光学纯乳酸作为可降解生物材料——聚乳酸(polylactic acid,PLA)的前体物质,正在受到广泛关注.乳酸发酵过程中酸性产物的积累会影响菌株的生长,提高菌株酸耐受性具有重要意义.本研究以乳酸生产菌株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)DSM1 为出发菌株,通过对凝结芽孢杆菌DSM1 及其乳酸脱氢酶双敲除菌株(ΔldhL1ΔldhL2)进行比较转录分析,筛选酸耐受相关的转运蛋白基因.对关键基因RS16330、RS06895、RS16325、RS10595、RS00500、RS07275、RS10635及RS01930进行实时定量PCR分析,发现基因RS06895、RS10595、RS00500和RS10635在发酵 12 h和 24 h转录水平显著增强.过表达RS10595基因的菌株,在中性(pH 6.0)条件下生长状况和发酵性能均受到抑制,但在酸性条件下(pH 4.6),其乳酸生成相比对照组显著提高.上述结果表明,RS10595基因与菌株 DSM1 的酸耐受性密切相关.本研究有助于进一步探究凝结芽孢杆菌酸耐受的机制,也为构建耐酸菌株提供了基础.

目的 观察四神丸合附子理中汤加减治疗腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的疗效及对肠道菌群的影响.方法 将120 例IBS-D患者按照随机数字表法分为2 组,治疗组60 例在凝结芽孢杆菌活菌片联合精灸治疗基础上应用四神丸合附子理中汤加减治疗,对照组60 例予凝结芽孢杆菌活菌片联合精灸治疗.2 组均治疗4 周.比较2 组疗效;比较2 组治疗前后症状评分变化;比较 2 组治疗前后肠道菌群变化;比较 2 组治疗前后血清酪酪肽(PYY)、胃动素(MTL)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、网络紧密连接蛋白 1(claudin-1)水平变化.结果 治疗组总有效率 93.33%(56/60),对照组总有效率68.33%(41/60),治疗组疗效优于对照组(P<0.05).2 组治疗后症状评分均较本组治疗前降低(P<0.05);治疗后治疗组症状评分均低于对照组(P<0.05).2 组治疗后双歧杆菌、乳酸杆菌均较本组治疗前升高(P<0.05),大肠杆菌、肠球菌较本组治疗前降低(P<0.05);治疗后治疗组双歧杆菌、乳酸杆菌均高于对照组(P<0.05),大肠杆菌、肠球菌均低于对照组(P<0.05).2 组治疗后血清PYY、MTL水平均较本组治疗前降低(P<0.05);治疗后治疗组血清PYY、MTL水平均低于对照组(P<0.05).2 组治疗后血清TNF-α水平均较本组治疗前降低(P<0.05),claudin-1 水平较本组治疗前升高(P<0.05);治疗后治疗组血清TNF-α水平低于对照组(P<0.05),claudin-1 水平高于对照组(P<0.05).结论 在凝结芽孢杆菌活菌片联合精灸治疗基础上应用四神丸合附子理中汤加减治疗IBS-D,能减轻患者临床症状,改善患者肠内菌群,提高临床疗效.

[背景]凝结芽孢杆菌除了具有一般乳酸菌的益生功能外,还具较强的耐酸、耐胆盐、耐高温、易贮存等生物特性.[目的]从泡菜中筛选一株性能优良的凝结芽孢杆菌用于微生态制剂的制备,并对其产孢率进行优化,为该菌株的进一步工业化生产提供参考依据.[方法]采用选择性培养基通过特定的培养条件,筛选到一株抑菌效果良好的产酸芽孢杆菌,并对其进行特异性引物的鉴定、16S rRNA基因序列分析及生理生化实验.通过单因素及正交试验对菌株的产芽孢条件进行优化.[结果]筛选得到一株凝结芽孢杆菌BC01,该菌株对大肠杆菌(Escherichia coli CVCC 1527)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium CVCC 2228)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens CVCC 46)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis CVCC 503)等均有较强的抑制作用;模拟胃液处理120 min存活率达到94％;0.3％的胆盐存活率达到84.3％.单因素及正交试验优化后的最适培养基配方:糖蜜10.0 g/L,酵母浸出粉20.0 g/L,NaC1 5.0 g/L,K2HPO4 5.0 g/L,MnSO4 10.0 mg/L;最适培养条件:接种量4％,温度45℃,初始pH 7.0,转速200 r/min,培养时间36 h.在该优化条件下,其活菌数最高达到6.7×109 CFU/mL,产孢率达到89.2％.[结论]筛选得到一株可用于微生态制剂的菌株——凝结芽孢杆菌BC01,对其产孢率进行了优化,为工业化生产奠定了基础.

目的 观察和评价凝结芽孢杆菌活菌片(商品名:爽舒宝)对妊娠剧吐患者的临床疗效.方法 将56例妊娠剧吐患者随机分为两组,每组28例.分别给予静脉补液治疗(对照组)及静脉补液联合凝结芽孢杆菌活菌片治疗(观察组),评估两组患者治疗效果,统计患者尿酮体转阴率、主要症状消失率、呕吐症状彻底消失时间、整体治疗持续时间等指标.结果 观察组患者治疗总有效率(100.00％)高于对照组患者(85.71％),观察组患者尿酮体转阴率(100.00％)高于对照组患者(64.29％),观察组患者恶心、呕吐症状消失率(64.29％)高于对照组患者(35.71％),观察组患者厌食症状消失率(75.00％)高于对照组患者(46.43％),观察组患者整体治疗持续时间、呕吐症状消失时间均短于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 凝结芽孢杆菌活菌片治疗妊娠剧吐效果显著,值得临床推广.

Bacillus coagulans IPE22 是一株重要的乳酸生产菌,对其乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)基因进行克隆、表达和生物信息学分析十分必要.以B. coagulans36D1 序列信息(GenBank: CP003056.1)设计引物,PCR 扩增获得B. coagulans IPE22 中LDH (Bc-LDH) 基因,构建重组表达质粒并转化Escherichia. coli BL21 (DE3)中进行诱导表达,针对Bc-LDH 的氨基酸序列进行生物信息学特征分析.经基因片段核酸电泳分析和SDS-PAGE 电泳验证,Bc-LDH 基因成功实现克隆表达.Bc-LDH 为等电点5.41 的亲水性蛋白质,具有多个糖基化和磷酸化位点,二级结构以不规则卷曲,α-螺旋和延伸链为主要结构元件.Bc-LDH 具有 NADB-Rossmann 和Ldh-1-C 超家族功能结构域,包含23 个氨基酸组成的跨膜结构域,且不同乳酸生产菌中LDH 均具有高度保守的活性位点.蛋白质相互作用预测显示,Bc-LDH 与细胞内丙酮酸激酶和NAD 结合苹果酸蛋白的互作最为密切.

目的 观察和评价凝结芽孢杆菌活菌片 (商品名:爽舒宝) 对腹泻型肠易激综合征患者的临床疗效.方法 将100例腹泻型肠易激综合征患者随机分为3组, 其中爽舒宝治疗组32例, 马来酸曲美布汀治疗组35例, 联合治疗组33例.3组患者疗程均为60d, 记录3组患者腹痛、腹泻、排便异常等症状的变化.结果 在近期疗效方面, 联合治疗组有效率 (87.87％) 高于爽舒宝治疗组 (75.00％) , 而这两组的有效率均高于马来酸曲美布汀治疗组 (51.43％) .在远期疗效方面, 爽舒宝治疗组患者有效率 (100.00％) 和联合治疗组 (100.00％) 之间无显著差异, 而这两组的有效率均高于马来酸曲美布汀治疗组 (74.29％) .治疗结束后, 3组患者大便次数、腹痛、大便性状等各项症状体征积分均较治疗前显著降低 (P<0.05) , 其中联合治疗组患者治疗后各项症状体征积分与爽舒宝治疗组比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 但均低于马来酸曲美布汀治疗组 (P<0.05) .结论 凝结芽孢杆菌活菌片治疗腹泻型肠易激综合征疗效显著, 值得在临床治疗中推广应用.

目的:比较小儿腹泻宁(泡腾颗粒)分别联合凝结芽孢杆菌活菌片与双歧杆菌乳杆菌三联活菌片治疗小儿急性腹泻的疗效.方法:选取2016年1月至2017年5月新余市妇幼保健院收治的急性腹泻患儿60例作为研究对象,按照入院顺序抽签随机分为观察组和对照组,每组30例.对照组患儿给予小儿腹泻宁(泡腾颗粒)联合双歧杆菌乳杆菌三联活菌片治疗,观察组患儿给予小儿腹泻宁(泡腾颗粒)联合凝结芽孢杆菌活菌片治疗.比较两组患儿各症状消失时间、血清白细胞介素23(IL-23)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的差异.结果:观察组患儿腹泻、腹痛、发热及呕吐消失时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患儿血清IL-23、TNF-α水平明显低于治疗前,且观察组患儿上述指标水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:小儿腹泻宁(泡腾颗粒)与凝结芽孢杆菌活菌片联合治疗小儿急性腹泻的疗效确切,可在短时间内改善患儿症状,效果优于小儿腹泻宁(泡腾颗粒)联合双歧杆菌乳杆菌三联活菌片.

目的 观察凝结芽孢杆菌活菌片联合蒙脱石散治疗腹腔镜胆囊切除术后腹泻的疗效及对肠道菌群和肠道屏障功能的影响.方法 将2014年5月-2018年6月期间宁波大学医学院附属鄞州医院收治的120例腹腔镜胆囊切除术后腹泻患者按随机数字表法分为观察组60例和对照组60例,对照组给予蒙脱石散治疗,观察组在对照组治疗基础上给予凝结芽孢杆菌活菌片治疗,均治疗2周.观察2组治疗前后主要临床症状积分、肠道菌群及肠道黏膜屏障功能的变化.结果 2组患者治疗后,大便次数、大便性状以及腹部不适症状有不同程度的好转,观察组的总有效率为91.7％(55/60),对照组为71.7％(43/60),观察组疗效比对照组更显著(X2=9.186,P=0.010).治疗后,观察组大肠埃希菌和肠球菌与治疗前相比显著下降(P＜0.05),且低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著升高(P＜0.05),且显著高于对照组(P＜0.05).治疗后,2组血清D-乳酸指标较治疗前明显下降,观察组下降幅度较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05).2组治疗后肠道sIgA水平均显著高于治疗前(P＜0.05),且观察组治疗后肠道sIgA水平显著高于对照组(P＜0.05).结论 凝结芽孢杆菌活菌片联合蒙脱石散可显著缓解腹腔镜胆囊切除术后腹泻患者临床症状,其机制可能与调节患者肠道微生态平衡以及促进肠道黏膜上皮细胞屏障功能的恢复有关.

为寻找高效降解水体中氨氮的菌株并对其进行应用评价,研究从多种水产养殖池塘水体和底泥的混合物中筛选出2株氨氮降解菌,降解率分别达97.8％和98.5％,经鉴定均为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans).对筛选出的2菌株培养条件进行优化,2菌株pH、C/N适应范围广,并且耐高温、高盐.通过灌服试验表明所筛选菌株对养殖动物是安全的.在此基础上,将筛选菌株与本实验室前期诱变菌株B38复配后制成复合菌,通过养殖试验评价了复合菌对氨氮、亚硝酸盐及藻类数量的调控效果.与4种商品微生态制剂(光合细菌、酵母菌、强效EM和芽孢杆菌)相比,泼洒复合菌的池塘氨氮含量逐渐降低.在氨氮含量下降的同时,亚硝酸盐含量有上升的趋势,但在试验的第18天,复合菌组与酵母菌组亚硝酸盐含量有所降低.对藻类数量的影响结果显示,从第9天开始添加复合菌与芽孢杆菌组藻类数量高于其他各组,在第14天,这2组藻类数量大约为其他组的2倍.由此可见,复合菌具有明显的降氨氮特性,并能有效增加藻类数量,但对亚硝酸盐降解效果不显著.研究为复合型微生态制剂的开发提供了技术支撑.

[目的]观察健脾止泄方联合凝结芽孢杆菌活菌片对腹泻型肠易激综合征(IBS)患者血清神经肽Y(NPY)水平、IBS症状严重程度积分及直肠最大耐受阈值的影响.[方法]依据自愿接受治疗方案的不同将2017年12月～2018年12月在我院就诊的94例腹泻型IBS患者分为2组,对照组48例接受凝结芽孢杆菌活菌片治疗,研究组46例在对照组基础上联合使用健脾止泄方.进行疗效评价,测定血清5-羟色胺(5-HT)、降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)、NPY水平,统计IBS症状严重程度积分,并对直肠最大耐受阈值、双歧杆菌/肠杆菌值进行比较.[结果]研究组总有效率明显高于对照组(P＜0.05);治疗后2组血清5-HT、CGRP、SP、NPY水平与治疗前相比均明显降低(P＜0.05),且治疗后研究组血清5-HT、CGRP、SP、NPY水平均明显低于对照组(P＜0.05);治疗后2组IBS症状严重程度积分与治疗前相比均明显下降(P＜0.05),且治疗后研究组IBS症状严重程度积分明显低于对照组(P＜0.05);治疗后2组直肠最大耐受阈值、双歧杆菌/肠杆菌值与治疗前相比均明显增大(P＜0.05),且治疗后研究组直肠最大耐受阈值、双歧杆菌/肠杆菌值明显大于对照组(P＜0.05).[结论]腹泻型IBS临床治疗应用健脾止泄方与凝结芽孢杆菌活菌片联合治疗方案,有利于增进疗效,合理调节血清5-HT、CGRP、SP、NPY水平,IBS症状严重程度积分下降明显,且直肠最大耐受阈值、双歧杆菌/肠杆菌值改善明显.