目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制.方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida 3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只.以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 POI 的标志物骨形态发生蛋白 15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平.通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型.结果:①造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E2水平降低,表明模型构建成功.②相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P＜0.05).③与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P＜0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P＜0.05).@pZP3组体内Treg细胞数量降低(P＜0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P＜0.000 1).pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P＜0.05).⑤pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P＜0.000 1),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P＜0.000 1).测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调.结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,hUC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用.

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-223-3p靶向叉头框转录因子1(FoxO1)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常乳腺细胞HBL-100(购自中国医学科学院细胞库)和乳腺癌细胞MCF-7(购自中国科学院细胞库)细胞中miR-223-3p的表达；采用脂质体转染miR-223-3p模拟物、抑制剂和对照质粒于MCF-7细胞。采用荧光定量PCR检测转染miR-223-3p模拟物、抑制剂和对照质粒的细胞中miR-223-3p表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞细胞增殖。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)法检测不同处理的细胞凋亡率。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-223-3p的靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-223-3p靶基因蛋白质表达。组间数据比较采用 t检验。 结果:与正常乳腺细胞miR-223-3p表达水平(1.09±0.14)比较，乳腺癌MCF-7细胞mRNA-223-3p表达水平(2.37±0.19)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.281， P<0.05)。转染72 h，转染miR-223-3p模拟物的细胞miR-223-3p表达水平(2.89±0.20)较转染对照质粒的细胞(0.97±0.19)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.619， P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞miR-223-3p表达水平(0.33±0.12)较转染对照质粒的细胞(0.97±0.19)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.111， P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞增殖能力(1.09±0.20)较转染对照质粒的细胞增殖能力(1.94±0.27)明显下降，差异有统计学意义( t＝2.891， P<0.05)。转染miR-223-3p抑制剂的细胞凋亡率[(32.69±5.81)%]较转染对照质粒的细胞凋亡率[(5.04±1.47)%]明显增加，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。FoxO1是miR-223-3p的靶基因。转染miR-223-3p抑制剂的细胞FoxO1蛋白表达水平(2.60±0.22)较转染对照质粒的细胞(0.58±0.19)明显升高，差异有统计学意义( t＝3.185， P<0.05)。 结论:miR-223通过靶向FoxO1蛋白调控着乳腺癌细胞的增殖和凋亡。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-96通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)促进肺癌细胞增殖和迁移的作用。方法:应用茎环反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-96在肺癌细胞株中的表达；干扰慢病毒感染抑制miR-96表达后，分别利用细胞增殖试验(CCK-8)和划痕试验检测其对肺癌细胞增殖和迁移的影响；蛋白质印迹法(Western blot)和双荧光素酶活性试验验证miR-96靶基因FOXO1。应用GraphPad Prism 5统计学软件进行分析，计量资料比较采用 t检验。 结果:CCK-8实验显示抑制H1299细胞miR-96表达后，实验组24、48、72 h吸光度值分别为1.293±0.019、1.684±0.038、2.180±0.034，明显低于对照组的1.655±0.056、1.880±0.020、2.493±0.060，差异有统计学意义( t＝5.646、4.426、14.670， P<0.01)；划痕试验显示对照组4 h和10 h细胞迁移率为(29.21±3.96)%、(47.49±3.33)%，明显高于实验组[(5.80±2.94)%、(13.63±3.18)%]，差异有统计学意义( t＝4.748、7.352， P<0.01)；筛选miR-96靶基因FOXO1，将miR-96过表达后，肺癌细胞FOXO1表达明显降低；反之，抑制miR-96表达后，FOXO1表达明显增高。荧光素酶活性试验显示miR-96和FOXO1 3’非翻译区(3’UTR)野生型质粒共转染后，野生型为(22.5±7.6)%，与对照组的(97.2±13.2)%及突变型的(115.6±13.5)%比较，荧火虫/海肾荧光素酶比值明显降低( t＝14.750、12.040， P值均<0.01)。 结论:miR-96通过靶向调控FOXO1促进肺癌细胞增殖和迁移。

目的:探讨白藜芦醇（RES）对IL-1β诱导的软骨细胞的影响及其作用通路。方法:提取Wistar乳鼠软骨细胞，实验分为5组：对照组，IL-1β组，RES+IL-1β组，RES+IL-1β+EX-527[沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂]组，RES+IL-1β+AS[叉头框转录因子O1（FOXO1）抑制剂]组。采用实时荧光定量（qRT）-PCR检测SIRT1、FOXO1和MMP-3 mRNA表达量。免疫荧光技术检测软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白（Col-Ⅱ）的蛋白表达，蛋白质免疫印迹技术检测软骨细胞SIRT1，p-FOXO1/FOXO1的蛋白表达。ELISA检测软骨细胞炎性因子IL-6和TNF-α分泌量。计量资料多组间比较行单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t法。以 P<0.05差异具有统计学意义。 结果:与正常软骨细胞相比，IL-1β诱导的软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显降低，细胞TNF-α[（24.70±2.84）， t=19.24， P<0.001]和IL-6的分泌量[（3.35±0.28）， t=12.97， P<0.001]明显升高、MMP-3的mRNA表达[（2.46±0.23）， t=12.61， P<0.001]明显升高。RES作用于IL-1β诱导软骨细胞后，Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显升高（ P<0.001），细胞TNF-α[（12.60±1.05）， t= 10.14， P<0.001]和IL-6[（2.00±0.15）， t=9.89， P<0.001]的分泌量明显降低，MMP-3的mRNA表达[（1.30±0.14）， t=10.46， P<0.001]明显降低。加入SIRT1抑制剂EX-527或FOXO1抑制剂AS后，RES对IL-1β诱导软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达的促进作用明显降低（ P<0.05），对TNF-α和IL-6的分泌量抑制作用明显下降（ P<0.001），对MMP-3的mRNA表达抑制作用明显下降（ P<0.05）。 结论:RES通过SIRT1/FOXO1通路可明显改善IL-1β诱导的软骨细胞外基质降解和炎症反应。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）CTA-796E4.4在膀胱癌组织和细胞株中的表达，并观察其对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）法检测湖北省天门市第一人民医院2016年11月至2019年1月手术切除标本73例膀胱癌组织及癌旁组织、4种膀胱癌细胞株（UM-UC-3、BIU-87、5637、T24）及正常膀胱上皮细胞中CTA-796E4.4的表达。以携带CTA-796E4.4基因的重组慢病毒（LV-CTA-796E4.4）感染UM-UC-3细胞作为实验组，以阴性对照慢病毒（LV-NC）感染UM-UC-3细胞为对照组。采用qPCR法检测过表达CTA-796E4.4对叉头框转录因子O1（FOXO1）基因mRNA表达的影响，通过Western blotting检测FOXO1蛋白的表达，分别以噻唑蓝（MTT）法、Transwell侵袭实验检测高表达CTA-796E4.4对UM-UC-3细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:CTA-796E4.4在膀胱癌组织中的表达水平低于癌旁组织（1.22 ± 0.33比4.30 ± 0.64），差异有统计学意义（ P<0.01）。CTA-796E4.4在膀胱癌细胞株（UM-UC-3、BIU-87、5637、T24）中的表达均低于膀胱上皮细胞（0.11 ± 0.03、0.61 ± 0.03、0.33 ± 0.03、0.73 ± 0.04比1.01 ± 0.10）（ P<0.01）。LV-CTA-796E4.4感染细胞后，CTA-796E4.4表达量显著增加（ P<0.01），FOXO1基因表达升高（ P<0.01）。高表达CTA-796E4.4能明显抑制细胞增殖能力和侵袭能力（ P<0.05）。 结论:lncRNA CTA-796E4.4在膀胱癌及细胞株中表达降低，高表达CTA-796E4.4可抑制UM-UC-3细胞的增殖和侵袭，其分子机制可能是上调CTA-796E4.4促进FOXO1基因的表达。

目的:探讨卵泡液中叉头框转录因子O亚族1（Forkhead box transcription factor O1，FoxO1）mRNA、天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）mRNA、生长分化因子-9（growth differentiation factor-9，GDF-9）水平与优质胚胎数的相关性及其预测不孕患者体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）临床妊娠的效能。 方法:选取2017年2月至2020年1月期间驻马店市中心医院收治的468例接受IVF-ET治疗的不孕患者进行病例对照研究，根据是否妊娠分为妊娠组（ n=248）、未妊娠组（ n=220），比较两组一般资料、取卵日性激素水平、卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平。采用Pearson分析卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9之间及其与优质胚胎数的相关性，采用logistic回归方程分析IVF-ET临床妊娠的相关因素并以受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9预测临床妊娠的效能。 结果:妊娠组优质胚胎数多于未妊娠组［（2.59±0.68）枚比（1.78±0.62）枚， P<0.001］，基础卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）水平、基础黄体生成素（luteinizing hormone，LH）水平低于未妊娠组［（7.16±0.29）U/L比（6.21±0.34）U/L，（8.72±1.24）U/L比（10.65±1.01）U/L，均 P<0.001］，取卵日雌二醇高于未妊娠组［（848.18±50.68）ng/L比（605.35±46.79）ng/L， P<0.001］。妊娠组 FoxO1 mRNA、GDF-9水平高于未妊娠组， Caspase-3 mRNA水平低于未妊娠组（均 P<0.001）； FoxO1 mRNA与 Caspase-3 mRNA呈负相关，与GDF-9呈正相关（均 P<0.001）； Caspase-3 mRNA与GDF-9呈负相关（均 P<0.001）； FoxO1 mRNA、GDF-9与优质胚胎数呈正相关， Caspase-3 mRNA与优质胚胎数呈负相关（均 P<0.001）。多元线性回归分析显示，在排除混杂因素后， FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平与优质胚胎数相关（均 P<0.001）。以IVF-ET临床妊娠为因变量，纳入优质胚胎数、基础FSH、基础LH、取卵日雌二醇、 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9为自变量进行logistic回归方程分析，结果显示优质胚胎数、基础FSH、基础LH、取卵日雌二醇、 FoxO1 mRNA、 Caspase-3、GDF-9均与临床妊娠结局显著相关（均 P<0.001）。 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平联合预测IVF-ET临床妊娠的曲线下面积（area under curve，AUC）值为0.891，大于 FoxO1 mRNA指标单独检测（AUC=0.796， P=0.012）。 结论:FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平与胚胎发育及性激素水平有关，且 FoxO1 mRNA、GDF-9水平升高， Caspase-3 mRNA水平降低有利于临床妊娠，三者联合检测可为评价IVF-ET临床妊娠提供参考。

AMP活化蛋白激酶（AMPK）是一种广泛存在于真核细胞生物中且进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在调控细胞能量代谢方面，AMPK作为能量代谢激酶具有极其重要的作用。当机体处于低能量状态时，AMPK对细胞内腺嘌呤核苷酸水平的变化作出反应，与一磷酸腺苷（AMP）或二磷酸腺苷（ADP）结合后被激活。激活的AMPK可调控各种代谢过程，包括脂质、葡萄糖代谢和细胞自噬。AMPK可通过磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1（ULK1）和Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶-空泡分选蛋白34（PIK3C3-VPS34）复合物中的自噬相关蛋白直接促进细胞自噬；也可通过调节叉头框蛋白O3（FOXO3）、溶酶体功能的转录因子EB（TFEB）和溴结构域蛋白4（BRD4）等转录因子下游自噬相关基因的表达间接促进细胞自噬；还可调节线粒体自噬，诱导受损的线粒体分裂，促进自噬反应向受损线粒体转移。AMPK另一个功能是调控线粒体健康，可通过刺激线粒体生物发生参与并调控线粒体内稳态的各个方面。本综述讨论了AMPK信号通道作为细胞响应能量应激和调控线粒体的中心，对线粒体生物学和内环境稳态的重要调控作用，重点介绍了AMPK在调节细胞自噬和线粒体自噬过程中的关键作用，以及调控线粒体稳态的研究进展。

目的:探讨叉头框转录因子O1（FOXO1）表达与弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者临床病理特征和预后的相关性。方法:收集河北省人民医院2012年6月至2020年1月收治的42例初诊DLBCL患者资料。采用免疫组织化学法检测DLBCL组织中FOXO1、磷酸化FOXO1（p-FOXO1）的表达情况。回顾性分析FOXO1表达与DLBCL患者临床病理特征及预后的关系。结果:DLBCL组织中，FOXO1阳性率42.9%（18/42），p-FOXO1阳性率28.6%（12/42）。性别、年龄、Ann Arbor分期、免疫分型、美国东部肿瘤协助组评分、乳酸脱氢酶、国际预后指数、β 2微球蛋白（β 2-MG）、原发部位分层患者间FOXO1和p-FOXO1阳性率差异均无统计学意义（均 P>0.05）；无B症状患者FOXO1阳性率高于有B症状患者[53.6%（15/28）比21.4%（3/14），χ 2=3.938， P=0.047]，有无B症状患者间p-FOXO1阳性率差异无统计学意义（ P>0.05）。FOXO1阳性组2年总生存（OS）率高于阴性组（90.9%比66.7%），p-FOXO1阳性组2年OS率低于阴性组（50.0%比85.0%），但差异均无统计学意义（均 P>0.05）。在无B症状患者中，FOXO1阳性组2年OS率高于FOXO1阴性组（100.0%比50.0%，χ 2=5.486， P=0.019）。原发结内、β 2-MG升高、无B症状患者中p-FOXO1阴性组2年OS率均高于p-FOXO1阳性组（100.0%比50.0%，100.0%比25.0%，91.7%比33.3%），差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:FOXO1可能参与DLBCL的发生、发展，FOXO1阳性表达可能提示DLBCL患者预后良好，p-FOXO1阳性表达可能与预后不良有关。

目的:基于生物信息学方法，利用基因表达数据库（GEO）分析脓毒症相关长链非编码RNA（lncRNA）和mRNA表达谱，结合微小RNA（miRNA）数据库进行竞争性内源RNA（ceRNA）网络分析。方法:从GEO数据库下载脓毒症相关lncRNA数据集，使用生物信息分析工具对数据集进行基因表达差异分析，得到差异表达lncRNA（DElncRNA）和差异表达mRNA（DEmRNA），并绘制聚类热图。通过miRNA结合图谱数据库（miRcode）预测与DElncRNA结合的miRNA，并检索miRNA靶基因数据库TargetScan、miRDB和mirTarBase筛选出同时满足3个数据库的靶mRNA，比对后得到lncRNA-miRNA-mRNA相互作用关系，导入调控网络可视化软件CytoScape中得到ceRNA网络。将ceRNA网络中的DEmRNA导入基因与蛋白质相互作用检索数据库（STRING），绘制基因编码蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图。对DEmRNA进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果:在GEO数据库中通过检索、筛选获得两个脓毒症相关lncRNA芯片数据集，分别为GSE89376和GSE145227。差异分析显示，GSE89376数据集中老年脓毒症组有14个DElncRNA、359个DEmRNA，成人脓毒症组有8个DElncRNA、153个DEmRNA；GSE145227数据集中儿童脓毒症组有1 232个DElncRNA、1 224个DEmRNA。聚类热图显示，脓毒症组与对照组lncRNA和mRNA的表达存在明显差异；通过筛选的miRNA构建ceRNA网络，发现多个DElncRNA和DEmRNA参与了脓毒症的ceRNA网络。PPI网络图显示有多个基因编码蛋白相互作用，且分别与多个基因编码蛋白形成多节点的相互作用网络。在对相关基因进行功能注释及富集分析后发现，在核受体活性、配体激活的转录因子活性、类固醇激素受体活性等功能相关基因上可能存在串扰机制，并通过叉头框转录因子（FoxO）、Janus激酶/信号转导与转录激活因子（JAK/STAT）、p53、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）等信号通路发挥作用。结论:通过构建脓毒症相关lncRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络，结合通路分析发现，脓毒症中存在多个lncRNA和mRNA参与ceRNA网络，并在多个重要信号通路上发挥作用。

目的:分析慈苓化浊方对痛风大鼠滑膜组织中环氧化酶-2(COX-2)、热休克蛋白 70(HSP70)表达的影响.方法:选取 50 只 SPF级 SD大鼠,10 只大鼠作为对照组,另外 40 只建立痛风模型,将 30 只建模成功的大鼠分为模型组、药物对照组、慈苓化浊方组,每组 10 只.观察各组大鼠组织病理学、关节肿胀度、COX-2、HSP70 表达、炎症因子、磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3 K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头框转录因子 O 亚族 1(FoxO1)通路相关因子及其 mRNA表达量.结果:与对照组相比,模型组、药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、PI3 K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量升高,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量降低(均P<0.05).与模型组相比,药物对照组、慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3 K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05).与药物对照组相比,慈苓化浊方组关节肿胀度、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6、PI3 K mRNA、AKT mRNA、FoxO1 mRNA表达量降低,HSP70 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量升高(均P<0.05).结论:采用慈苓化浊方干预痛风大鼠,可降低大鼠关节肿胀程度,降低滑膜组织COX-2、HSP70 表达,抑制炎症反应,其作用机制可能与抑制PI3 K/AKT/FoxO1 通路有关.