目的:探讨床旁即时血培养在儿童重症监护病房(PICU)血流感染患儿抗生素调整中的价值。方法:回顾性分析2017年5月至2021年3月河南省儿童医院PICU血流感染患儿，根据不同的血培养方式分为实验室血培养(LBC)组和卫星血培养(SBC)组，比较两组在标本接收时间、阳性报警时间、获得微生物结果时间、抗生素调整时间的差异。结果:2 718例患儿共完成3 720次血培养，其中LBC组1 888次，阳性率为3.5%；SBC组1 832次，阳性率为4.9%；SBC组阳性率高于LBC组，差异有统计学意义( χ2＝3.954， P＝0.046)。LBC组和SBC组血培养阳性患儿在年龄、性别、感染部位、出院后28 d存活率、小儿危重病例评分、小儿死亡风险评分Ⅲ方面差异均无统计学意义( P>0.05)。SBC组患儿在标本接收时间、获得微生物结果时间、抗生素调整时间明显短于LBC组[0.33(0.03，1.78)h比3.38(1.38，7.29)h、(57.40±21.92)h比(68.14±21.26)h、(52.53±27.23)h比(66.41±28.57)h，均 P<0.05]。 结论:床旁即时血培养缩短了血液标本从培养到最终结果报告的时间，提高了血培养阳性率，为重症患儿抗生素精准治疗争取了时间。

目的:研究钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响,探索损伤修复的机制.方法:取7周龄雄性SD大鼠24只,分为4组,每组6只:安静对照组(C组);力竭运动即刻组(E0组);力竭运动后24 h组(E24组);力竭运动后48 h组(E48组).另取18只SD大鼠,分为3组,每组6只:钝挫伤即刻组(Do组);钝挫伤后24 h组(D24组);钝挫伤后48 h组(D48组).各组分别于安静状态、力竭运动后和钝挫伤后不同时间点,宰杀取血,分离血清.并取下右侧腓肠肌,将腓肠肌分为二份,一份立即进行细胞培养实验,另一份和血清一起在-80℃冰箱保存,用ELISA法检测Pax7、CBF1、DAPT的含量变化.另取新生3日龄鼠3只,宰杀后同样取右侧腓肠肌进行细胞培养实验.结果:(1)体外培养结果显示:新生鼠1天后即可见到梭形卫星细胞,其它各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第3天、第5天时各组开始大量增殖梭形细胞,且一直保持增殖良好并传代,第7天仍有较好的长势,且出现部分融合和微管.各组比较显示,安静对照组未见卫星细胞增殖;新生鼠卫星细胞数量最高,增殖速度也最快;而钝挫伤组的肌卫星细胞数量及增殖速度显著高于力竭运动组.(2)ELISA结果显示:力竭运动组和钝挫伤组各组骨骼肌、血清中CBF1和Pax7的含量与安静对照组相比均显著上调(P＜0.05),其中D0组的CBF1含量差异极显著(P＜0.01),明显高于其他各组(P＜0.05);D24、D48两组的Pax7含量亦明显高于其他各组(P＜0.05).而DAPT在各组骨骼肌、血清中的含量与安静对照组相比均显著下调(P＜0.05),其中D0组DAPT差异极显著(P＜0.01)且明显低于其他各组(P＜0.05).但力竭运动各组(E0、E24、E48)之间无显著性差异.结论:(1)钝挫伤及力竭运动可使肌卫星细胞激活、增殖分化,并且钝挫伤导致的肌卫星细胞的激活数量明显高于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致.(2)钝挫伤和力竭运动可以使大鼠骨骼肌和血清Pax7和CBF1的含量上升,但下调DAPT的含量.Pax7和CBF1可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起着正向调节的作用,而DAPT可能起着负向调节作用.

为了获得巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,本研究采集出生1日龄巴什拜羔羊后肢骨骼肌组织,采用两步酶消化法结合差速贴壁法分离纯化巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,并对分离获得的骨骼肌卫星细胞进行了鉴定、传代培养及诱导分化等研究.结果表明,本研究采用的分离纯化方法可以高效获得巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,RT-PCR检测结果表明骨骼肌卫星细胞标志性基因pax7、Myf5、MyoD、des min和c-et均呈阳性表达.获得的骨骼肌卫星细胞具有较强的增殖能力,连续传代12代,细胞的形态仍保持正常,且细胞的克隆形成率仍保持在50％以上,但是当细胞传代至第18代时,逐渐表现出较为明显的衰退.细胞的生长符合典型的“S”型生长曲线,且第2代和第8代细胞的生长曲线没有明显的差异,至第14代时细胞的增殖速度逐渐降低.采用低浓度马血清培养体系,可成功诱导巴什拜羊骨骼肌卫星细胞向肌管方向分化,诱导培养至第5天时,骨骼肌卫星细胞分化标志基因MyHC呈阳性表达.由此得出结论,本研究采用的骨骼肌卫星细胞分离纯化体系高效、可靠,可以满足较高纯度巴什拜羊骨骼肌卫星细胞的分离培养.

背景:自噬可促进低氧环境下肌卫星细胞的存活,然而基于自噬有明显的时效性,不同时间的自噬水平与肌卫星细胞增殖能力间的关系如何未见探讨.目的:探讨不同时间去血清饥饿对大鼠肌卫星细胞增殖能力及自噬微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的变化.方法:原代分离培养雄性SD大鼠(广州中医药大学动物实验中心提供,体质量约120 9)多裂肌卫星细胞,取第3代细胞,培养至对数生长期后,分别设置正常血清组(体积分数10％胎牛血清)、空白血清(仅含培养基,无胎牛血清)6h组、空白血清12h组、空白血清24 h组,CCK-8检测各组细胞的增殖情况,并采用Western-blot法和RT-PCR法检测LC3及Beclin1蛋白及基因的表达.结果 与结论:①细胞增殖能力:空白血清诱导12h后细胞增殖能力较正常血清组及诱导6h时下降(P＜0.01),诱导24 h后细胞增殖能力较诱导12 h下降(P＜0.05);②LC3及Beclin1蛋白及基因的表达:空白血清诱导6h后,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ及Beclin1蛋白及基因的表达较正常血清组明显升高(P＜0.05),诱导12h及诱导24h后LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白表达较诱导6h时明显升高(P＜0.01),Beclin1的表达较诱导6h时升高(P＜0.05),LC3及Beclin1基因的表达较6h均升高(P＜0.05);③结果证实,去血清饥饿可以诱导肌卫星细胞发生自噬,自噬在去血清早期(12h内)可保护细胞的增殖能力,12h后细胞可出现过度自噬,不利于细胞的增殖.

目的 观察电针“委中”大鼠血清对大鼠腰多裂肌卫星细胞成肌分化因子MyoD、周期蛋白CDK4、P57和CyclinD表达的影响,从细胞周期角度分析电针“委中”血清促进损伤多裂肌再生修复的起效机制.方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针“委中”组,每组8只.通过肌肉注射0.5％布比卡因制备多裂肌损伤模型,电针组选取“委中”穴进行电针治疗,每日1次,每次20 min,第4日收集血清.培养原代大鼠腰多裂肌卫星细胞,随机分为空白血清组、模型血清组、电针“委中”血清组、抑制剂血清组(电针“委中”血清中加PI3K抑制剂LY294002),以对应血清分别培养1d,免疫印迹法检测肌卫星细胞MyoD、CDK4、P57和CyclinD蛋白表达.结果 造模后,各血清组MyoD、CDK4和P57表达水平均显著升高(P＜0.01);与模型血清组对比,电针“委中”血清组MyoD、CDK4升高(P＜ 0.05或P＜0.01)而P57显著降低(P＜0.01);与电针“委中”血清组对比,加入LY294002抑制剂后MyoD、CDK4降低(P＜ 0.05或P＜ 0.01)而P57显著升高(P＜0.01).与空白血清组对比,电针“委中”血清组CyclinD升高(P＜0.05),其他各组对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 电针“委中”血清可通过上调MyoD、CDK4的表达,并下调P57的表达,加速肌卫星细胞增殖的周期性进程,促进损伤多裂肌的良性修复.

目的:观察电针血清对饥饿条件下肌卫星细胞成肌分化抗原(Myod)及自噬相关蛋白Beclin 1表达的影响,探讨电针调控肌卫星细胞增殖及自噬的机制.方法:电针"委中"穴7d后获取并制备不同浓度电针血清.分别以不同浓度(10％、20％、30％)的电针血清及10％胎牛血清对体外培养的原代肌卫星细胞干预12 h及24 h,CCK-8法检测各组细胞不同时间点的增殖情况,确定促进细胞增殖的最佳血清浓度.以无血清培养基培养原代肌卫星细胞12 h后,将细胞随机分为无血清组、10％胎牛血清组、最佳浓度电针血清组,分别加入相应浓度的血清.Western blot法检测不同血清干预12 h和24 h后原代肌卫星细胞中细胞增殖蛋白Myod及自噬蛋白Beclin 1的表达水平.结果:10％电针血清、20％电针血清、30％电针血清干预24 h后,肌卫星细胞增殖能力均优于10％胎牛血清(P<0.01),但3个浓度电针血清之间的肌卫星细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),故取10％电针血清作为最佳浓度.Western blot结果显示:血清干预12 h后,无血清组肌卫星细胞中Myod及Beclin 1表达水平与干预前比较差异无统计学意义(P>0.05),10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod表达水平较干预前升高(P<0.05)、Beclin 1表达水平较干预前降低(P<0.05);与同时点无血清组比较,10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod表达水平升高(P<0.05)、Beclin 1表达水平降低(P<0.01).血清干预24 h后,无血清组Myod及Beclin 1表达水平较12 h时明显降低(P<0.01),10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod表达水平较12 h时升高(P<0.05)、Beclin 1表达水平较12 h时降低(P<0.05);与同时点无血清组比较,10％胎牛血清组、10％电针血清组Myod及Beclin 1表达水平均升高(P<0.01,P<0.05).结论:饥饿条件下电针血清可改善肌卫星细胞的营养不良环境,抑制其凋亡趋势,促进肌卫星细胞增殖,这种作用可能是通过改善细胞的过度自噬实现的.

目的:观察电针血清调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路对肌卫星细胞自噬的影响.方法:原代培养多裂肌卫星细胞,选择传至第3代的肌卫星细胞,按本课题组前期的实验方法获取电针血清,先以空白血清(无血清,仅含培养基)干预细胞12h诱导肌卫星细胞自噬,后将各组细胞随机分为空白血清组、10％电针血清组、10％电针血清+LY294002组、3-MA组,各组分别干预12、24h后,采用CCK-8检测各组细胞的增殖能力,Western blot检测各组细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Beclin1、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Pax7蛋白的表达变化.结果:CCK-8结果显示,培养12h时,10％电针血清组细胞增殖能力优于其余3组(P＜0.05),培养24h时,10％电针血清组细胞增殖能力优于其余3组及12h时电针血清组(P＜0.01,P＜0.05),10％电针血清+LY294002组和3-MA组优于空白血清组(P＜0.01).Western blot结果显示:12h后,与空白血清组、10％电针血清+LY294002组比较,10％电针血清组和3-MA组p-Akt、Pax7蛋白表达显著升高(P＜0.01,P＜0.05),Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).24h后,与空白血清组、10％电针血清+LY294002组比较,10％电针血清组和3-MA组p-Akt蛋白表达显著升高(P＜0.01),Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P＜0.01),10％电针血清组Pax7蛋白表达显著升高(P＜0.01);3-MA组Pax7蛋白表达显著高于空白血清组(P＜0.01).与12h时本组比较,空白血清组Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达均显著升高(P＜0.01),Pax7蛋白表达显著降低(P＜0.01),10％电针血清组Pax7蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论:电针血清可改善肌卫星细胞的过度自噬,保护肌卫星细胞的增殖,该作用可能与激活PI3K/Akt通路有关.

目的 观察电针“委中”穴后的血清对大鼠腰多裂肌卫星细胞增殖、胶原蛋白Ⅰ (Collagen Ⅰ)、基质金属蛋白酶2(MMP2)表达的影响,从血清学角度探讨电针“委中”穴促进多裂肌损伤后修复的部分作用机制.方法 25只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组,每组8只.腰4-5节段多裂肌注射0.5％的布比卡因建立多裂肌损伤模型.选取双侧“委中”穴进行电针治疗(20 min/次,1次/日,2/100 HZ,1-2 mA,共3次);正常组、模型组不予电针干预,第4d收集各组大鼠血清,制备无菌针刺血清.使用各组针刺血清培养原代MSCs,CCK-8检测MSCs增殖情况;WB检测Collagen Ⅰ、MMP2蛋白表达情况.结果 与正常血清组比较,模型血清组MSCs增殖速度加快(P＜0.01),Collagen Ⅰ、MMP2含量升高(P＜ 0.01,P＜0.05);与模型血清组比较,电针血清组MSCs增殖速度加快(P＜0.01),Collagen Ⅰ含量明显降低(P＜0.01),MMP2含量明显升高(P＜0.01).结论 电针“委中”后血清可能通过良性调节细胞外基质中Collagen Ⅰ、MMP2的表达促进MSCs增殖,加快受损多裂肌的再生修复过程.

背景:肢体缺血性损伤主要是由外周动脉疾病引起的,外科治疗可以恢复肢体的血液供应,但缺血再灌注仍然会加重组织损伤,减少氧化应激和促进受损骨骼肌再生可能有利于缺血肢体的治疗.目的:探讨原花青素对缺血缺氧状态下骨骼肌卫星细胞增殖和分化能力的影响.方法:购买原代培养骨骼肌卫星细胞,取第2代细胞进行实验.以生理盐水组为对照组、2.5 mg/L或5 mg/L的原花青素作为实验组,将各组细胞置于低氧(体积分数1％的O2)、低血清(体积分数1％的胎牛血清)环境中培养,于不同时间点观察细胞.在第1,2,3,4天应用CCK8法检测细胞增殖情况;于第1天收集细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期;提取细胞总蛋白,应用免疫印迹法检测增殖相关蛋白、细胞肌原性标志基因及通路相关蛋白的表达,并用共聚焦显微镜观察肌管形态.为进一步明确P38-MAPK信号通路在其间的作用,分别设置4组,分别为生理盐水组(对照组)、原花青素组、生理盐水+P38-MAPK通路抑制剂组、原花青素+P38-MAPK通路抑制剂组,观察各组细胞肌原性标志基因及相关通路蛋白表达情况.动物实验方案经西南医科大学动物实验伦理委员会批准,对小鼠行后肢缺血造模后,随机分为对照组和实验组(n=12),分别腹腔注射无菌注射用水及20 mg/kg原花青素,取干预7 d后小鼠的腓肠肌,苏木精-伊红染色法观察小鼠肌肉再生情况.结果与结论:(1)细胞实验结果:①缺血缺氧第1,2,3,4天,不同质量浓度原花青素组增殖能力均明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);②缺血缺氧第1天,不同质量浓度原花青素组增殖细胞核抗原蛋白表达水平均明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);③缺血缺氧第1天,不同质量浓度原花青素组S期细胞数目均明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);④缺血缺氧第3,5天,不同质量浓度原花青素组肌原性标志基因表达与肌管的形成均明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);以上指标不同质量浓度原花青素组间相比,差异均无显著性意义(P>0.05);⑤缺血缺氧第3天,原花青素组p-P38-MAPK信号通路蛋白的表达明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);生理盐水+P38-MAPK通路抑制剂组与原花青素+P38-MAPK通路抑制剂组间对比差异无显著性意义(P>0.05);(2)动物实验结果:小鼠下肢缺血第7天,原花青素组缺血腓肠肌每横断面积内中央核纤维/总肌纤维明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);(3)提示原花青素可促进缺血缺氧状态骨骼肌卫星细胞增殖,同时通过激活P38-MAPK信号通路诱导骨骼肌卫星细胞分化、肌原性标志基因表达和肌管形成,从而促进缺血损伤骨骼肌再生,修复受损肌纤维,发挥重要的保护作用.