活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FHA3。FHA3与甲型流感病毒H1N1 HA、H2N2 HA、H3N2 HA、H5N1 HA、H7N9 HA以及H9N2 HA均识别结合，且呈浓度依赖效应。FHA3具有较好的体外中和活性，在低浓度下(5 μg/ml)能有效阻断H5N1以及H7N9假病毒入侵靶细胞，在0.012 5 μg/ml浓度下能有效阻断H1N1假病毒入侵靶细胞。结论:获得1株具有体外中和活性的靶向甲型流感病毒HA蛋白的广谱抗体。

目的:评价富含鸟嘌呤序列的结合因子1(GRSF1)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与铁死亡的关系。方法:清洁级雄性C57BL/6小鼠24只，8~10周龄，体质量20~25 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注组(IR组)、脑缺血再灌注+GRSF1过表达组(IR+LV-GRSF1组)、脑缺血再灌注+GRSF1过表达+谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)抑制剂组(IR+LV-GRSF1+RSL3组)。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型。IR+LV-GRSF1组于造模前7 d时侧脑室注射GRSF1过表达慢病毒2 μl；IR+LV-GRSF1+ RSL3组造模前连续2 d腹腔注射GPX4抑制剂RSL3 5 mg/kg。再灌注24 h后TTC法确定脑梗死体积百分比，Nissl染色计数缺血区存活神经元，取缺血区脑组织，RT-qPCR法检测衰老标志物p16、p21及衰老相关分泌表型TNF-α的mRNA表达，ELISA法检测MDA、SOD和谷胱甘肽(GSH)含量，Western blot法检测GRSF1、GPX4、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和铁蛋白的表达水平。 结果:与Sham组相比，IR组脑梗死体积百分比升高，存活神经元计数降低，缺血区脑组织p16 mRNA、p21 mRNA及TNF-α mRNA表达上调，SOD和GSH含量降低，MDA含量升高，GRSF1和GPX4表达下调，ACSL4和铁蛋白表达上调( P<0.05)；与IR组相比，IR+LV-GRSF1组脑梗死体积百分比降低，存活神经元计数升高，缺血区脑组织p16 mRNA、p21 mRNA及TNF-α mRNA表达下调，SOD和GSH含量升高，MDA含量降低，GRSF1和GPX4表达上调，ACSL4和铁蛋白表达下调( P<0.05)；与IR+LV-GRSF1组相比，IR+LV-GRSF1+RSL3组脑梗死体积百分比升高，存活神经元计数降低，缺血区脑组织p16 mRNA、p21 mRNA及TNF-α mRNA表达上调，SOD和GSH含量降低，MDA含量升高，GPX4表达下调，ACSL4和铁蛋白表达上调( P<0.05)。 结论:GRSF1可通过上调GPX4表达，减轻氧化应激，进而抑制铁死亡，参与小鼠脑缺血再灌注损伤的内源性保护机制。

目的:探讨新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）特异性IgM和IgG抗体检测应用于不同人群新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）诊断和筛查的作用价值。方法:回顾性分析2020年4月至2020年7月间收集的48例SARS-CoV-2特异性IgM或IgG抗体阳性人员的血清抗体动态检测信息，分为COVID-19确诊病例组、疑似病例组、假阳性组。结果:15例COVID-19确诊病例组在患者确诊后0~4 d、5~9 d单纯IgM抗体阳性率为6.67%和13.33%，10~14 dIgM和IgG双抗体阳性率达100.00%；19例疑似病例组中单纯IgM抗体观察期间全部转为IgG抗体；14例假阳性人群表现为单IgM阳性，观察期间无1例IgG转阳。结论:动态检测SARS-CoV-2特异性抗体变化趋势可协助判断COVID-19感染情况，为临床提供一定的参考依据。

目的:制备1株靶向甲型流感病毒N1亚型神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的功能性抗体FNA1，并对其进行鉴定。方法:依据单链抗体(single-chain antibody fragment，scFv)序列信息，合成FNA1重链以及轻链可变区序列，连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ，构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FNA1。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FNA1。ELISA检测FNA1与甲型流感病毒N1亚型NA抗原的结合，流式细胞术分析FNA1与细胞膜表面表达N1亚型NA抗原的结合。通过抗体抑制NA蛋白活性试验检测抗体FNA1的体外功能活性。结果:蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FNA1。FNA1特异性识别结合N1亚型的NA抗原，且呈浓度依赖效应。FNA1能通过结合细胞膜表面表达的N1亚型NA蛋白，有效阻断细胞膜表面的NA活性，从而抑制包装的假病毒从细胞表面释放，继而抑制进一步的靶细胞感染。结论:获得1株具有体外功能活性的靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体FNA1。

目的:评价七氟烷后处理减轻失血性休克复苏(HSR)小鼠认知功能障碍时甲基转移酶样3(METTL3)介导的N6-甲基腺苷(m6A)甲基化修饰与沉默信息调节因子1(SIRT1)的关系。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠40只，8～10周龄，体质量22～26 g，采用随机数字表法分为5组( n＝8)：假手术组(Sham组)、HSR组、七氟烷后处理＋HSR组(SP＋HSR组)、过表达METTL3基因rAAV＋七氟烷后处理＋HSR组(METTL3＋SP＋HSR组)和过表达METTL3基因rAAV阴性对照＋七氟烷后处理＋HSR组(NC＋SP＋HSR组)。经右颈总动脉在30 min内将小鼠体内总血容量40%的血液匀速抽出，1 h后在30 min内将抽出的血液原路回输，建立HSR模型。SP＋HSR组先HSR模型，在输血即刻吸入七氟烷(呼气末浓度2.4%)30 min。Sham组和HSR组于相应时点吸入70%O 2-30%CO 2混合气体30 min。METTL3＋SP＋HSR组和NC＋SP＋HSR组于造模前4周时向小鼠双侧海马注射相应病毒450 nl。于造模后72 h时，采用Morris水迷宫实验和新物体识别实验检测小鼠学习记忆能力。行为学实验结束后，采用Western blot法检测海马组织METTL3和SIRT1表达，采用qRT-PCR法检测海马组织SIRT1 mRNA表达，采用Dot blot法检测海马组织RNA m6A甲基化水平。 结果:与Sham组相比，HSR组第1～6天时逃避潜伏期延长，原平台象限停留时间缩短，穿越原平台位置次数减少，新物体识别指数降低，海马组织METTL3表达上调，RNA m6A甲基化水平升高，SIRT1及其mRNA表达下调( P<0.05)；与HSR组相比，SP＋HSR组第1～6天时逃避潜伏期缩短，原平台象限停留时间延长，穿越原平台位置次数增加，新物体识别指数升高，海马组织METTL3表达下调，RNA m6A甲基化水平下降，SIRT1及其mRNA表达上调( P<0.05)；与SP＋HSR组相比，METTL3＋SP＋HSR组第2～6天时逃避潜伏期延长，原平台象限停留时间缩短，穿越原平台位置次数减少，新物体识别指数降低，海马组织METTL3表达上调，RNA m6A甲基化水平升高，SIRT1及其mRNA表达下调( P<0.05)，NC＋SP＋HSR组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:七氟烷后处理减轻HSR小鼠认知功能障碍的机制与下调METTL3表达，降低m6A甲基化水平，上调SIRT1表达有关。

目的:探讨孕酮免疫调节结合因子1(PIBF1)对子宫内膜容受性的作用。方法:30只2月龄SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组和PIBF1组，每组10只。模型组和PIBF1组大鼠建立胚胎种植窗期胚胎着床障碍模型。假手术组大鼠建立正常胚胎种植窗期胚胎着床模型。PIBF1组建模前30 d经尾静脉注射过表达PIBF1的腺相关病毒，假手术组和模型组注射等体积腺相关病毒。观察3组大鼠种植窗期的情况；采用酶联免疫吸附实验检测3组大鼠激素雌二醇(E2)和孕酮(P)水平；分析3组大鼠着床胚泡的数量；苏木精-伊红(HE)染色分析3组大鼠子宫内膜的病理学变化；免疫组织化学法分析子宫内膜微血管的数量；采用蛋白质免疫应激分析3组大鼠子宫内膜组织PIBF1和p-STAT3的表达水平。组间计量数据比较采用单因素方差分析。结果:PIBF1组大鼠血清雌二醇水平[(35.33±3.42) pg/ml]明显高于模型组大鼠[(19.55±2.84) pg/ml]，差异有统计学意义( t＝11.230， P<0.05)。PIBF1组大鼠血清孕酮水平[(0.58±0.06) pg/ml]明显高于模型组大鼠[(0.38±0.06) pg/ml]，差异有统计学意义( t＝7.329， P<0.05)。PIBF1组大鼠胚泡着床数目[(9.70±1.49)个]明显高于模型组大鼠[(5.30±1.49)个]，差异有统计学意义( t＝6.584， P<0.05)。模型组子宫内膜排列紊乱，子宫空腔扩张，炎性细胞浸润严重；PIBF1组大鼠子宫内膜血管相对丰富，炎性细胞浸润明显减少。PIBF1组大鼠子宫内膜微血管数量[(11.20±1.69)条]明显高于模型组大鼠[(6.60±1.17)条]，差异有统计学意义( t＝7.097， P<0.05)。PIBF1组大鼠子宫内膜组织PIBF1蛋白表达水平(1.46±0.16)明显高于模型组大鼠(0.45±0.07)，差异有统计学意义( t＝18.600， P<0.05)。PIBF1组大鼠子宫内膜组织p-STAT3蛋白表达水平(0.76±0.08)明显高于模型组大鼠(0.30±0.04)，差异有统计学意义( t＝15.880， P<0.05)。 结论:过表达上调PIBF1可显著改善大鼠种植窗期子宫内膜容受性，主要通过激活STAT3信号通路来实现。

目的:检测微小RNA（miR）-211-5p、促红细胞生成素肝细胞激酶受体B2（EphB2）及促红细胞生成素肝细胞激酶配体B2（ephrin B2）在脊髓损伤（SCI）后脊髓组织以及神经细胞中的表达，探讨其对SCI大鼠神经功能恢复的机制和效果。方法:2020年5月至2021年6月采用斯普拉格-道利（SD）大鼠和未受伤的PC12细胞进行前瞻性研究。SD大鼠分为假手术组和SCI组，每组各30只，在术后不同时间点（1、3、7、14、21和28 d）进行Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分，实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-211-5p和Eph/ephrin B2 mRNA的相对表达含量；另将SCI大鼠分为重组慢病毒载体LV-miR-211-5p组（A组）、空慢病毒载体LV-eGFP（B组）、0.9%氯化钠组（C组），每组15只，分别重组慢病毒载体、空慢病毒载体和0.9%氯化钠注射于脊髓损伤处头、尾侧，于术后1、7和14 d收集BBB评分，检测脊髓组织中的miR-211-5p和Eph/ephrin B2 mRNA的相对表达含量，另用免疫荧光染色法检测各组GAP-43和突触素的表达。另外用150 μmol/L过氧化氢（H 2O 2）建立PC12损伤细胞系模型，分别用流式细胞术、Western blot检测不同细胞系的凋亡率和凋亡相关蛋白和含量，双荧光素酶报告基因验证miR-211-5p是否靶向调控EphB2。 结果:动物实验结果显示，术后不同时间点，SCI组的miR-211-5p在损伤后1、3、7、14、21和28 d水平低于假手术组（0.70 ± 0.03比1.00 ± 0.10、0.60 ± 0.04比1.00 ± 0.05、0.45 ± 0.10比1.00 ± 0.12、0.30 ± 0.06比1.00 ± 0.15、0.20 ± 0.05比1.00 ± 0.13、0.10 ± 0.02比1.00 ± 0.07），EphB2和ephrinB2水平高于假手术组（1.10 ± 0.05比1.00 ± 0.01、1.80 ± 0.01比1.00 ± 0.08、2.30 ± 0.01比1.00 ± 0.10、2.60 ± 0.01比1.00 ± 0.05、2.80 ± 0.01比1.00 ± 0.06、3.00 ± 0.01比1.00 ± 0.07，1.20 ± 0.05比1.00 ± 0.02、1.60 ± 0.01比1.00 ± 0.03、2.10 ± 0.10比1.00 ± 0.01、2.40 ± 0.11比1.00 ± 0.09、2.70 ± 0.13比1.00 ± 0.05、2.90 ± 0.12比1.00 ± 0.03），差异均有统计学意义（ P<0.05）；术后14 d，A组BBB评分高于B组和C组[（14.0 ± 1.1）分比（8.0 ± 1.1）和（8.2 ± 1.2）分]，miR-211-5p水平高于B组和C组（1.90 ± 0.10比0.40 ± 0.01和0.50 ± 0.02），Eph/ephrin B2水平低于B组和C组（0.70 ± 0.10比1.80 ± 0.04和1.90 ± 0.06，0.60 ± 0.03比2.00 ± 0.04和2.10 ± 0.05），差异均有统计学意义（ P<0.05）；免疫荧光染色示，术后14 d A组GAP-43和突触素含量均高于B组和C组（ P<0.05）。细胞实验结果显示，过表达miR-211-5p能够抑制H 2O 2诱导的PC12细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因Cleaved-caspase3的表达（ P<0.05）。敲低miR-211-5p能够提高H 2O 2诱导的PC12细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因Cleaved-caspase3的表达（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实EphB2是miR-211-5p的靶基因，过表达EphB2可拮抗miR-211-5p对H 2O 2诱导的PC12后细胞凋亡抑制作用。 结论:miR-211-5p可通过抑制Eph/ephrin B2信号通路的表达而促进SCI的神经功能修复，提示把Eph/ephrin B2作为靶点，采用miR-211-5p抑制Eph/ephrin B2信号通路可能对SCI有保护作用。