目的:构建一种负载纳米铜颗粒的温敏性胶原水凝胶，并探索其应用于腹部开放性海水浸泡伤的救治效果。方法:将脱细胞牛心包冻干粉与生物还原法制备的纳米铜混合，采用胃蛋白酶消化，制备纳米铜温敏性胶原水凝胶。健康成年SPF级BALB/c小鼠30只，构建小鼠腹部开放性海水浸泡伤模型，按照随机数字表法分为模型组和治疗组，每组15只。模型组在开放腹腔后给予10 ml 20 ℃海水浸泡处理30 min，然后逐层关腹；治疗组给予腹腔同样海水浸泡，再予以5 ml纳米铜温敏性胶原水凝胶后，逐层关腹。7 d后处死小鼠，HE染色评价2组小鼠胸腹腔各脏器的损伤情况。结果:铜颗粒水合粒径大小为（686.7±134.6）nm，Zeta电位为-24.6 mV，表明生成的纳米铜颗粒为纳米级，具有较大的静电斥力，稳定性好。胶原水凝胶在室温时呈液态，37 ℃时转变为固态，具有良好的温敏性。加入纳米铜颗粒后，水凝胶的孔隙率和吸水率轻度较少，不影响其溶胀比。与模型组比较，纳米铜温敏性胶原水凝胶能提高治疗组小鼠的存活率和生存状态，减轻海水对腹腔脏器的损伤，并减轻腹部伤口的感染程度。结论:纳米铜温敏性胶原水凝胶可以减轻高渗海水对小鼠腹腔脏器组织的损伤，能维护重要脏器功能，并具有抗菌活性。

目的:评估外用红色诺卡菌细胞壁骨架（Nr-CWS）治疗子宫颈高危型人乳头状瘤病毒（HPV）持续感染的有效性及安全性。方法:本研究为前瞻性、随机、双盲、多中心临床试验。征集2017年12月至2020年12月于全国13家医院门诊确诊为常见14种高危型HPV亚型持续感染的患者共688例。将临床及病理确诊为子宫颈高危型HPV感染的患者，分为3个亚组，（1）第一亚组：单纯性高危型HPV感染持续12个月及以上者；（2）第二亚组：子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ伴高危型HPV感染持续12个月及以上者；（3）第三亚组：CINⅡ或CIN Ⅲ（CINⅡ/Ⅲ）手术后高危型HPV阳性亚型与术前相同，且经阴道镜和子宫颈活检确诊为非CINⅡ及以上病变（CINⅡ +）者。3个亚组以2∶1随机分入试验组与对照组，试验组受试者于子宫颈局部使用Nr-CWS冻干粉，对照组使用不含Nr-CWS的安慰剂冻干粉。分别于治疗后的1、4、8、12个月进行治疗后疗效包括消除HPV的有效率及各型高危型HPV（主要为HPV 16、18、52、58型）转阴率的评估，并比较治疗前、后安全性指标的差异。 结果:（1）本研究共纳入子宫颈高危型HPV感染患者555例（试验组368例、对照组187例），其年龄为（44.1±10.0）岁。两组受试者的基线特征包括年龄、汉族占比、体重、高危型HPV亚型构成、各亚组占比分别比较，差异均无统计学意义（ P均>0.05）。（2）治疗后12个月，试验组和对照组受试者消除HPV的有效率分别为91.0%（335/368）和44.9%（84/187），两组比较，差异有统计学意义（ χ2=142.520， P<0.001）。治疗后12个月，试验组受试者HPV16、18、52、58型感染的转阴率分别为79.2%（84/106）、73.3%（22/30）、83.1%（54/65）、77.4%（48/62），对照组分别为21.6%（11/51）、1/9、35.1%（13/37）、20.0%（8/40），两组分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.001）。（3）试验组与对照组受试者在治疗前及治疗后1、4、8、12个月的生命体征（体重、体温、呼吸、心率、收缩压、舒张压等）、实验室常规指标（血、尿常规检查）分别比较，差异均无统计学意义（ P均>0.05）；两组受试者与试验药物相关的不良反应发生率比较，差异无统计学意义［分别为8.7%（32/368）、8.0%（15/187）； χ2=0.073， P=0.787］。 结论:外用Nr-CWS治疗子宫颈高危型HPV持续感染具有良好的疗效和安全性。

目的:制备特异性抗镰刀菌鸡卵黄抗体(IgY)并检测其对温度和pH的耐受性及抗真菌作用。方法:取22周龄莱杭母鸡18只，采用随机数表法将其随机分为阴性对照组和实验组，每组9只。制备灭活镰刀菌丝悬液，将菌丝浓度2×10 7菌落形成单位(CFU)/ml的菌悬液与弗氏完全佐剂等体积混合充分乳化后，对实验组莱杭母鸡进行免疫，每只鸡注射1 ml，2周后换为弗氏不完全佐剂加强免疫。在免疫后的第5~16周每周收集卵黄，用硫酸铵盐析法制备IgY，将得到的蛋白溶液放入冻干机中制作成冻干粉，4 ℃保存。以质量分数0.9%氯化钠溶液代替菌悬液按照同样方式进行阴性对照组莱杭母鸡的注射，以制备非特异性抗体作为实验中的阴性对照。采用考马斯亮蓝法测定特异性IgY蛋白浓度，采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定其效价。将1×10 5 CFU/ml和1×10 3 CFU/ml镰刀菌悬液与不同浓度IgY及磷酸盐缓冲液(PBS)混合培养4 d后测定吸光度( A)值，用PBS及非特异性IgY与镰刀菌悬液共孵育作为空白对照组及阴性IgY组，绘制抗镰刀菌IgY的抑菌曲线。用pH 7.4的PBS将特异性IgY溶液稀释至0.02 mg/ml，分别在30、40、50、60、70、80和90 ℃水浴中孵育30 min后冷却至室温；此外，用pH值为l、2、3、4、5、6、7、8、9、l0、11和12的PBS将特异性IgY溶液稀释至0.02 mg/ml，4 ℃下放置1 h，均采用间接ELISA法测定抗体活性，评估IgY对不同温度和pH的耐受性。取SPF级8周龄雌性C57BL/6小鼠12只，采用随机数表法将其分为PBS对照组和特异性IgY治疗组，每组6只。用镰刀菌感染小鼠右眼角膜，建立小鼠真菌性角膜炎动物模型，建模后1 d，特异性IgY治疗组用200 mg/ml特异性抗镰刀菌IgY点眼，PBS对照组用PBS点眼，于感染后1、3和5 d在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜，根据炎症评分表对真菌性角膜炎的严重程度进行评分。 结果:免疫后第5~16周的IgY蛋白质量浓度分别为1.57、2.89、24.98、25.09、23.89、25.78、21.57、21.37、18.98、15.78、14.67和12.67 mg/ml。特异性抗镰刀菌IgY的效价从第5周开始升高，第7周时达到最高效价，为1∶10 000，可维持至免疫后12周，12周后抗体效价逐渐下降。抑菌曲线显示，与空白对照组和阴性IgY组相比，特异性IgY治疗组镰刀菌生长缓慢。抗体效价高于1∶10 000的特异性IgY在60 ℃以下具有较好的热稳定性；在pH 4~6具有最高活性，在pH 3~9的免疫活性能够保持在70%以上，随着pH值的进一步降低或升高，其活性迅速降低。镰刀菌感染后1、3和5 d，PBS对照组角膜炎症评分分别为3.50±0.55、7.33±0.82和4.00±0.63，特异性IgY治疗组角膜炎症评分分别为3.33±0.82、4.17±0.75和2.50±0.55。2个组不同时间点炎症评分总体比较，差异均有统计学意义( F分组＝247.35， P<0.05； F时间＝23.19， P<0.05)，其中镰刀菌感染后3 d和5 d，与PBS对照组相比，特异性IgY治疗组小鼠真菌性角膜炎炎症评分降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:用硫酸铵盐析法可成功制备高效价特异性抗镰刀菌IgY，其稳定性高，对温度和酸碱度均有一定的耐受性，可以在小鼠的真菌性角膜炎模型中减轻角膜溃疡的严重程度，降低炎症评分。

目的:探讨股骨近端防旋髓内钉（PFNA）固定老年股骨转子间骨折术中局部应用凝血酶对术后失血量的影响。方法:回顾性分析2021年1月至2023年12月期间宁波一院龙山医院医疗健康集团骨科收治的50例股骨转子间骨折患者资料。根据内固定术中局部是否应用凝血酶分为两组：治疗组25例，男9例，女16例；年龄（76.5±10.1）岁；在完成PFNA置入后将6支凝血酶冻干粉溶于60 mL无菌生理盐水，于主钉切口内喷洒30 mL，螺旋刀片切口内喷洒20 mL，远端锁钉切口内喷洒10 mL。对照组25例，男11例，女14例；年龄（71.1±10.1）岁；在完成PFNA置入后用相同剂量的生理盐水冲洗伤口。比较两组患者术后第1、3、7天的血红蛋白（Hb）和红细胞比容（Hct），以及总失血量、隐性失血量、输血率、深静脉血栓形成（DVT）的发生情况等。结果:两组患者术前一般资料及手术时间比较差异均无统计学意义（ P>0.05），具有可比性。治疗组患者术后第1、3、7天Hb分别为（101.48±12.15)、(102.96±12.76）、（107.24±13.47）g/L，Hct分别为（0.31±0.03）、（0.32±0.03）、（0.33±0.04），均显著高于对照组患者[（92.72±10.95）、（86.52±7.43）、（91.56±10.24）g/L，（0.28±0.03）、（0.26±0.03）、（0.27±0.03）]，差异均有统计学意义（ P<0.05）。治疗组患者术后总失血量为（364.60±134.27）mL，隐性失血量为（258.04±112.59）mL，均显著少于对照组患者[（481.72±218.69）、（355.84±176.97）mL]，差异均有统计学意义（ P<0.05）。治疗组和对照组术后分别有2、1例患者发生DVT，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:老年股骨转子间骨折PFNA固定术中局部应用凝血酶可明显减少患者术后失血量，且不会增加术后DVT等并发症的发生。

目的:探索建立标准化人体小肠液移植（HIFT）及HIFT胶囊的制备体系，并分析其初步应用于孤独症谱系障碍的治疗效果。方法:收集2021年1月至3月于上海市第十人民医院招募的HIFT标准供体3人、孤独症谱系障碍患者亲体供体8人的临床资料。通过制定严格的供体筛选与管理标准，运用床旁经鼻空肠管置管术，将导管头端置入空肠远端，导管连接口处接改良一次性无菌负压收集装置行持续负压引流收集人体小肠液。再分别通过过滤、添加10%甘油保护剂及冻干等方法制成冻干粉HIFT胶囊。本中心初步拟定要求：移植以活菌量作为治疗剂量标准，HIFT每次移植的菌液活菌量需≥5.0×10 8个/ml且活菌比例≥83%，菌粉活菌量需≥2.0×10 6个/g且活菌比例≥81%。观察供体基本情况、供体中菌液及菌粉中菌落总数，并初步分析上述供体制备而成的HIFT胶囊联合标准FMT胶囊治疗（即全肠道菌群移植）治疗孤独症谱系障碍研究（临床试验注册号：ChiCTR2100043929）。 结果:标准供体及亲体供体均符合供体筛选标准，所制菌液及菌粉符合治疗标准。与亲体供体比较，标准供体的菌粉菌落总数更多［（7.47±1.52）×10 6个/g比（5.03±1.38）×10 6个/g， t=11.331， P=0.031］、Chao指数更高（205.4±6.8比194.2±7.2， t=10.415， P=0.001）、Shannon指数更高（3.25±0.14比2.72±0.27， t=19.465， P=0.001），差异均具有统计学意义（均 P<0.05）。有8例患者接受全肠道菌群移植治疗，初步统计结果显示，该疗法可改善孤独症谱系障碍患者症状，治疗后1、2、3、4个月时，孤独症行为评分及儿童孤独症评分均下降，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。本组无严重不良反应发生。 结论:在FMT制备体系研究基础上，结合制定高标准HIFT制备体系，同时探索性开展HIFT联合FMT的全肠道菌群移植临床研究，有望成为微生态治疗的一项革新疗法。

目的 基于肠道菌群和肠黏膜屏障探讨玉液汤对气阴两虚证糖尿病肾病大鼠模型的影响.方法 采用一测多评法对玉液汤冻干粉中的有效成分葛根素、芒果苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量进行检测,以控制玉液汤冻干粉的质量.将45只Wistar大鼠按照体质量随机分为正常组(NC组)、气阴两虚证糖尿病肾病组(M组)和玉液汤组(YYD组;5.03 g·kg-1).采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)25 mg·kg-1,佐以附子,青皮,枳壳灌胃8周构建气阴两虚证糖尿病肾病大鼠.期间YYD组大鼠同时干预玉液汤提取物.期间分别检测一次各组大鼠每周体质量和血糖水平,并记录大鼠的体征变化、摄食量和饮水量、游泳时间以及尿量.8周后采用全自动生化仪分析大鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清肌酐(SCr)、尿氮素(BUN)水平;苏木精-伊红染色法(HE)观察肾脏和结肠组织的病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液的尿蛋白浓度和血清中IgG、IgM、cAMP和cGMP的含量;16S rRNA对大鼠粪便菌群进行分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法对部分菌群进行验证;Western blot法检测大鼠肾脏及结肠炎症因子TNF-α和IL-6蛋白水平及结肠组织肠道屏障蛋白表达水平.结果 玉液汤水提物冻干粉得率为27.36%,其中玉液汤中有效成分葛根素的含量为0.3496 mg·g-1、芒果苷的含量为0.1851 mg·g-1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量为0.0429 mg·g-1.动物实验结果表明,玉液汤能显著改善气阴两虚证糖尿病肾病模型大鼠倦怠、乏力等证候表征,提高大鼠游泳时间,降低饮水量和进食量等症状;增加粪便中拟杆菌门和降低厚壁菌门的丰度;改善模型大鼠血脂四项、血糖、肾功指标、免疫指标IgG、IgM以及机体能量平衡因子cAMP、cGMP水平;HE染色表明玉液汤能显著改善模型大鼠肾脏及结肠黏膜屏障损伤;抑制肾脏及结肠炎症因子TNF-α、IL-6的表达,显著提高结肠动力蛋白CHRM3、5-HT3A以及黏膜屏障蛋白Occludin、ZO-1的表达水平.结论 玉液汤可能通过纠正模型大鼠肠道菌群失调,延缓肠黏膜损伤,改善肾脏和结肠炎症,发挥防治气阴两虚证糖尿病肾病的作用.

爪哇虫草菌是广谱性虫生真菌,具有防治膜翅目社会性昆虫红火蚁Solenopsis invicta的生防潜能.为探究蚁巢弃尸堆中携菌虫体在侵染循环链的关键作用,探讨腐生条件下爪哇虫草Cordyceps javanica响应寄主的分子致病机制,本研究通过向培养基添加冷冻干燥的虫尸粉进行诱导,对诱导前后的菌丝孢子混合体进行转录组测序分析.结果表明,与纯培养条件相比,菌株经虫尸粉诱导后发掘新基因1912个,有379个得到功能注释.显著差异表达基因有242个,上调表达基因111个,下调表达基因131个;GO富集分析表明,生物学过程的代谢过程和细胞过程、细胞组分的细胞结构体及分子功能中参与催化活性和结合相关的基因可能在爪哇虫草响应寄主过程中发挥了重要作用;KEGG分类和富集分析表明,代谢过程分类的色氨酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、糖酵解/糖原异生和乙醛酸和二羧酸酯代谢,遗传信息过程分类的碱基切除修复和内质网的蛋白质加工,环境信息过程分类的ABC转运蛋白和丝裂原活化蛋白激酶信号通路,细胞过程分类的自噬和过氧物酶体通路是爪哇虫草的主要代谢途径.随机筛选8个差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,这些基因的表达模式与转录组数据分析结果基本一致.本研究结果表明,爪哇虫草在适应腐生环境过程中与氨基酸代谢和能量代谢相关的基因活跃,这可能是其在垂直和水平扩散过程中需维持侵染力,为自身提供营养并转化为能量和中间产物等物质所致.

目的 探讨洗心汤防治阿尔茨海默病(AD)的可能作用机制.方法 将50只快速老化模型小鼠(SAMP8)随机分为模型组,益生菌组,洗心汤高、中、低剂量组,每组10只,另取10只同源对抗快速老化小鼠(SAMR1)设为对照组.喂养10周后,洗心汤高、中、低剂量组以洗心汤5.08、2.54、1.27g/(kg·d)灌胃,益生菌组以复合益生菌冻干粉0.39 g/(kg·d)灌胃,对照组和模型组以蒸馏水10 ml/(kg·d)灌胃,各组每天灌胃1次.灌胃10周后,采用Morris水迷宫试验检测各组小鼠空间学习记忆能力;HE染色观察小鼠海马CA3区、结肠组织病理学改变;ELISA法检测小鼠海马组织和结肠区β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、脂多糖(LPS)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、乙酰胆碱(ACH)水平;16S rRNA测序技术检测小鼠粪便中肠道菌群多样性的变化.结果 与对照组比较,模型组海马和结肠组织Aβ1-42、LPS、SAA含量明显升高,ACH含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,益生菌组第2、5天的逃避潜伏期明显缩短,洗心汤高剂量组第2～5天逃避潜伏期明显缩短,目标平台象限滞留时间显著增加,洗心汤中剂量组第5天逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05或P＜0.01),洗心汤高、中剂量组海马神经元细胞排列较为紧密,海马组织及结肠组织SAA、Aβ1-42、LPS含量明显降低,ACH含量明显升高,Simpson、Shannon指数明显升高(P＜0.05或P＜0.01);益生菌组和洗心汤低剂量组海马神经元细胞排列较为松散,益生菌组和洗心汤高剂量组的拟杆菌门、拟普雷沃氏菌属明显降低,厚壁菌门、乳酸杆菌占比明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与益生菌组和洗心汤高剂量组比较,洗心汤中剂量组杯状细胞数目减少,洗心汤低剂量组腺体数目减少并伴有萎缩.与洗心汤中、低剂量组比较,洗心汤高剂量组海马区Aβ1-42含量明显降低,海马区及结肠组织ACH含量明显升高,结肠组织SAA含量降低(P＜0.05或P＜0.01),且洗心汤低剂量组海马区SAA含量明显高于高、中剂量组(P＜0.01).结论 洗心汤可以改善SAMP8的空间学习记忆能力,减轻海马、结肠组织中LPS、SAA、Aβ1-42的生成与沉积,增加脑肠区ACH的含量,其防治AD的作用机制可能与调节肠道微生态、影响菌群多样性、改善炎症反应有关.

目的:探究微小 RNA-125 b(miRNA-125 b)、分泌型卷曲相关蛋白-5(SFRP5)和丝氨酸蛋白酶抑制剂 B1(Ser-pinB1)对妊娠期糖尿病(GDM)诊断价值及益生菌联合胰岛素治疗效果.方法:选取 2020 年 1 月-2022 年 12 月入院接受治疗的 GDM孕妇 90 例纳入病例组,同期待产的 90 例健康孕妇纳入健康组;病例组给予益生菌冻干粉联合门冬胰岛素治疗,PCR分析 miRNA-125b相对表达水平,酶联免疫吸附试验法测定 SFRP5 和 SerpinB1 水平;检测病例组空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平、餐后 2 h 血糖(2 h PG)水平.对比病例组和健康组 miRNA-125b、SFRP5 和 SerpinB1 水平,分析 miRNA-125b、SFRP5 和 SerpinB1 对 GDM诊断价值;对比干预前后病例组 miRNA-125b、SFRP5、SerpinB1 和血糖水平.结果:病例组 miRNA-125b(0.62±0.11)和 SFRP5(9.16±1.37 ng/ml)均低于健康组(1.55±0.29、14.96±3.18 ng/ml),SerpinB1(2.89±0.95 ng/ml)高于健康组(2.34±0.58 ng/ml)(均P＜0.05);miRNA-125b、SFRP5、SerpinB1 联合诊断 GDM的 ROC曲线下面积为 0.941,特异性(93.2%)敏感度(96.5%)高于单独指标检测(P＜0.05);病例组治疗 3 个月后,miRNA-125b 和 SFRP5 水平均高于治疗前,SerpinB1、FBG、2hPG 和HbAlc水平均低于治疗前(均P＜0.05),发生低血糖 2 例、皮疹 1 例、恶心呕吐 2 例,但症状均较轻,减少用药剂量或停药后症状均消失.结论:相较于健康孕妇,GDM患者 miRNA-125b和 SFRP5 水平降低,SerpinB1 水平升高,3 项联合检测对GDM有较高诊断价值;应用益生菌联合门冬胰岛素治疗,可明显改善GDM患者miRNA-125b、SFRP5、Ser-pinB1 和血糖水平.

目的 优化鼠李糖乳酪杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus)RH0121的冻干工艺,探究其辅助降血糖作用.方法 通过单因素试验和响应面试验,优化鼠李糖乳酪杆菌RH0121冻干粉的生产工艺;同时利用小鼠实验,探究服用冻干粉后小鼠的体质量、口服葡萄糖耐量和血清生化指标水平的变化.结果 优化后的工艺为发酵时间9h,发酵温度37℃,接种量4％,冻干时间50h.经验证,冻干粉活菌数为5.5×1011 CFU/g.灌胃冻干粉样品后的小鼠体质量缓慢回升,小鼠灌胃后120min血糖水平低于灌胃前(P＜0.05).灌胃后,样品组小鼠血清TC、TG、LDL和TNF-a水平均低于模型组,INS水平高于模型组(均P＜0.05).结论 鼠李糖乳酪杆菌RH0121具有辅助降血糖作用,可为开发其他降血糖产品提供原料.