目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-30a通过诱导血管内皮细胞间质化(EndMT)，促进血管内膜增生，影响下肢动脉硬化闭塞症(ASO)进程。方法:苏木精-伊红染色法(HE)检测ASO病变动脉形态、内膜中膜厚度；免疫荧光检测EndMT标志物表达。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，构建EndMT细胞模型。将体外培养的HUVECs分为转染miR阴性对照(miR-NC组)和转染miR模拟物(miR-30a组)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测EndMT标志物表达。细胞增殖实验检测HUVECs(EndMT)增殖能力、小室细胞迁移实验、划痕实验检测其迁移能力。采用GraphPad Prism 7进行统计学分析， t检验分析实验结果。 结果:ASO动脉内膜增生且呈间质化改变[内膜厚度，对照组(178.40±29.61) μm，ASO (422.10±39.47) μm， t＝4.940， P<0.01， n＝6；中膜厚度，对照组 (315.80±48.46) μm，ASO (656.80±43.91) μm， t＝5.200， P<0.01， n＝6]，差异有统计学意义，miR-30a在HUVECs(EndMT)和ASO内膜中高表达，miR-30a表达上调能够抑制HUVECs的内皮标志物表达，同时促进其间质标志物表达[CD31，对照：3.535±0.116，miR-30a：1.360±0.185， t＝9.966， P<0.01， n＝3；人血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)，对照：2.453±0.075，miR-30a：0.793±0.106， t＝12.830， P<0.01， n＝3；α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，对照：0.792±0.121，miR-30a：6.296±0.380， t＝13.820， P<0.01， n＝3；Ⅰ型胶原(COL1)，对照：0.2413±0.063，miR-30a：2.859±0.142， t＝16.840， P<0.01， n＝3]，差异有统计学意义，并促进HUVECs(EndMT)的增殖迁移能力[细胞迁移率，对照：(50.160±1.210)%，miR-30a：(68.560±1.918)%， t＝8.115， P<0.01， n＝6]，差异有统计学意义。 结论:miR-30a在ASO增生内膜中表达上调，miR-30a能够诱导内皮细胞间质化，增强其增殖迁移能力，导致ASO内膜增生、促进ASO病情进展。

Müller细胞是脊椎动物视网膜中的主要胶质细胞，其纵向跨越整个视网膜，几乎与视网膜中的每一种细胞类型都有接触。因其独特的定位，可以参与维持视网膜内稳态所需的各种功能。增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy，PDR)是糖尿病的眼部并发症，在炎症的作用下内皮细胞、神经元和神经胶质细胞之间相互作用造成眼底微血管病变。在PDR中，Müller细胞经历反应性胶质增生，一方面起到保护视网膜的作用，另一方面，由于炎性细胞因子/趋化因子的水平升高，可导致瘢痕和视网膜新生血管形成，损害玻璃体。由此可见，Müller细胞胶质化对于视网膜有着双重作用。另外，Müller细胞表达低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(low density lipoprotein receptor associated protein 1，LRP1)，LRP1对新生血管和炎症有着密切联系。对Müller细胞、PDR玻璃体和LRP1展开研究可能为"趋利避害"提供新思路。

增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是眼外伤、孔源性视网膜脱离(RRD)等的并发症，也是造成RRD复位手术失败的常见原因。视网膜色素上皮(RPE)细胞异常增生、迁移和上皮间充质化在PVR相关的视网膜前增生膜的形成中起着主导作用。雷帕霉素是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的特异性抑制剂，选择性地结合细胞蛋白FKBP-12，和FKBP-雷帕霉素相关蛋白(FRAP)的FKBP12-雷帕霉素结构域(FRB)直接结合变构从而抑制mTOR活性。雷帕霉素具有多种衍生物和类似物，通过对mTOR信号转导途径的抑制发挥抑制细胞增生和调节细胞周期等作用，在PVR中对RPE细胞异常增生、迁移和上皮间充质化起到一定的抑制作用，对PVR中胶质细胞的修复、炎症细胞的抑制和血管内皮细胞的损伤也起到一定保护作用。近年来，雷帕霉素在多种眼病中的临床试验不断开展，对其在眼部给药方式的探索和用药安全性方面的证据逐渐全面。本文就雷帕霉素对PVR中RPE细胞及其他细胞的保护作用、用药安全性等方面作一综述。

目的 基于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad信号通路探究黄芪葛根汤与远志汤合方抑制糖尿病动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞间质化的作用机制.方法 将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(糖脉康颗粒)、黄芪葛根汤与远志汤合方1组(简称"合方1组")、黄芪葛根汤与远志汤合方2组(简称"合方2组").空白对照组喂食普通饲料,第29天给予大鼠一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液;其他组喂食高脂饲料,第29天给予大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病动脉粥样硬化模型,连续灌胃49 d.苏木精—伊红染色法观察主动脉的组织形态.检测各组大鼠血糖和血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)、高密度脂蛋白胆固醇(high-den-sity lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)水平;采用酶联免疫吸附试验检测血清波形蛋白(Vimentin)、Twist1、TGF-β、锌指转录因子1(Snail1)水平;采用Western blot法检测肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein-1 c,SREBP-1c)和主动脉 Smad-2、Smad-3蛋白表达水平;采用qRT-PCR法检测葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter-4,Glut-4)、Vimentin、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、SREBP-1c mRNA表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠血糖、HbA1c、TG、LDL-C、Vimentin、Twist 1、TGF-β、Snail1、SREBP-1c、Smad-2、Smad-3 表达水平显著升高(P＜0.05),HDL-C、Glut-4、AMPK表达水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,合方1组、合方2组大鼠血糖、HbA1c、TG、TC、LDL-C、Vimentin、SREBP-1c、Twist1、TGF-β、Snail1、Smad-2、Smad-3 水 平显著 降低(P＜0.05),HDL-C、Glut-4、AMPK水平显著升高(P＜0.05).结论 黄芪葛根汤与远志汤合方抑制主动脉内皮细胞间质化的作用与其参与主动脉TGF-β/Smad信号通路有关.

目的 检测microRNA-448(miRNA-448)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及细胞系中表达情况,并观察其对细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质化(EMT)的影响.方法 采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测NSCLC组织及细胞系中miR-448的表达情况.对肺癌细胞株A549转染miR-448模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor),并应用细胞计数试剂盒-8检测不同时间细胞增殖活性,Transwell试验测定miR-448模拟物或抑制剂对A549细胞迁移及侵入的影响.Western blot测定E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达,并检测miR-448对NSCLC细胞与内皮细胞的黏附性影响.结果 qRT-PCR结果显示,与对照组相比,NSCLC组织及细胞系中miR-448的表达水平明显降低,在AM9细胞系中miR-448下调最为显著(P＜0.05).A549细胞转染miR-448模拟物或抑制剂后可导致细胞增殖率随时间增加逐渐降低或升高(P＜0.05).在模拟物组,细胞迁移能力明显加强(P＜0.05),相反,A549细胞中,miR-448抑制剂会显著抑制此能力(P＜0.05).与此类似,A549细胞侵袭能力可因miR-448过表达或低表达而增加或降低.miR-448模拟物可显著提高A549细胞中E-cadherin蛋白表达,而N-cadherin和vimentin蛋白水平显著下降,且A549细胞与内皮细胞黏附能力降低(P值均＜0.05),而抑制剂则产生相反作用(P值均＜0.05).结论 在NSCLC组织及细胞中miR-448呈低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞增殖、转移及EMT过程,而miR-448低表达可促进细胞增殖、转移及EMT.

目的:利用三维共培养技术体外构建含多种细胞的胰腺癌微组织,研究骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、内皮细胞(HUVECs)对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响.方法:水凝胶复合细胞培养构建三维胰腺癌微组织模型.第一组:单纯Panc-1细胞;第二组:Panc-1细胞复合HUVECs;第三组:Panc-1细胞复合hBMSCs;第四组:Panc-1细胞复合HUVECs和hBMSCs.实时定量PCR分析胰腺癌肿瘤侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP-9)、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail基因.West-ern blot测定胰腺癌肿瘤侵袭相关的MMP-9、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail蛋白.结果:HU-VECs共培养不影响MMP-9、E-cadherin和Snail基因和蛋白的表达(>0.05),hBMSCs共培养促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(<0.05),同时加入两种细胞促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(<0.05).结论:利用水凝胶为载体,加入骨髓间充质干细胞、内皮细胞与Panc-1胰腺癌细胞共培养,成功构建复杂的胰腺癌肿瘤微组织.通过对胰腺癌上皮间质转化相关机制研究,发现骨髓间充质干细胞通过调节MMP-9和上皮间质化对胰腺癌的侵袭行为起重要作用.

目的 探究可调节硬度的温敏聚乙二醇二丙烯酸酯-异丙基丙烯酰胺(PEG-NIPAM)水凝胶体系对兔角膜内皮体外培养时发生内皮间质化(endothelium mesenchymal transition,EnMT)程度的影响.方法 采用4～5周龄的新西兰兔6只,麻醉处死后取双侧眼球,妥布霉素盐水浸泡后剪下角膜,取下后弹力层,采用两步消化法提取兔原代角膜内皮并进行体外扩增.将P0代兔原代内皮细胞(corneal endothelium cells,CECs)置于6孔板培养,当细胞密度90％时分别传代于10组经不同预铺板涂层PEG硬度可控的温敏性水凝胶和细胞培养板(TCP)上.具体分组为三种预铺板条件(硫酸软骨素、层粘连蛋白混合物;纤维连接蛋白、胶原蛋白和白蛋白混合物;明胶)与不同浓度(1％、10％和20％)PEG分别组合以及对照组(TCP).材料详细硬度由AFM法测定.经过三代培养,观察EnMT指标平滑肌肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)染色结果 .结果AFM法测得水凝胶硬度在浓度为1％PEG时制备的PEG-NIPAM为(346.4±26.53)Pa,浓度为10％PEG时为(8782±444.4)Pa,浓度为20％PEG为(11518±791.1)Pa,两两比较差异均有统计学意义(P<0.001).兔角膜内皮细胞在体外培养形态变化和α-SMA表达均证明发生EnMT.P1～P3代的兔角膜内皮细胞中α-SMA阳性细胞逐渐增加,细胞骨架转变为纤维化形态;20％PEG-NIPAM相比于TCP对照组α-SMA阳性细胞比例和强度明显减少;层粘连蛋白和硫酸软骨素的混合涂层相比于FNC涂层α-SMA阳性细胞比例和强度更低.结论 在与天然硬度和结构成分接近的PEG-NIPAM水凝胶仿生材料上扩增兔角膜内皮细胞可减轻EnMT程度.

α-crystallins是小分子热休克蛋白家族(small-molecule heat shock protein,sHSP)的重要成员,包括αA-crystallin和αB-crystallin,在各类组织细胞中具有细胞保护和分子伴侣功能.近年来,多项研究发现,视网膜组织α-crystallins可利用自身特性通过各种途径参与增生性视网膜病的血管新生、上皮/内皮细胞间质化等过程.本文主要介绍α-crystallins,尤其是αB-crystallin调节增生性视网膜疾病发展的分子机制,探讨其潜在的临床应用价值.

该研究以心脏纤维化SD大鼠为对象,分析姜黄素(curcumin,Cur)、核因子NF-E2相关因子(nuclear factor-E2-related factor 2,NRF2)-二甲基精氨酸二甲胺水解酶(dimethyl arginine dimethylamino hydrolase,DDAH)-非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethyl arginine,ADMA)-一氧化氮(nitric oxide,NO)途径、内皮细胞-间质化(endothelial-mesenchymal transition,EndMT)三者之间的关系,探讨Cur抗心脏纤维化的作用和机制,为其在心衰治疗上的临床应用提供更深入的理论依据.通过以异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)皮下注射构建大鼠心脏纤维化模型.实验过程中使用32只SD大鼠,按每组8只随机分为4组,即对照组、模型组(Iso)、低剂量Cur组(100 mg·kg-1·d-1 Gur灌胃)、高剂量Cur组(200 mg·kg-1·d-1 Cur灌胃).给药21 d后心超检查心功能情况,Masson染色检查心肌纤维化程度,病理染色测定CD31和α-SMA表达,Western blot检测VE-cadherin、vimentin、NRF2、DDAH表达,HPLC检测ADMA水平等.与模型组相比,经Cur干预后大鼠心脏纤维化程度明显下降,并伴随着内皮细胞标志物CD31、VE-cadherin表达上调,间质细胞标志物α-SMA、vimentin下调,提示EndMT减轻.另外,与模型组相比,Cur组的DDAH和NRF2表达升高,ADMA、NO水平明显下降.综上所述,Cur有通过抑制EndMT起到抗心脏纤维化的作用,其作用机制可能为通过干预NRF2-DDAH-ADMA-NO途径来完成.