目的 对新疆蜱类携带斑点热群立克次体情况进行调查,为新疆地区蜱媒病防治提供技术支撑.方法 使用家畜体表法和布旗法采集蜱类,使用聚合酶链式反应(PCR)检测立克次体外膜蛋白A(ompA)基因片段.结果 使用家畜体表采集法和布旗法共采集7 105只成年蜱样本,经形态学鉴定共7属12种.其中,3 650只(51.4％)进行外膜蛋白A基因片段的聚合酶链式反应(PCR)检测立克次体核酸,共检测出8种斑点热群立克次体.从和硕、尉犁、玛纳斯和霍城地区采集的扇头蜱Rhipicephalus、璃眼蜱Hyalomma和血蜱Haemaphysalis中均检测出Candidatus R.barbariae立克次体、从和硕、尉犁、玛纳斯地区采集的扇头蜱Rhipicephalus和璃眼蜱Hyalomma中均检测出康氏立克次体Rickettsia conorii;从玛纳斯地区采集的图兰扇头蜱R.turanicus中检测出马赛立克次体R.massiliae;从各地区采集的革蜱中均检测出饶氏立克次体R.raoultii,其在新疆范围内分布较广;从哈巴河地区采集的银盾革蜱Dermacentor niveus中检测出斯洛伐克立克次体R.slovaca;从乌鲁木齐地区采集的亚洲璃眼蜱Hy.asiaticum中检测出西伯利亚立克次体蒙古株R.sibirica mongolotimonae;从哈巴河地区采集的嗜群血蜱Hae.concinna中检测出黑龙江立克次体R.heilongjiangensis;从博乐地区采集的全沟硬蜱 Ixodes persulcatus 中检测出 Candidatus R.tarasevichiae 立克次体.结论 新疆地区广泛分布多种蜱类,携带多种蜱传斑点热群立克次体,可能对人群健康产生潜在威胁.

目的 对采自内蒙古的全沟硬蜱进行形态学和分子生物学鉴定,并通过人工饲养了解全沟硬蜱的发育生活史和生物学特性.方法 采集自内蒙古自治区东北部的蜱,利用3D超景深显微系统进行形态学鉴定.提取蜱DNA,PCR扩增线粒体12S rDNA和16S rDNA序列.取阳性扩增产物测序后进行BLAST比对,采用邻接法构建蜱线粒体12S rDNA和16S rDNA的系统进化树.以昆明小鼠为供血动物,在温度(25±3)℃、相对湿度70％～90％条件下对蜱进行人工饲养,观察蜱生活史各阶段的时间等生物学特性.卵孵化实验随机选取10只饱血雌成蜱所产的卵各30枚,观察其孵化情况,并计算孵化率.幼蜱蜕皮实验随机选取饱血幼蜱200只,记录其蜕皮情况,并计算蜕皮率.若蜱蜕皮实验随机选取饱血若蜱100只,分为10组,每组10只,观察其蜕皮情况,并计算蜕皮率.将各阶段发育成功率统计后计算得出其综合发育率.结果 形态学鉴定结果显示,采集的雌性和雄性硬蜱均符合硬蜱属的形态.PCR扩增和测序结果显示,硬蜱DNA扩增出长度为320bp的12S rDNA序列和长度为455 bp的16S rDNA序列.BLAST序列比对分析显示,雌蜱和雄蜱线粒体12S rDNA序列与全沟硬蜱(GenBank:MF095801.1和JF758624.1)序列相似性最高,分别为99.69％和99.09％.雌蜱和雄蜱线粒体16S rDNA序列与全沟硬蜱(GenBank:MH790201.1和MH790200.1)的序列相似性最高,分别为99.75％和99.50％.进化树分析结果显示,雌蜱和雄蜱均与全沟硬蜱序列聚于同一分支上.人工饲养全沟硬蜱的生活史观察结果显示,饱血雌蜱产卵期为12～17 d,平均产卵期为14.6 d,总计产卵数约1 510～1 970枚/只,平均产卵数约1817枚/只,日均产卵量约124枚/只;卵经21～28 d孵化为幼蜱,平均孵化期为24.8 d,孵化率为89.7％(269/300);幼蜱吸血期为3～5d,平均吸血期为4.5 d,饱血幼蜱经18～25 d蜕皮为若蜱,平均蜕皮期为22.7 d,蜕皮率为86.5％(173/200);若蜱吸血期为5～8 d,平均吸血期为6.3 d,饱血若蜱经120～170 d蜕皮为成蜱,平均蜕皮期为157.2 d,蜕皮率为92.0％(92/100);从饱血雌成蜱开始产卵,发育至下一代成蜱平均需要241.6d,综合发育率为71.4％.结论 通过形态学和分子生物学鉴定,采自内蒙古的硬蜱为全沟硬蜱.人工饲养获得全沟硬蜱从卵、幼蜱、若蜱、成蜱的生活史及其生物学特征.

目的 了解内蒙古阿尔山地区全沟硬蜱(Ixodes persulcatus)携带蜱媒病原体的群落组成及新塔拉塞维奇立克次体(Candidatus Rickettsia tarasevichiae,CRT)和北极内罗病毒(Beiji nairovirus,BJNV)的复合感染情况.方法 在阿尔山市白狼镇采集游离蜱,进行形态学和分子生物学鉴定,对含有未知病原体的蜱类样本提取总RNA后进行宏转录组高通量测序(metagenomic next generation sequencing,mNGS).根据测序结果选取病毒及细菌属水平丰度较高的新发致病病原体进行感染及复合感染情况调查.通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)方法检测蜱体内CRT和BJNV的感染情况.对序列测序结果进行同源性和系统进化关系分析.结果 本研究共采集蜱虫617只,均为全沟硬蜱.高通量测序结果显示细菌组成在属水平上,立克次氏体属(Rickettsia)丰度最高,约为77％;在种水平上,加拿大立克次体(Rickettsia canadensis)丰度最高,约为25％,CRT丰度为约1％.病毒组成在属水平上,正内罗病毒属(Orthonairovirus)丰度最高,约为60％;在种水平上BJNV丰度最高,约为45％.在样本中检测出CRT和BJNV感染,池阳性率(pool positivity rate,PPR)分别为96.15％和88.46％,且存在复合感染现象,最低复合感染率(minimum infection rate,MIR)为3.72％.结论 本研究通过宏转录组揭示了阿尔山地区游离的全沟硬蜱微生物群落中活跃物种的组成,首次证实该地全沟硬蜱中存在CRT以及BJNV复合感染现象.因此,应评估在该地区CRT和BJNV对公共卫生的潜在风险,并加强新塔拉塞维奇立克次体病和BJNV引发疾病的疫情监测.

目的 调查分析黑河口岸地区蜱种类多样性.方法 对2012年至2014年黑龙江省黑河区域内蜱种群密度、数量、分布以及季节变迁方面的数据进行整理及总结,通过形态学的观察及PCR检测明确黑河地区蜱的分类及携带病原体情况.结果 黑河口岸地区的蜱类采集活动中,共获得蜱类1343只,经鉴定分属3属3种,其中森林革蜱1054只,占总体构成78.48％,为优势蜱种;嗜群血蜱236只,占总体构成17.57％;全沟硬蜱53只,占总体构成3.94％.之后本试验对采集到的1343只蜱针对10种病原体进行PCR检测.在黑河地区的蜱类中,森林革蜱的立克次体感染率为64.37％、巴尔通体感染率为3.35％、类似巴贝西虫病原体检出率为1.70％,其他相关蜱虫病原检测结果为阴性.结论 森林革蜱为试验采集蜱虫中的优势蜱种;进行病原体检查发现立克次体具有较高感染率,其中病原体主要在森林革蜱中发现,森林革蜱仍然是监测新发蜱媒传染病的前哨种类.携带的病原体的种类随着生态环境的变化在慢慢发生变化,边境的生态环境复杂多样,在蜱虫比较活跃繁多的地区和季节应该增大防范措施,以免人们在工作以及生活中被其感染,从而造成生命财产损失.

目的 利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (COⅠ)基因对我国黑龙江省绥芬河、吉林省延边口岸全沟硬蜱的COⅠ基因序列和国外全沟硬蜱COⅠ序列进行分析对比研究,为了解蜱媒病及其防控奠定基础.方法 2013年6月至2016年8月从黑龙江省绥芬河口岸和吉林省延边口岸共采集全沟硬蜱106只,选取31只样本提取基因组DNA,采用PCR方法从蜱基因组中扩增COⅠ基因进行同源性分析,然后构建系统发生树,并对2个地理种群的全沟硬蜱进行遗传距离分析.结果 我国黑龙江省绥芬河口岸和吉林省延边口岸的全沟硬蜱COⅠ基因序列与俄罗斯多个地区同源性为99％～100％,与哈萨克斯坦边境口岸阿尔泰地区的全沟硬蜱COⅠ序列同源性也达到99％～100％;绥芬河口岸和延边口岸全沟硬蜱的遗传距离≤0.003.结论 我国绥芬河口岸和延边口岸的全沟硬蜱与周边邻近国家的全沟硬蜱COⅠ基因序列高度一致,可能存在极高的基因交流或迁移.

目的 为了解吉林省延边地区蜱类新塔拉塞维奇立克次体(candidatus rickettsia tarasevichiae,CRT)和复合感染新布尼亚病毒(sever fever thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)的感染情况.方法 采集吉林省延边朝鲜族自治州(延边州)延吉、汪清、珲春、敦化、安图、和龙6个县游离蜱,进行形态学分类,通过巢式多聚核苷酸链式反应(nested polymerase chain reaction,nested PCR)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测蜱体内CRT和SFTSV.对其CRT进行目标DNA测序,分析同源性和系统进化关系.结果 此研究共采集各种蜱类1 032只,分别为全沟硬蜱(ixodes persulcatus)(35.56％)、森林革蜱(dermacentor silvarum)(20.64％)、日本血蜱(haemaphysalis japonica)(20.45％)、长角血蜱(haemaphysalis longicomis)(10.47％)、嗜群血蜱(haemaphysalis concinna)(8.33％)以及其他种类(4.55％).全沟硬蜱、长角血蜱、日本血蜱、森林革蜱检测出CRT,最低感染率(minimum infection rate per 100 ticks,MIR)为10.47％.嗜群血蜱、日本血蜱、全沟硬蜱、长角硬蜱、森林革蜱检测出SFTSV,最低感染率为2.52％.全沟硬蜱、日本血蜱、森林革蜱3种蜱存在CRT和SFTSV复合感染现象,复合感染MIR为1.26％.本研究CRT ompA和17kDa基因序列与中国河南信阳株(KX365196.1)序列同源性达100％.系统进化分析,延边地区蜱CRT ompA基因序列和该河南信阳株基因序列成为一簇,而17kDa基因则形成独立分支.结论 本研究首次从吉林省延边地区游离蜱中检测出CRT,全沟硬蜱为主要媒介宿主.因此,可以明确该地区为新塔拉塞维奇立克次体病自然疫源地.同时发现,延边地区蜱类存在CRT与SFTSV复合感染的现象.因此,在该地区必须加强新塔拉塞维奇立克次体病和发热伴血小板减少综合征(sever fever thrombocytopenia syndrome,SFTS)疫情监测.

米亚莫托螺旋体(Borrelia mi yamotoi)是一种新型的蜱传复发热螺旋体,属于包柔氏螺旋体属,又名米亚莫托螺旋体.1994年首次在日本全沟硬蜱和日本姬鼠检测并分离到病原体,2011年俄罗斯首次报道人感染米亚莫托螺旋体病例.米亚莫托螺旋体病常引起以流感样症状为主的非特异性临床表现,严重者可引起脑膜脑炎等并发症.近年,米亚莫托螺旋体疾病的发病率和感染率增加越来越迅速,本文对米亚莫托螺旋体的研究进展进行简要概述.

目的 掌握河北省承德市塞罕坝自然保护区内硬蜱种类及其分子特征,明确该地区蜱类的分类地位,为相关蜱媒传染病的防控制提供参考. 方法 2018年4-9月间,采用布旗法捕捉该地区森林、草地、灌丛3种生境内自由生活的蜱类;提取蜱基因组,PCR扩增2种硬蜱的线粒体16S rDNA和COⅠ基因片段,并进行同源性分析.基于邻接法和最大简约法,用Mega 7.0软件分别构建系统发生树,进行遗传进化分析. 结果 在植被上共采集蜱231头,分为1科2属2种,其中全沟硬蜱212头,嗜群血蜱19头.PCR扩增嗜群血蜱标本(QS11) 16S rDNA和COⅠ扩增基因片段长度分别是434 bp和712 bp,全沟硬蜱标本(QG13) 16S rDNA、CO Ⅰ基因片段长度是445 bp、735 bp.嗜群血蜱标本和全沟硬蜱标本的16S rDNA序列、COⅠ序列与GenBank中已登录的2种硬蜱对应基因聚类,且在一个进化分支上;嗜群血蜱标本16S rDNA、CO Ⅰ序列与已登录嗜群血蜱相同基因序列的同源性分别为98.2％和98.1％,遗传距离分别为0.035和0.028;全沟硬蜱2个基因与已登录基因的同源性分别为98.3％和97.4％,遗传距离分别为0.067和0.104. 结论 塞罕坝自然保护区内优势蜱种是全沟硬蜱且存在嗜群血蜱.两蜱种16S rDNA、CO Ⅰ与序列存在多样性和地域差异性.

目的 调查中国20个边境口岸蜱种分布情况.方法 采用人工布旗法采集蜱.结果 在中国5省20个边境口岸采获蜱3 660只,计5属9种;其中黑龙江8个口岸3属4种,吉林6个口岸3属3种,内蒙3个口岸1属1种,新疆2个口岸2属2种,广西1个口岸2属2种.捕获的9蜱种,森林革蜱为优势蜱种,占43.88％;全沟硬蜱次之,占36.15％.不同口岸捕获蜱的种群及数量有所不同,其中吉林珲春口岸,占总数量的52.91％.结论 为中国边境口岸蜱的种分布和蜱媒病的研究提供了参考依据.

目的 了解黑龙江省边境地区蜱类携带病原体情况.方法 2009-2018年分别在黑龙江省伊春市、大兴安岭地区、佳木斯市采集蜱虫标本,共处理2 530只蜱虫,其中全沟硬蜱800只,森林革蜱1 730只.采用real time RT-PCR法对采集的全部蜱虫开展蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)、发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)、鄂木斯克出血热病毒(omsk hemorrhagic fever virus,OHFV)、兰格特病毒(langat virus,LGTV)、波瓦生病毒(powassan virus,POWV)检测,采用PCR法对采集自佳木斯地区的蜱虫开展伯氏疏螺旋体(borrelia burgdorferi sensulato,B.b.s.1)、斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsia,SFGR)检测.结果 全部的蜱类标本中蜱传脑炎病毒、发热伴血小板减少综合征病毒、鄂木斯克出血热病毒、兰格特病毒、波瓦生病毒的检测结果均为阴性.佳木斯地区斑点热群立克次体和伯氏疏螺旋体,检出率分别为59.5％和8.9％.结论 黑龙江省边境地区蜱虫中斑点热群立克次体和伯氏疏螺旋体携带率高.