目的:探讨吡非尼酮（pirfenidone，PFD）对IgA肾病（IgA nephropathy，IgAN）患者血清IgA1诱导人肾小球系膜细胞（HMC）增殖的作用及其可能机制。方法:采用Jacalin亲和层析联合Sephacryl S-200凝胶过滤法纯化IgAN患者血清IgA1并将单体热聚合为聚合IgA1（aIgA1）。CCK8法摸索PFD作用浓度及时间，分为空白对照组、IgA1（0.5 mg/ml）组、IgA1（0.5 mg/ml）+PFD（2 mmol/L）组。采用CCK8法检测各组系膜细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞周期变化，并计算系膜细胞增殖指数；Western印迹法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad4、Smad7、纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白（collagen Ⅳ）的蛋白表达水平；实时定量PCR检测各组TGF-β1、Smad4、Smad7、纤维连接蛋白、collagen Ⅳ的mRNA表达水平。结果:与空白对照组相比，aIgA1诱导的HMC增殖显著增加（ P<0.05）；PFD处理后，HMC增殖活力显著被抑制（ P<0.01）；与空白对照组相比，IgA1组HMC中G1期细胞明显减少、S期细胞明显增多，细胞增殖指数增加（均 P<0.05）；与IgA1组相比，IgA1+PFD组HMC中G1期细胞明显增多、S期及G2/M期细胞明显减少，细胞增殖指数下降（均 P<0.05）。与空白对照组相比，aIgA1刺激下HMC中collagen Ⅳ、纤维连接蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均明显增加，TGF-β1蛋白表达增加，Smad7蛋白表达下降（均 P<0.05）；PFD处理后，HMC中collagen Ⅳ、纤维连接蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均明显下降，TGF-β1蛋白表达下调，Smad7蛋白表达上调（均 P<0.05）；各组TGF-β1和Smad7 mRNA表达在PFD处理前后差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:PFD可增加HMC在G1期的阻滞，抑制IgAN患者aIgA1诱导的HMC增殖，减少细胞外基质的产生，其机制可能与Smad7表达上调及TGF-β1/Smad4通路下调有关。

目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)IgA单克隆抗体,对其表达条件进行优化以提高表达量,并初步探讨IgA抗体在抗SARS-CoV-2中的效应.方法 将编码IgA1-F61抗体序列的质粒与聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)转染试剂混合后转染EXPi293F?细胞,瞬时表达抗体蛋白;通过优化重链(heavy chain,He)、轻链(light chain,Lc)、J链(joining chain,Jc)比例、质粒与PEI比例、转染后收获时间确定单体IgA1(monomeric IgA1,mIgA1)-F61 及二聚体IgA 1(dimeric IgA1,dIgA1)-F61 在EXPi293F?细胞中的最佳培养条件以及最佳表达量.将转染后上清经亲和层析纯化后,BCA法测定浓度,SDS-PAGE及体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法分析抗体表达完整性及纯度,假病毒中和试验检测抗体中和活性.结果 当He与Lc比例为1∶2、质粒与PEI比例为1∶3、转染后5d收获上清时,mIgA1-F61最高表达量为123.45 μg/mL,纯化后抗体纯度达95％以上;He∶Lc∶Jc为1∶2∶1时,可获得最大纯度的dIgA1-F61,达90％以上.针对OmicronBA.4/5的假病毒中和试验结果显示,dIgA1-F61呈现优于IgG-F61的中和活性,其最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)降低了4倍左右.结论 成功表达了重组抗SARS-CoV-2单克隆抗体mIgA 1-F61和dIgA 1-F61,纯度较高,且dIgA 1在体外展现出优于IgG的中和活性.

乌头属药物多具有回阳救逆、散寒止痛之功效,现代药理研究表明,其主要成分为生物碱、黄酮类化合物、游离脂肪酸和多糖等.乌头属单药通过调节T细胞亚群分化和IL-1、IL-6等免疫因子水平影响机体免疫功能从而发挥抗炎作用.乌头属药物单体通过提高巨噬细胞抗原提呈能力,调节血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG等水平,从而发挥免疫调节活性.乌头属药物复方通过改善机体胸腺指数、脾指数,提高淋巴细胞杀伤能力,从而发挥免疫调节作用.

在消化道粘膜、乳腺及其他外分泌腺中IgA含量比IgM和IgG高,它是在局部抗原刺激下由粘膜下的浆细胞产生,并选择性地分泌的,是局部免疫的主要免疫球蛋白。血清中IgA约90%是单体,但分泌液中大部分分泌型IgA以二聚体存在。由粘膜下固有层的浆细胞合成的IgA以二聚体的形式和一分子的J链结合,构成(IgA) 2J链复合体并分泌到细胞外,与粘膜上皮细胞产生的分泌小体结合,进入上皮细胞内,然后再分泌到消化道管腔中。这种分泌型IgA由于与分泌小体结合,而得到保护免受各种蛋白水解酶的作用。分泌型IgA的一部分进入血中,构成血清IgA的一部分。

桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)作为活血化瘀方,对于延缓肾脏纤维化的进程有一定作用,但作为包含诸多单体成分的中药复方,应对复杂的病理过程,其研究方法的探讨和作用靶点的找寻一直是该方向的研究热点.活血化瘀法在阻滞IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)纤维化进程方面有一定的临床疗效,但作用机制尚不明确.该研究先借助网络药理学方法,研究THSWD干预IgAN纤维化进程的有效活性成分,作用靶点及分子作用机制,在此基础上,通过离体实验,验证THSWD作用于3T3细胞对ERK因子表达的影响.通过中药系统药理学技术平台收集THSWD中的活性成分及作用靶点,筛选得到木犀草素、槲皮素等61个有效活性成分及240个作用靶点,与CTD数据库查找的IgAN相关靶点相交得到185个靶点.利用Cytoscape软件与STRING数据库构建"桃红四物汤-活性成分-靶点"网络和蛋白互作网络,筛选69个核心靶点;通过DAVID对核心靶点的GO富集分析和KEGG通路分析及进行细胞实验,结果表明,ERK因子是THSWD干预IgAN重要的因子,THSWD可以显著降低细胞活性、ERK1/2 mRNA表达、p-ERK1/2蛋白表达.该研究提示,THSWD可能通过影响ERK因子及其磷酸化水平,来延缓成纤维细胞生长.

目的:研究石油沥青对作业工人健康的影响。方法:以沥青供应站接触石油沥青者为接触组，以既不接触石油沥青又不接触其他毒物者为对照组，进行环境监测和两组人群的遗传学效应、免疫功能、肺功能的检测。结果:工作场所苯并（a）芘和苯溶物平均浓度接触组分别是0.27μg/m 3和0.15mg/m 3，对照组分别是0.003 5μg/m 3和0.054mg/m 3；接触组生活环境则分别为0.008 8μg/m 3和0.026mg/m 3。接触组外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换（SCE）率和微核率（LMN）明显高于对照组（ P<0.01）；淋巴细胞数和T、B细胞数，IgA、IgM含量以及接触组男性的FEV 1.0、FEV 1. 0%、MMFR、PEFR、 75、 50、 25均显著低于对照组（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:石油沥青可引起接触者DNA、染色体和大、小气道的损伤以及细胞免疫、体液免疫水平降低。

目的 验证用于静注人免疫球蛋白生产的Fractogel?EMDTMAE(简称TMAE)层析介质的使用寿命.方法 建立TMAE凝胶层析缩小模型,通过对层析介质运行过程中的层析图谱、蛋白回收率、IgA、IgM、分子大小分布、压力、理论塔板数、对称系数和总有机碳(total organic carbon,TOC)进行趋势分析.对每次层析过程中的参数进行比对,分析随着循环次数的增加关键参数的变化情况,确定层析介质使用寿命.结果 IgA检测均值≤100μg/mL,IgM检测均值≤50 μg/mL,IgG单体与二聚体含量之和＞95.0％,均符合产品质量标准.层析介质的压力呈逐步升高的趋势,蛋白回收率下降,均在可接受范围内,同时层析柱的每米理论塔板数和对称系数符合使用要求.结论 用于静注人免疫球蛋白生产的TMAE层析凝胶使用寿命暂定为240次.

目的 利用响应面法对阴离子交换介质在静注人免疫球蛋白层析纯化中的应用条件进行优化,确立最佳层析参数.方法 采用双因素三水平响应面法设计层析参数pH值和电导率,用双缩脲法和高效液相色谱法分别测定蛋白浓度和分子大小分布,以蛋白回收率、单体+二聚体含量评价纯化效果,获得最优层析参数并进行验证.结果 优化的层析纯化平衡和上样条件为pH5.4,电导率1.05 mS/cm.在该条件下以血浆组分Ⅱ为原料,层析后蛋白回收率为(96.6±3.1)％,IgG单体和二聚体比例为(99.98±0.02)％,IgA含量为(2.6±1.1)mg/L,IgM含量为(4.5±1.4)mg/L.结论 经响应面法优化后的阴离子交换层析,可用于纯化血浆组分Ⅱ制备静注人免疫球蛋白制品.