目的:研究芳香烃受体抑制剂StemRegenin 1（SR1）对全身照射后小鼠造血系统辐射损伤的防护作用。方法:采用随机化区组设计，将15只健康C57BL/6J小鼠分为3组：对照组、4 Gy照射组（简称照射组）和4 Gy照射+SR1组（简称照射给药组），每组5只。照射给药组在照射前5 d至照射后5 d连续灌胃给予SR1（50 mg/kg），4 Gy γ射线全身照射后第9天处死小鼠，取外周血和单侧股骨细胞，使用全自动血液分析仪检测外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、骨髓有核细胞（BMNC）等计数；采用粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）实验检测骨髓细胞增殖能力；使用流式细胞仪检测BMNC和造血干细胞（HSC）中的活性氧（ROS）水平、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）水平和外周血中免疫细胞百分比。组间两两比较采用Student t检验。 结果:与照射组相比，照射给药组小鼠外周血中WBC[（3.060±0.650）×10 9个/mL对（4.680±1.134）×10 9个/mL， t=2.770， P<0.05]和BMNC[（28.375±6.811）×10 9个/mL对（49.125±12.532）×10 9个/mL， t=3.231， P<0.05）]数量均明显增加；与对照组相比，照射给药组RBC数量明显减少（ t=4.301， P<0.05）。与照射组相比，照射给药组CFU-GM明显升高（3.4±1.7对13.6±6.7），且差异有统计学意义（ t=3.323， P<0.05）；照射给药组小鼠的BMNC和HSC中ROS水平明显降低（ t=3.962 、2.530，均 P<0.05），同时BMNC和HSC中NOX4水平亦明显降低（ t=2.310 、2.848，均 P<0.05）；照射给药组小鼠CD3 + T细胞百分比明显升高[（8.512±3.716）%对（16.140±1.969）%， t=4.056， P<0.05]，B220 + B细胞百分比亦明显升高[（0.608±0.267）%对（7.240±2.828）%， t=4.027， P<0.05]。 结论:芳香烃受体抑制剂SR1对全身照射造成的小鼠造血系统辐射损伤有一定的保护作用。

目的:初步观察帕金森病患者血压昼夜节律紊乱的临床特点及对直立性低血压（OH）的影响。方法:连续采集2019年8月至2021年10月在上海交通大学医学院附属新华医院就诊的165例帕金森病患者病史，完成运动和非运动症状评分，并采集患者24 h动态血压和卧-立位血压数据，完成OH问卷调查。观察血压昼夜节律紊乱各类型（觉醒期低血压、反杓型血压、夜间高血压）的发生率，分别采用 t检验、卡方检验、 U检验和线性回归分析方法观察3种血压昼夜节律紊乱类型的临床特点及影响因素，并采用Logistic回归分析探究血压昼夜节律紊乱各类型与OH和症状性OH（SOH）的关系。 结果:在165例帕金森病患者中，反杓型血压发生率为39.39%（65/165），夜间高血压发生率为43.64%（72/165），觉醒期低血压发生率为31.52%（52/165）。与无反杓型血压患者相比，伴反杓型血压患者年龄较大［分别为（71.72±7.81）岁、（65.29±9.68）岁， t=-4.491， P<0.001］、起病年龄较晚［分别为（66.67±9.10）岁、（62.16±10.66）岁， t=-2.809， P=0.006］、病程（月）更长［分别为36.00（20.50，95.50）、24.00（12.00，41.75）， Z=-3.393， P<0.001］、每日左旋多巴剂量（LD）［分别为（426.15±267.38）mg/d、（284.00±235.58）mg/d， t=-3.590， P<0.001］和每日左旋多巴等效剂量（LED）［分别为（514.80±360.03）mg/d、（341.44±284.57）mg/d， t=-3.440， P=0.001）更大、统一帕金森病评定量表（UPDRS）-Ⅱ评分［分别为（12.92±6.38）分、（9.54±5.59）分， t=-3.434， P=0.001］和UPDRS-Ⅲ评分［分别为（28.34±11.60）分、（21.41±12.18）分， t=-3.508， P=0.001］更高、幻觉比例［分别为18.46%（12/65）、7.00%（7/100），χ2=5.079， P=0.024］更高；与无觉醒期低血压患者相比，伴发觉醒期低血压患者年龄较大［分别为（70.83±7.09）岁、（66.44±10.16）岁， t=-2.811， P=0.006］；与无夜间高血压患者相比，伴发夜间高血压患者病程（月）更长［分别为39.50（15.00，96.00）、24.00（12.00，36.00）， Z=-2.944， P=0.003］、LD［分别为（398.61±251.19）mg/d、（294.62±254.25）mg/d， t=-2.619， P=0.010］和LED［分别为（493.28±344.02）mg/d、（345.05±298.59）mg/d， t=-2.959， P=0.004）更大、幻觉比例更高［分别为19.44%（14/72）、5.38%（5/93），χ2 =7.882， P=0.005］、UPDRS-Ⅱ评分［分别为（12.08±6.33）分、（10.00±5.86）分， t=-2.086， P=0.039］和UPDRS-Ⅲ评分［分别为（26.50±11.72）分、（22.42±12.66）分， t=-2.034， P=0.044］更高、血压变异性更大（分别为20.66±5.47、17.44±5.36， t=-3.798， P<0.001）。趋势检验结果表明，血压昼夜节律紊乱种类数与年龄、病程、左旋多巴及单胺氧化酶B抑制剂和金刚烷胺的使用频率、清晨与每日LD和LED、UPDRS-Ⅱ和UPDRS-Ⅲ评分、幻觉发生频率、汉密尔顿焦虑量表评分、伴发OH和SOH的比例和加权-血压变异性（w-BPV）呈正相关（均 P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果表明，觉醒期低血压（ OR=3.35，95% CI 1.55~7.22， P=0.002）和夜间高血压（ OR=2.44，95% CI 1.20~4.97， P=0.014）是OH发生的危险因素，每日LED（ OR=1.21，95% CI 1.01~1.43， P=0.035）、UPDRS-Ⅲ评分（ OR=1.09，95% CI 1.02~1.16， P=0.009）和w-BPV（ OR=1.14，95% CI 1.01~1.29， P=0.029）是SOH的独立危险因素。 结论:帕金森病患者血压昼夜节律紊乱程度与年龄、病程和运动症状严重程度呈正相关；觉醒期低血压和夜间高血压是帕金森病患者发生OH的独立危险因素。

目的:建立高效的人肠三叶因子（ITF）重组表达及纯化策略，观察重组人ITF（rhITF）对烧伤小鼠肠黏膜损伤与修复的作用并探讨其机制。方法:采用实验研究方法。采用新型酵母表达载体pGAPZαA和酵母菌X33重组表达ITF，并通过金属螯合亲和层析与阴、阳离子交换层析法纯化蛋白，行非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定rhITF。rhITF与胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液按体积比1∶1混合，分别作用0.5、1.0、1.5、2.0 h和1.0、2.0、4.0 h后行非还原SDS-PAGE，分析rhITF的稳定性。按随机数字表法将105只6~8周龄BALB/c雄性小鼠分为假伤组（30只）、单纯烧伤组（45只）、烧伤+rhITF组（30只）。将单纯烧伤组和烧伤+rhITF组小鼠背部造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤，假伤组小鼠模拟致假伤，烧伤+rhITF组小鼠伤后灌胃1 mg/kg rhITF，其余2组小鼠伤后给予等量生理盐水。伤后24 h，取15只单纯烧伤组小鼠，制备烧伤血清，用于细胞实验。伤后3、5、7 d，每组各取10只小鼠处死后取小肠组织，苏木精-伊红染色观察肠黏膜病理变化，分光光度法和酶联免疫吸附测定法测定肠组织二胺氧化酶（DAO）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。取3批人结直肠腺癌HT-29细胞，分为阴性对照组、25 μg/mL rhITF组、50 μg/mL rhITF组（样本数为3），正常对照组、烧伤血清组、烧伤血清+rhITF组（样本数为3），CK869抑制剂组、CK666抑制剂组和溶剂对照组（样本数为2），分别进行相应处理，Transwell实验观察培养12 h后细胞移行。另取2批HT-29细胞，每批细胞均分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清+rhITF组（样本数均为6），培养24 h后，蛋白质印迹法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1（Rac1）及肌动蛋白相关蛋白2/3（Arp2/3）复合亚基1B（ARPC1B）蛋白表达，活化磁珠下拉实验检测细胞Rac1活性。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、SNK检验。结果:每升发酵液获得rhITF 82.35 mg，蛋白纯度高达98%，且具有良好的抗原特异性。rhITF在胃蛋白酶和胰蛋白酶溶液中较稳定，与胰蛋白酶溶液作用2.0 h后仍有45%残余，与胃蛋白酶溶液作用4.0 h后仍有90%残余。假伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜未见充血、水肿，单纯烧伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜主要病理表现为充血、水肿、糜烂及出血。烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5 d肠黏膜主要以充血、水肿为主，伤后7 d肠黏膜水肿和充血减轻。与单纯烧伤组比较，假伤组、烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5、7 d肠组织DAO和LDH活性显著升高（ P<0.05或 P<0.01）。培养12 h后，25 μg/mL rhITF组细胞移行数为（58±12）个，显著多于阴性对照组的（16±5）个（ P<0.01），显著少于50 μg/mL rhITF组的（123±9）个（ P<0.05）。培养12 h后，烧伤血清组细胞移行数为（60±13）个，显著少于正常对照组的（143±11）个和烧伤血清+rhITF组的（138±8）个（ P<0.05）。培养12 h后，溶剂对照组细胞移行数为（155±9）个，明显多于CK666抑制剂组的（33±5）个、CK869抑制剂组的（28±5）个（ P<0.01）。培养24 h后，烧伤血清组细胞AMPK、Rac1蛋白表达量与正常对照组、烧伤血清+rhITF组相近（ P>0.05），p-AMPK蛋白表达量明显高于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01），ARPC1B蛋白表达量明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05）。培养24 h后，烧伤血清组细胞Rac1活性明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:本研究获得的rhITF具有较高的纯度和超强的稳定性，能耐受极端pH和蛋白酶水解，减轻烧伤小鼠肠黏膜损伤。rhITF能通过抑制AMPK磷酸化维持Rac1-Arp2/3活性，促进肠上皮细胞移行，加速肠黏膜修复。

目的 探讨选择性单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂TM-5对胶质瘤U87细胞体外自噬及凋亡的影响.方法 正常培养胶质瘤细胞株U87,随机分为6组:对照组不做处理,5、10、25、50、100 μmoL/L TM-5组分别予以5、10、25、50、100 μmoL/L TM-5处理细胞,每组设3个复孔.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测促凋亡蛋白Bcl-2相关蛋白X(Bax)、抑凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的基因表达;蛋白质免疫印迹(WB)检测细胞凋亡相关蛋白Bax和切割后半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)以及自噬相关标志蛋白Beclin-1、自噬相关蛋白1轻链-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和P62 表达.结果 与对照组比较,10、25、50、100 μmoL/L TM-5组U87细胞存活率降低(P<0.05),选取5、10、25 μmoL/L TM-5组(细胞存活率＞50%)进行后续实验.与对照组比较,10、25 μmoL/L TM-5组相对细胞凋亡率、细胞中LC3-Ⅱ和Bax蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05);5、10、25 μmoL/L TM-5组U87细胞中促凋亡基因Bax mRNA相对表达水平、Beclin-1和cleaved caspase-3蛋白相对表达量升高,抑凋亡基因Bcl-2 mRNA、P62蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TM-5可抑制胶质瘤U87细胞存活,可上调Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bax和cleaved caspase-3,下调Bcl-2和P62表达,诱导细胞自噬和凋亡.

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种神经退行性病变,治疗药物主要有拟多巴胺药和抗胆碱药两大类,多巴胺类及其增效剂现有长足发展,包括单胺氧化酶-B(mono-amine oxidase B,MAO-B)抑制剂、儿茶酚-氧位-甲基转移酶抑制剂、麦角类和非麦角类多巴胺(dopamine,DA)受体激动剂、DA前体药物,中药大麻类和吲哚醌等.吲哚醌作为内源特异抗老化酶MAO-B抑制剂,有多种药理活性,其机制还涉及多种蛋白调节的活性.

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)增殖的影响及机制,为临床上采取措施保持终末期肾病(ESRD)患者体内Tregs数量和功能正常奠定基础.方法 从人外周血单个核细胞分离Tregs和CD4+ CD25 T细胞(作为效应T细胞,Teff)、诱导树突状细胞(DC)后做如下处理:Tregs按5×104个细胞/孔培养于U型底96孔板,加入经丝裂霉素灭活的负载同种异体抗原的DC 5×104个细胞/孔和IL-2 100 U/ml,依据是否加入AOPP分为3组:对照组(加入血清白蛋白200μg/ml);AOPP组(加入AOPP 200 μg/ml)、抗氧化组[100 μmol/L还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶抑制剂DPI预处理lh后再加入200 μg/ml AOPP].3 H-TdR掺入法检测各组Tregs的增殖能力和免疫抑制功能,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERKl/2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化信号转导与转录激活因子5(p-STAT5)和p27kiPl等表达情况.结果 在AOPP存在的情况下,AOPP组Tregs 3 H-TdR掺入率为(36 213.3±3 385.9)每分钟放射性荧光闪烁计数(cpm),较对照组(65 557.0±3 981.6) cpm低(P=0.001).抗氧化组Tregs 3H-TdR掺入率为(44827.0±3694.6)cpm,较AOPP组高(P=0.041),低于对照组(P=0.003).AOPP组在Tregs∶ Teff为1∶1和1/2∶1的情况下,Tregs对Teff的抑制率分别为(27.3±4.0)％和(23.9±3.7)％,与同比例情况下的对照组抑制率[(68.5±7.9)％和(62.9±5.0)％]比较,差异均有统计学意义(P=0.001、0.001).AOPP组Tregs内p-ERK、p-Akt和p-STAT5的表达较对照组低(P =0.009、0.021、0.036),而p27kiPl表达较对照组高(P=0.036).抗氧化组Tregs内p-ERK、p-Akt和p-STAT5的表达较AOPP组显著性上调(P=0.034、0.030、0.042),但仍低于对照组(P =0.043、0.039、0.007);而p27kiPl表达较AOPP组低(P=0.048),但高于对照组(p=0.047).结论 AOPP可能通过氧化应激抑制Tregs细胞内p-ERK、p-Akt、p-STAT5活化和促进Tregs细胞内p27kipl的表达,进而抑制Tregs增殖.

帕金森病(Parkinson's disease,PD),是一种中脑黑质多巴胺能神经元变性的中枢神经系统退行性病变疾病,临床表现主要为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常.病因和发病机制不明,目前普遍认为,多因素可能参与PD发病. 遗传因素可增加患病易感性,只有与环境因素及衰老的相互作用下,通过氧化应激、线粒体功能障碍、钙超载、兴奋性氨基酸毒性作用、细胞凋亡等机制导致黑质多巴胺( Dopa-mine,DA)能神经元大量变性丢失而发病. PD的治疗,主要以左旋多巴、多巴胺受体激动剂、单胺氧化酶 B 抑制剂( MAO-B)、脑深部电刺激( DBS)缓解症状为主,但不能减缓或阻止病情的发展. 所以探究PD的保护因素刻不容缓.

沙芬酰胺是一种单胺氧化酶-B(MAO-B)抑制剂,可辅助左旋多巴或卡比多巴用于治疗帕金森病患者“开-关”现象的“关”期("off" episodes).本文对其药理作用、药动学、药物相互作用、临床评价、安全性、用法用量等进行综述.

目的 探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对单核巨噬细胞THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)介导的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)摄取的影响及机制.方法 用丙二醇甲醚醋酸酯孵育THP-1单核细胞48 h诱导分化成巨噬细胞,人重组PCSK9蛋白预处理巨噬细胞1h后,与ox-LDL孵育24 h诱导为泡沫细胞,油红O染色观察对照组(泡沫细胞)与不同浓度人重组PCSK9蛋白孵育组细胞内脂质蓄积情况,酶法测定细胞内胆固醇含量,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)与Western blot法检测LOX-1 mRNA和蛋白表达.荧光显微镜观察对照组(巨噬细胞)、PCSK9蛋白单独孵育组和PCSK9蛋白与抗LOX-1抗体、IgG抗体共孵育组对Dil标记氧化低密度脂蛋白(Dil-ox-LDL)的摄取情况.检测对照组(泡沫细胞)与PCSK9蛋白组对Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白表达影响,以及PCSK9蛋白与TLR4抑制剂(TAK-242)共同孵育组NF-κB mRNA和蛋白表达影响,与NF-κB抑制剂(PDTC)共同孵育组COX-2 mRNA和蛋白表达影响,与COX-2抑制剂(NS-398)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂(DPI)共同孵育组活性氧簇(ROS)生成的影响.检测对照组(PCSK9蛋白预处理泡沫细胞)和PCSK9蛋白分别与TAK-242、PDTC、NS-398、DPI共同孵育组LOX-1 mRNA和蛋白表达.结果 (1)PCSK9组细胞内脂滴综合光密度、总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯/总胆固醇比值均高于对照组(P均＜0.05),PCSK9组LOX-1 mRNA和蛋白表达均高于对照组(P均＜0.05).(2)PCSK9组与PCSK9+IgG抗体组巨噬细胞Dil-ox-LDL荧光强度高于对照组(P均＜0.05),PCSK9+抗LOX-1抗体组荧光强度低于PCSK9组与PCSK9+IgG抗体组(P均＜0.05).(3)PCSK9组TLR4、NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达均高于相应对照组(P均＜0.05),PCSK9+TAK-242组TLR4、NF-κB与PCSK9+PDTC组NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达均低于相应PCSK9组(P均＜0.05).PCSK9组ROS水平高于对照组(P＜0.05),PCSK9+NS-398和PCSK9+DP1组ROS水平均低于PCSK9组(P均＜0.05).(4)TAK-242、PDTC、NS-398、DPI分别与PCSK9蛋白共孵育组的LOX-1 mRNA和蛋白表达均低于PCSK9蛋白单独孵育组(P均＜0.05).结论 PCSK9可能通过THP-1源性巨噬细胞TLR4/NF-κB/COX-2/ROS途径调节LOX-1介导的ox-LDL摄取.

目的:观察香豆素曼尼希碱衍生物LZJ17对单胺氧化酶B(monoamine oxidase B,MAO-B)和神经炎症的抑制活性,以及对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠的神经保护作用.方法:用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激BV2细胞,观察培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)的释放量,以评估LZJ17对神经炎症的影响,并在体外实验中检测LZJ17对MAO-B活性的抑制作用.然后在MPTP诱发的亚急性帕金森病小鼠模型中通过运动行为学测试、免疫组化及Western Blot实验观察LZJ17的神经保护作用.结果:在体外研究中,LZJ17表现出较好的抑制MAO-B和神经炎症的活性.在MPTP小鼠亚急性帕金森病模型中,LZJ17可明显提高小鼠的掉落潜伏期和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元的数目.同时LZJ17也可明显抑制小鼠脑内MAO-B的活性并减少炎症蛋白iNOS和COX-2的表达.结论:LZJ17能够明显改善MPTP诱导的运动障碍,保护TH阳性神经元,机制研究显示LZJ17这种保护作用与其同时抑制MAO-B活性和神经炎症有关.