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人脐带间充质干细胞通过GDF-15/FOXO3a治疗小鼠卵巢功能不全的研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制.方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida 3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只.以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 POI 的标志物骨形态发生蛋白 15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平.通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型.结果:①造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E2水平降低,表明模型构建成功.②相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P<0.05).③与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P<0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P>0.05).pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P<0.05).@pZP3组体内Treg细胞数量降低(P<0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P<0.000 1).pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P<0.05).⑤pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P<0.000 1),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P<0.000 1).测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调.结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,hUC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用.
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编辑人员丨6天前
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DNA甲基转移酶1和叉头蛋白转录因子O亚型3a在结肠癌中的表达关系研究
编辑人员丨6天前
目的:通过检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)和叉头蛋白转录因子O亚型(FOXO)3a在结肠癌患者血清中的水平,分析两者在结肠癌中的关系以及联合检测预测结肠癌发生的诊断效能。方法:选取2019年9月至2020年9月西安国际医学中心医院确诊并收治的结肠癌患者105例作为结肠癌组,65例同期经活检确诊的结肠息肉患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测患者血清中DNMT1、FOXO3a水平;Pearson相关分析结肠癌患者血清中DNMT1、FOXO3a的相关性;采用受试者工作特征曲线对DNMT1、FOXO3a水平在结肠癌中的诊断价值进行评估。结果:对照组与结肠癌组患者血清中DNMT1水平分别为0.93±0.28和1.34±0.35,与对照组相比,结肠癌组患者中DNMT1水平显著升高,差异具有统计学意义( t=7.990, P<0.001);两组患者血清中FOXO3a水平分别为1.04±0.39和0.69±0.18,与对照组相比,结肠癌组患者中FOXO3a水平降低,差异具有统计学意义( t=7.940, P<0.001)。DNMT1和FOXO3a的水平在结肠癌患者血清中呈负相关( r=-0.687, P<0.001)。DNMT1预测结肠癌发生的曲线下面积(AUC)为0.843,敏感性为71.40%,特异性为90.80%;FOXO3a预测结肠癌发生的AUC为0.812,敏感性为88.60%,特异性为67.70%;二者联合预测结肠癌发生的AUC为0.859,敏感性为89.50%,特异性为92.30%;与FOXO3a单独检测相比,二者联合检测对结肠癌的预测价值更高( Z=1.982, P=0.047)。 结论:结肠癌患者血清中DNMT1水平升高,FOXO3a水平则降低,二者在结肠癌患者血清中呈负相关,二者联合检测能够有效提高结肠癌的诊断价值。
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编辑人员丨6天前
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微小RNA-135a沉默对急性肾损伤大鼠肾功能保护作用
编辑人员丨6天前
目的:观察微小RNA(miRNA,miR)-135a沉默对急性肾损伤大鼠肾功能保护作用并探讨其分子机制。方法:将2018年6月到2019年12月购自河南实验动物中心的60只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组和miR-135a组。miR-135a组通过腹腔注射沉默miR-35a的腺相关病毒1×10 11 vg/只;对照组和模型组通过腹腔注射对照miRNA腺相关病毒1×10 11 vg/只。3组大鼠接种15 d后,模型组和miR-35a组连续15 d注射庆大霉素50 mg/kg建立急性肾损伤模型;对照组连续15 d注射等体积生理盐水。建模成功48 h后处死小鼠,采用自动生化仪分析大鼠血肌酐和血尿氮水平;采用苏木精-伊红(HE)染色分析肾脏病理学变化;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析趋化因子2(CCL2)和趋化因子3(CCL3) mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组大鼠外周血炎性因子水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-135a靶蛋白叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)表达水平。计量资料比较采用单因素方差分析。 结果:miR-135a组大鼠肾组织病理评分[(5.19±1.38)分]显著低于模型组[(8.09±3.09)分],差异有统计学意义( t=3.193, P<0.05)。miR-135a组大鼠造模48 h后血肌酐和尿素氮水平[(73.76±9.43)、(12.60±4.01) mmol/L]显著低于模型组[(130.37±10.54)、(29.43±5.12) mmol/L],差异有统计学意义( t=2.941、3.019, P<0.05)。miR-135a组大鼠肾组织CCL2和CCL3 mRNA表达水平(1.59±0.12、1.73±0.19)显著低于模型组(3.42±0.38、2.51±0.29),差异有统计学意义( t=2.012、2.240, P<0.05)。miR-135a组大鼠血清白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平[(165.76±14.36)、(196.250±15.65) pg/ml]显著低于模型组[(252.32±21.44)、(318.02±27.36) pg/ml],差异有统计学意义( t=3.212、3.937, P<0.05)。miR-135a组大鼠肾组织FoxO1蛋白表达水平(0.29±0.09)显著高于模型组(0.12±0.07),差异有统计学意义( t=2.719, P<0.05)。 结论:miR-135a沉默通过上调FoxO1蛋白表达水平,降低急性肾损伤大鼠炎症水平,保护大鼠肾功能。
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编辑人员丨6天前
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七氟烷对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及其机制
编辑人员丨6天前
目的:探讨七氟烷对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法:选取6~8周龄、体质量(250±30)g雄性SD大鼠40只,按数字表法随机分成假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注组(IR组)、七氟烷预处理组(Sev组)、七氟烷预处理+沉默信号调节因子1(SIRT1)抑制剂组(EX组)4组,每组10只。肾缺血再灌注损伤模型制备前2天和术前10 min,Sham组、IR组、Sev组大鼠腹腔注射1% 二甲基亚砜(DMSO)溶液(5 mL/kg),EX组腹腔注射含抑制剂EX-527(1 mg/mL)的1% DMSO溶液(5 mL/kg)。Sham组:切除右侧肾脏,暴露左侧肾脏但不夹闭肾蒂;IR组:切除右侧肾脏,制备左侧肾脏缺血再灌注模型;Sev组、EX组:先吸入七氟烷45 min后,再按IR组方法制备缺血再灌注模型。于制备缺血再灌注模型术后3 h,收集各组大鼠肾脏组织与左心室血液,取材后以颈椎脱位法处死大鼠。观察项目:(1)检测各组大鼠左心室血液血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。(2)制备各组大鼠肾脏组织病理切片,光镜下观察肾组织病理变化,对肾小管按Paller评分标准进行评分,评估肾脏损伤情况。(3)采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL)检测各组大鼠肾脏组织细胞凋亡情况。(4)取各组大鼠肾脏组织病理切片,在透射电子显微镜下观察肾脏组织自噬情况。(5)采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组大鼠肾脏组织SIRT1、叉头盒转录因子O3(FoxO3)蛋白,以及凋亡蛋白(BAX/Bcl-2)、自噬相关蛋白(Beclin1、LC3A/B)的表达水平。结果:(1)Sham组大鼠血清Scr和BUN分别为(50.74±5.91)μmol/L和(10.11±0.80)mmol/L,IR组分别为(90.18±11.22)μmol/L和(53.39±6.29)mmol/L,Sev组分别为(63.70±8.69)μmol/L和(27.68±3.41)mmol/L,EX组分别为(80.18±9.15)μmol/L和(33.20±3.57)mmol/L。与Sham组相比,IR组、Sev组、EX组血清Scr、BUN水平均升高;与IR组相比,Sev组、EX组血清Scr、BUN水平均下降;与Sev组相比,EX组血清Scr、BUN 水平均升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)Sham组肾小球和肾小管形态结构基本正常;IR组肾小管上皮组织肿胀明显,肾小管细胞排列紊乱,大量细胞核固缩,大量中性粒细胞浸润;Sev组:肾小管上皮细胞轻中度肿胀,少见核固缩坏死,中性粒细胞浸润明显减少;EX组:肾小管上皮组织肿胀明显,细胞核固缩和溶解增多,中性粒细胞浸润较多。Sham组、IR组、Sev组、EX组肾小管Paller评分分别为(0.61±0.15)、(5.05±0.55)、(2.68±0.33)、(4.51±0.49)分。与Sham组比较,IR组、Sev组、EX组Paller评分均升高;与IR组比较,Sev组、EX组Paller评分均下降;与Sev组相比,EX组Paller评分升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)Sham组、IR组、Sev组、EX组细胞凋亡率分别为8.71%±0.68%、38.15%±2.23%、14.51%±2.02%、32.55%±2.89%。与Sham组比较,IR组、Sev组、EX组细胞凋亡率均升高;与IR组比较,Sev组、EX组细胞凋亡率下降;与Sev组比较,EX组细胞凋亡率升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(4)与Sham比较,IR组、Sev组、EX组大鼠肾组织自噬小体数量均增加;与IR组比较,Sev组、EX组自噬小体数量增加且体积增大;与Sev组比较,EX组自噬小体数量明显减少:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(5)与Sham组比较,IR组和EX组大鼠肾脏组织FoxO3、Beclin1、LC3A/B蛋白、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均升高,SIRT1的相对表达量均降低;Sev组SIRT1、FoxO3、Beclin1、LC3A/B、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均升高:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与IR组比较,Sev组SIRT1、Beclin1、LC3A/B蛋白的相对表达量均升高,FoxO3、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均降低;EX组SIRT1蛋白的相对表达量升高,FoxO3、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均降低:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与Sev组比较,EX组SIRT1、Beclin1、LC3A/B蛋白的相对表达量均降低,FoxO3、BAX/Bcl-2蛋白的相对表达量均升高,差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:七氟烷可通过促进自噬,抑制细胞凋亡,减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制可能与激活SIRT1/FoxO3信号通路有关。
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编辑人员丨6天前
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白藜芦醇通过上调自噬发挥对糖尿病小鼠足细胞保护作用的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨白藜芦醇通过上调1型糖尿病小鼠肾脏自噬水平减轻足细胞损伤的机制。方法:选取健康雄性无特定病原体级昆明小鼠28只,以8只健康昆明小鼠作为正常对照组(NC组),剩余20只小鼠给予链脲佐菌素建立1型糖尿病小鼠模型,将造模成功的18只小鼠随机分为糖尿病组(DM组, n=9)和白藜芦醇干预组(Res组, n=9)。12周末检测24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹法检测沉默信号调节因子1(SIRT1)、叉头状转录因子O1(FoxO1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬接头蛋白(P62)、裂孔膜蛋白肾病蛋白(nephrin)及足突蛋白(podocin)的表达水平及磷酸化FoxO1(p-FoxO1)/FoxO1。免疫组织化学法观察足细胞nephrin、podocin的表达,应用HE染色及电镜的方法观察肾小球形态及超微结构的变化。多组间比较采用方差分析,组内比较采用LSD- t法。 结果:与NC组相比,DM组肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白升高( t=-39.57、-28.17、-57.31,均 P<0.05),SIRT1、LC3Ⅱ、nephrin及podocin表达减少,P62表达增多(均 P<0.05),p-FoxO1/FoxO1升高(0.71±0.03比0.32±0.01, t=-38.81, P<0.05),光镜及电镜显示肾小球、基底膜及足细胞结构损伤。Res组与DM组相比,肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白降低( t=30.89、16.39、49.64,均 P<0.05),SIRT1、LC3Ⅱ、nephrin及podocin表达增高,P62表达减少(均 P<0.05),p-FoxO1/FoxO1降低(0.42±0.01比0.71±0.03, t=27.47, P<0.05),光、电镜显示以上损伤减轻。 结论:白藜芦醇通过激活SIRT1/FoxO1通路提高肾脏自噬水平,对糖尿病小鼠肾脏足细胞起保护作用。
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编辑人员丨6天前
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长链非编码RNA CTA-796E4.4在膀胱癌组织中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)CTA-796E4.4在膀胱癌组织和细胞株中的表达,并观察其对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测湖北省天门市第一人民医院2016年11月至2019年1月手术切除标本73例膀胱癌组织及癌旁组织、4种膀胱癌细胞株(UM-UC-3、BIU-87、5637、T24)及正常膀胱上皮细胞中CTA-796E4.4的表达。以携带CTA-796E4.4基因的重组慢病毒(LV-CTA-796E4.4)感染UM-UC-3细胞作为实验组,以阴性对照慢病毒(LV-NC)感染UM-UC-3细胞为对照组。采用qPCR法检测过表达CTA-796E4.4对叉头框转录因子O1(FOXO1)基因mRNA表达的影响,通过Western blotting检测FOXO1蛋白的表达,分别以噻唑蓝(MTT)法、Transwell侵袭实验检测高表达CTA-796E4.4对UM-UC-3细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:CTA-796E4.4在膀胱癌组织中的表达水平低于癌旁组织(1.22 ± 0.33比4.30 ± 0.64),差异有统计学意义( P<0.01)。CTA-796E4.4在膀胱癌细胞株(UM-UC-3、BIU-87、5637、T24)中的表达均低于膀胱上皮细胞(0.11 ± 0.03、0.61 ± 0.03、0.33 ± 0.03、0.73 ± 0.04比1.01 ± 0.10)( P<0.01)。LV-CTA-796E4.4感染细胞后,CTA-796E4.4表达量显著增加( P<0.01),FOXO1基因表达升高( P<0.01)。高表达CTA-796E4.4能明显抑制细胞增殖能力和侵袭能力( P<0.05)。 结论:lncRNA CTA-796E4.4在膀胱癌及细胞株中表达降低,高表达CTA-796E4.4可抑制UM-UC-3细胞的增殖和侵袭,其分子机制可能是上调CTA-796E4.4促进FOXO1基因的表达。
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编辑人员丨6天前
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卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平与优质胚胎数的相关性及其预测不孕患者IVF-ET临床妊娠的效能研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨卵泡液中叉头框转录因子O亚族1(Forkhead box transcription factor O1,FoxO1)mRNA、天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)mRNA、生长分化因子-9(growth differentiation factor-9,GDF-9)水平与优质胚胎数的相关性及其预测不孕患者体外受精-胚胎移植( in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)临床妊娠的效能。 方法:选取2017年2月至2020年1月期间驻马店市中心医院收治的468例接受IVF-ET治疗的不孕患者进行病例对照研究,根据是否妊娠分为妊娠组( n=248)、未妊娠组( n=220),比较两组一般资料、取卵日性激素水平、卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平。采用Pearson分析卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9之间及其与优质胚胎数的相关性,采用logistic回归方程分析IVF-ET临床妊娠的相关因素并以受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析卵泡液 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9预测临床妊娠的效能。 结果:妊娠组优质胚胎数多于未妊娠组[(2.59±0.68)枚比(1.78±0.62)枚, P<0.001],基础卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平、基础黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平低于未妊娠组[(7.16±0.29)U/L比(6.21±0.34)U/L,(8.72±1.24)U/L比(10.65±1.01)U/L,均 P<0.001],取卵日雌二醇高于未妊娠组[(848.18±50.68)ng/L比(605.35±46.79)ng/L, P<0.001]。妊娠组 FoxO1 mRNA、GDF-9水平高于未妊娠组, Caspase-3 mRNA水平低于未妊娠组(均 P<0.001); FoxO1 mRNA与 Caspase-3 mRNA呈负相关,与GDF-9呈正相关(均 P<0.001); Caspase-3 mRNA与GDF-9呈负相关(均 P<0.001); FoxO1 mRNA、GDF-9与优质胚胎数呈正相关, Caspase-3 mRNA与优质胚胎数呈负相关(均 P<0.001)。多元线性回归分析显示,在排除混杂因素后, FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平与优质胚胎数相关(均 P<0.001)。以IVF-ET临床妊娠为因变量,纳入优质胚胎数、基础FSH、基础LH、取卵日雌二醇、 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9为自变量进行logistic回归方程分析,结果显示优质胚胎数、基础FSH、基础LH、取卵日雌二醇、 FoxO1 mRNA、 Caspase-3、GDF-9均与临床妊娠结局显著相关(均 P<0.001)。 FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平联合预测IVF-ET临床妊娠的曲线下面积(area under curve,AUC)值为0.891,大于 FoxO1 mRNA指标单独检测(AUC=0.796, P=0.012)。 结论:FoxO1 mRNA、 Caspase-3 mRNA、GDF-9水平与胚胎发育及性激素水平有关,且 FoxO1 mRNA、GDF-9水平升高, Caspase-3 mRNA水平降低有利于临床妊娠,三者联合检测可为评价IVF-ET临床妊娠提供参考。
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编辑人员丨6天前
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人干扰素基因刺激因子(STING)基因沉默子的克隆鉴定及功能初探
编辑人员丨6天前
目的:构建人干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)沉默子的荧光素酶报告质粒,在人胚肾细胞(HEK293T)和人类宫颈癌细胞(HeLa)中检测荧光素酶活性,生物信息学预测其可能结合的转录因子并通过实验验证。方法:通过PCR扩增人STING-5-1a(-124~+267,相对于转录起始位点,TSS: 0)和STING-5-2a(-124~+168)区域,亚克隆至pGL3-Basic质粒;将人STING沉默子区域STING-5-1b(+169~+267)正向反向亚克隆至pGL3-Control质粒(pGL3-C-5-1b-positive/negative),并把STING-5-1b分为两段互补片段,亚克隆至pGL3-Control载体上,命名为pGL3-C-STING-5-1b-α(+169~+209)/pGL3-C-STING-5-1b-β(+210~+267),双荧光素酶报告活性分析检测上述重组质粒在HEK293T和HeLa中的活性。应用生物信息学方法预测人STING沉默子的转录因子结合位点,将预测结合位点进行多点突变,检测荧光素酶活性。敲低转录因子,免疫印迹试验检测STING的表达水平。染色体免疫共沉淀反应进一步验证转录因子与人STING沉默子的结合。结果:核酸测序证实,上述重组质粒构建成功。截短STING-5-1b(+169~+267)片段后相对荧光素酶活性上升。同时,与pGL3-Control质粒相比,pGL3-C-5-1b-positive重组质粒的相对荧光素酶活性下降( P<0.05),其中,STING-5-1b-β(+210~+267)序列起主要抑制作用。应用生物信息学软件预测发现转录因子PR结构域锌指蛋白4(PRDM4)、Thanatos相关蛋白1(THAP1)、TEA域转录因子1(TEAD1)、核受体亚家族4 A组成员1(NR4A1)、类Krueppel因子4(KLF4)和叉头转录蛋白O3(FOXO3)可能与人STING沉默子区域(+210~+267)结合。对上述转录因子的结合位点进行多点突变构建突变体并转染至HEK293T和HeLa,发现THAP1-Mut和TEAD1-Mut的相对荧光素酶活性显著上升,提示STING沉默子可能含有THAP1和TEAD1的结合位点。将转录因子THAP1和TEAD1敲低后,STING的表达水平有显著上升。染色体免疫共沉淀试验表明,转录因子TEAD1和THAP1在细胞内与人STING沉默子区域结合。 结论:本实验成功构建了人STING沉默子荧光素酶报告质粒,通过活性比较,推测人STING的核心沉默子区位于+210~+267区域,通过生物信息学分析及点突变实验初步确定人STING沉默子可能含有的潜在转录因子结合位点。并使用免疫印迹试验和染色体免疫共沉淀进一步证实转录因子TEAD1和THAP1与人STING沉默子的结合,为后续研究提供实验资料。
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编辑人员丨6天前
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miR-142-5p靶向调控叉头转录蛋白O亚族3介导辅助性T细胞17细胞炎性反应促进自身免疫性葡萄膜炎的发展
编辑人员丨6天前
目的:观察实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)模型大鼠CD4 +T细胞中miR-142- 5p及叉头转录蛋白O亚族3(FOXO3)的表达,初步探讨两者靶向关系以及对EAU的影响。 方法:健康雄性Lewis大鼠10只随机分为模型组、对照组。模型组大鼠以过继免疫方式诱导EAU动物模型。免疫后20 d,取对照组、模型组大鼠眼球和引流淋巴结提取CD4 +T细胞,并分为对照组、模型组、mimic-阴性对照(NC)组、miR-142-5p-mimic组、小干扰(si)-NC组、si-FOXO3组进行体外实验。miR-142-5p-mimic组、si-FOXO3组分别转染miR- 142-5p-mimic、si-FOXO3。健康雄性Lewis大鼠25只随机分为模型组、转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组,分别注射上述体外实验组细胞。免疫后4、8、12、16、20 d行裂隙灯显微镜检查并进行EAU评分;免疫后20 d,苏木精-伊红染色行组织病理学分级。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠CD4 +T细胞和眼组织中miR-142-5p、FOXO3 mRNA相对表达量及细胞培养上清液中辅助性T细胞17(Th17)标志物白细胞介素(IL)-17、IL-22、维甲酸相关孤儿受体γ(RORγ)mRNA相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶预测miR-142-5p与FOXO3的靶向关系。组间比较采用单因素方差分析或 t检验。 结果:模型组大鼠均出现不同程度EAU症状,随时间延长,其症状加重。与对照组比较,模型组大鼠CD4 +T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量升高,FOXO3 mRNA相对表达量下降,差异均有统计学意义( t=7.374、10.423, P=0.002、0.001)。与mimic-NC组比较,miR-142-5p-mimic组大鼠CD4 +T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量上升,差异有统计学意义( t=6.540, P=0.003 )。与模型组、mimic-NC组、si-NC组比较,miR-142- 5p-mimic组、si-FOXO3组大鼠CD4 +T细胞培养上清液中IL-17、IL-22、RORγ mRNA相对表达量均显著增加,差异有统计学意义( F=26.110、6.292、5.269、55.660、10.490、11.430, P<0.05)。与转染mimic-NC组比较,转染miR-142-5p-mimic组大鼠眼组织中miR-142-5p mRNA相对表达量显著上升,差异有统计学意义( t=6.690, P<0.05 );与转染si-NC组比较,转染si-FOXO3组大鼠眼组织中FOXO3 mRNA相对表达量显著下降,差异有统计学意义( t=17.751, P<0.05)。转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组大鼠免疫后随时间延长,EAU评分均呈上升趋势。转染miR-142-5p-mimic组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染mimic-NC组升高,差异有统计学意义( t=5.633、6.286, P<0.05)。转染si- FOXO3组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染si-NC组升高,差异有统计学意义( t=6.852、6.635, P<0.05)。FOXO3与miR-142-5p具有靶向关系。 结论:EAU大鼠CD4 +T细胞中,miR-142- 5p表达上调,FOXO3表达下调;miR-142-5p靶向调控FOXO3表达促进Th17细胞相关炎性因子发展。
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编辑人员丨6天前
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AMPK信号通道调节自噬和线粒体稳态的研究进展
编辑人员丨6天前
AMP活化蛋白激酶(AMPK)是一种广泛存在于真核细胞生物中且进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在调控细胞能量代谢方面,AMPK作为能量代谢激酶具有极其重要的作用。当机体处于低能量状态时,AMPK对细胞内腺嘌呤核苷酸水平的变化作出反应,与一磷酸腺苷(AMP)或二磷酸腺苷(ADP)结合后被激活。激活的AMPK可调控各种代谢过程,包括脂质、葡萄糖代谢和细胞自噬。AMPK可通过磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(ULK1)和Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶-空泡分选蛋白34(PIK3C3-VPS34)复合物中的自噬相关蛋白直接促进细胞自噬;也可通过调节叉头框蛋白O3(FOXO3)、溶酶体功能的转录因子EB(TFEB)和溴结构域蛋白4(BRD4)等转录因子下游自噬相关基因的表达间接促进细胞自噬;还可调节线粒体自噬,诱导受损的线粒体分裂,促进自噬反应向受损线粒体转移。AMPK另一个功能是调控线粒体健康,可通过刺激线粒体生物发生参与并调控线粒体内稳态的各个方面。本综述讨论了AMPK信号通道作为细胞响应能量应激和调控线粒体的中心,对线粒体生物学和内环境稳态的重要调控作用,重点介绍了AMPK在调节细胞自噬和线粒体自噬过程中的关键作用,以及调控线粒体稳态的研究进展。
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编辑人员丨6天前
