肺吸虫病是由并殖吸虫感染引起的世界性食源性传染病，中国肺吸虫病的病原体有斯氏并殖吸虫和卫氏并殖吸虫。嗜酸性粒细胞(EOS)升高和含EOS的肺吸虫病"积分诊断量表"对诊断斯氏并殖吸虫感染具有重要价值，而对诊断卫氏并殖吸虫感染的价值有待证实。斯氏并殖吸虫在人体以童虫形式存在，不能采用寻找虫卵的诊断方法。并殖吸虫抗原皮试和(或)抗体检测对病原学诊断具有重要价值。

肺吸虫病是由卫氏并殖吸虫引起的一种食源性人兽共患疾病;90％的病例发生在亚洲地区,患病数约为2 000万例[1].肺吸虫引起的胸腔积液临床表现和影像学无特异性,往往难以与结核性胸腔积液或恶性胸腔积液区分,尤其在肺结核流行的人群中,诊断延误或误诊较多.现报告本院1例该病的临床诊断过程,以期为今后的临床实践提供一些参考.

2022年于卫氏并殖吸虫流行区湖北兴山县和保康县分别采集34只和27只溪蟹,捣碎后用NaOH消化法提取DNA.根据卫氏并殖吸虫5.8S核糖体RNA序列,使用Primer Explorer V5软件设计卫氏并殖吸虫环介导等温扩增(LAMP)特异引物,建立卫氏并殖吸虫LAMP检测方法,评价该方法的特异性、灵敏度、扩增效率及现场应用效果,并与沉淀镜检法比较.结果显示,建立的LAMP检出限可达1个卫氏并殖吸虫囊蚴,且与日本血吸虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫、肝毛细线虫、钩虫等虫种无交叉反应.检测4份卫氏并殖吸虫囊蚴DNA样品,出现浊度时间(Tt值)和浊度速率峰值(Df)均值为29.0 min和0.237.LAMP检出兴山和保康县卫氏并殖吸虫阳性溪蟹分别为24只和0只,阳性率分别为70.6％(24/34)和0(0/27);沉淀镜检法检出囊蚴阳性溪蟹分别为23只和0只,阳性率分别为67.6％(23/34)和0(0/27),两种方法结果差异无统计学意义(x2=0.2,P＞0.05).建立的卫氏并殖吸虫LAMP检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可用于淡水蟹卫氏并殖吸虫流行区现场调查或筛查.

目的 建立一种灵敏、特异的基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-规则成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的日本血吸虫核酸检测方法.方法 以日本血吸虫SjR2基因片段作为靶序列,设计LAMP引物、gRNA和ssDNA探针,建立并优化LAMP-CRISPR反应体系.用LAMP-CRISPR方法检测含有SjR2靶序列的10倍梯度稀释的重组质粒,不同发育阶段日本血吸虫基因组DNA,以及肝片形吸虫、曼氏血吸虫、肥胖带绦虫、华支睾吸虫、似蚓蛔线虫、美洲钩口线虫、卫氏并殖吸虫、细粒棘球绦虫等蠕虫基因组DNA,评价其灵敏度和特异度.用LAMP-CRISPR方法分别检测15份血吸虫感染的阳性钉螺样本以及30份未感染的阴性钉螺样本,并与LAMP检测结果比较,以评价LAMP-CRISPR方法用于筛查感染性钉螺的应用效果.结果 建立的基于LAMP-CRISPR的核酸检测方法可特异性扩增并检测出日本血吸虫目的基因片段.其最适反应温度为37℃,反应体系中gRNA的最佳反应浓度为40 nmol/L,Cas12a蛋白的最佳反应浓度为40 nmol/L.该方法与肝片形吸虫等蠕虫基因组DNA均无交叉反应;以 10 倍梯度稀释的重组质粒为模板,该方法检测限为10拷贝/μL;此外,该方法能够准确检测出日本血吸虫虫卵、毛蚴、胞蚴、尾蚴、童虫及成虫基因组DNA.45份钉螺样本检测结果显示,LAMP-CRISPR与LAMP检测感染性钉螺的结果差异无统计学意义(χ2=0.05,P>0.05);与金标准比较,LAMP-CRISPR方法的灵敏度为100.00%(15/15),特异度为96.67%(29/30),LAMP方法的灵敏度为100.00%(15/15),特异度为93.33%(28/30).结论 本研究建立了一种灵敏性和特异性均较高的基于LAMP-CRISPR的日本血吸虫核酸检测方法,具有用于日本血吸虫感染快速检测及风险监测的潜力.

目的 建立高效的疟原虫种属特异性检测方法. 方法 设计疟原虫种(核糖体18S rRNA,4对)和属(线粒体基因,1对)特异性引物,与通用引物(5'-CGAGTCCTGCGGTCTCAAATT-3')连接后,形成5对嵌合特异性引物.常规PCR确定各对引物的最佳退火温度和引物浓度,多重PCR优化5对引物混合后的最佳反应条件,建立反应体系(命名为P5-mPCR方法).用P5-mPCR检测不同原虫密度的间日疟原虫(Rv)、三日疟原虫(Pm)、卵形疟原虫(Po)、恶性疟原虫(Pf)感染者血样和模拟混合感染样品,确定P5-mPCR方法的检测灵敏度.用日本血吸虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫、猪囊尾蚴、卫氏并殖吸虫、隐孢子虫等其他寄生虫感染者血样或虫体DNA评价P5-mPCR方法的特异性.用212份疟疾送检血样,与巢式PCR方法比较评价其应用价值. 结果 优化后的P5-mPCR反应体系各组分含量(体积比)为:DNA模板10％、引物Mix 5％、ddH2035％,Taq酶预混液50％.反应体系的最佳循环条件为:95℃ 5 min;94℃15 s,58℃20 s,72℃20 s,循环5次;94℃15s,62℃20 s,72℃20 s,循环10次;94℃15s,68℃20 s,72 ℃C 20 s,循环25次;72℃3 min;10℃5 min.扩增产物的长度分别为:Rv 778 bp,Pm 582 bp,Po 400 bp,Pf256 bp,疟原虫属334 bp.其检测灵敏度分别为4.49、5.45、6.39、4.07个虫/μl血(种特异性检测平均值为4.85个虫/μl血)和0.10～ 1.07个虫/μl血(属特异性检测的平均值为0.41个虫/μl血). P5-mPCR检测含有50～ 200个虫/μl血的模拟混合样品,各特异性扩增条带均清晰可见;检测日本血吸虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫、猪囊尾蚴、卫氏并殖吸虫、隐孢子虫等其他寄生虫样品,结果均为阴性.巢式PCR和P5-mPCR检测212份疟疾送检血样,两种方法检测结果的一致性较高(Kappa=0.866,P＜0.01),检出的阳性率分别为75.0％ (159/212)和79.7％ (169/212),差异具有统计学意义(x2=8.100,P＜0.01).从分型诊断来看,两者的差异主要来源于Pf(P＜0.01)和Po(P＜0.05)样品,对Pv、Pm和混合感染血样的检测结果,两种方法差异无统计学意义. 结论 建立的P5-mPCR方法具有敏感性高,特异性好,操作简便快速,检测结果易于判断,一次反应即可确定4种人体疟原虫.

目的 分析2014-2017年上海市临床医院送检样品寄生虫检测结果,为寄生虫病预防和控制提供基线资料. 方法 收集与中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所签约的上海市相关医疗机构(二甲医院7所、三甲医院28所、涉外医院6所)送检的样品包括全血、血清、粪便、痰液、尿液、体液(胸水、腹水)和组织病理切片、虫体等,以及病例相关信息.采用直接涂片法、改良抗酸染色法、ELISA和分子生物学等方法检测送检样品寄生虫感染情况. 结果 2014-2017年共检测送检样品25 549份.其中,病原学检测8 877份,检出寄生虫感染阳性633份,阳性检出率为7.1％,包括了33种寄生虫,其中检出率最高的为人芽囊原虫(331/8 877,3.7％),其次为溶组织内阿米巴(120/8 877,1.4％).血清学检测16 672份,血清标本阳性1 881份(占10.9％),其中猪囊尾蚴抗体阳性424份(占23.4％),曼氏裂头蚴抗体阳性388份(占21.4％),日本血吸虫抗体阳性289份(占16.0％)、卫氏并殖吸虫抗体阳性267份(占14.7％),刚地弓形虫抗体阳性260份(占14.4％).原虫感染共371例,主要来源地区为上海(125例);蠕虫感染共87例,主要来源地区为上海(29例). 结论 2014-2017年上海临床医院送检样品中,病原学检测阳性虫种主要是人芽囊原虫和溶组织内阿米巴,血清抗体阳性虫种主要为猪囊尾蚴和曼氏裂头蚴.

目的 分析卫氏并殖吸虫病肺内及肺外临床表现及影像学特征.方法 收集经实验室和临床确诊的30例卫氏并殖吸虫感染病例资料,回顾性分析卫氏并殖吸虫病患者临床及影像学特征.结果 卫氏并殖吸虫病患者肺内症状以胸闷、发热、胸痛、咳嗽、咳痰、呼吸困难为主,肺外表现有腹痛、呕吐、腹泻、纳差、消瘦、双下肢乏力、头痛、头昏、癫痫样发作、皮下游走性包块等.30例卫氏并殖吸虫病患者血清或胸腔积液嗜酸性粒细胞计数增加.患者胸部CT异常主要有结节、磨玻璃样变、虫蚀样变、胸腔积液、"隧道"征、"月晕"征等,头颅CT和MRI可见颅内出血灶及大范围"指套样"水肿,腹部CT呈肝脾包膜下蛇纹石样变、"隧道"征样变.结论 卫氏并殖吸虫病以多器官系统受累为特征;CT及MRI示"隧道"征、蛇纹石样变系由卫氏并殖吸虫在颅内、肺内、肝脾内迁移游走形成,是本病的重要影像学征象.

肺吸虫病是一种自然疫源性的人畜共患病,由卫氏肺吸虫、四川并殖吸虫等寄生人体所致,传染性强,误诊率高,主要由生食或半生食含有肺吸虫囊蚴的蟹或喇蛄所致.本文患者有生吃醉蟹的习惯,由此并发肺吸虫病.此病少见,容易误诊误治,现将该病例报告如下,期望对以后的临床诊治提供帮助.

目的 以卫氏并殖吸虫囊蚴感染适宜和非适宜宿主,观察感染后的抗体动态变化情况.方法 从安徽省休宁县采集溪蟹捣碎并收集囊蚴,以卫氏并殖吸虫囊蚴感染适宜宿主犬和非适宜宿主大鼠,收集感染后0～16周血清;以卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原为探针,建立ELISA方法检测不同宿主感染后的血清抗体.结果 检测卫氏并殖吸虫囊蚴感染动物的血清,均有抗体出现.其中感染犬3周可检测抗体阳性,抗体水平达高峰的时间最早为5周;感染大鼠1周检出抗体阳性,2～3周抗体水平达到高峰,至8周时抗体水平降低并维持在平衡状态.结论 不同宿主感染卫氏并殖吸虫囊蚴后抗体变化有区别,在非适宜宿主体内短期抗体水平下降较快且维持在弱阳性水平.