目的:观察调控蛋白激酶B(Akt)/鼠双微体基因2(MDM2)/p53信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)恶性生物学行为的影响。方法:取对数期H1975细胞株(美国类型培养物保藏中心)，分别用Akt/MDM2/p53信号通路激活剂SC79(4 μg/ml)、抑制剂perifosine(5.0 μmol/L)处理，设为SC79组、perifosine组，取不做任何处理的H1975细胞株设为空白组。干预24 h检测细胞增殖能力、凋亡率及侵袭能力。多组间比较用单因素方差分析，两组间比较用LSD- t检验。 结果:SC79组24、48、72 h吸光度值(0.38±0.05、0.63±0.07、0.89±0.12)高于空白组(0.25±0.04、0.46±0.07、0.62±0.11， t＝4.540、3.840、3.709， P<0.01)；perifosine组24、48、72 h吸光度值(0.16±0.04、0.29±0.06、0.40±0.09)低于空白组(0.25±0.04、0.46±0.07、0.62±0.11， t＝3.558、4.123、3.461， P<0.01)。SC79组凋亡率[(2.01±0.57)%]低于空白组[(3.21±0.74)%， t＝2.813， P<0.05]；perifosine组凋亡率[(12.38±3.01)%]高于空白组[(3.21±0.74)%， t＝7.569， P<0.01]。SC79组每个视野透膜细胞数量(95.20±15.62)高于空白组(54.80±9.13， t＝4.993， P<0.05)；perifosine组每个视野透膜细胞数量(30.40±8.41)低于空白组(54.80±9.13， t＝4.395， P<0.01)。 结论:激活Akt/MDM2/p53信号通路可促进NSCLC细胞增殖、侵袭，抑制其凋亡。

端粒是真核生物线性染色体末端的帽状保护性结构，由双链DNA区和富含G碱基的3′突出端(单链DNA区)及端粒结合蛋白共同构成，是维持基因组稳定性的重要结构。端粒结合蛋白的核心成分，被称为shelterin复合体，可帮助端粒成帽，同时将端粒DNA隐藏于蛋白复合体间，免受DNA修复系统的识别，从而在形成端粒结构、保护染色体末端、维持基因组稳定等方面发挥重要作用。shelterin复合体组分的异常会导致端粒功能障碍及染色体末端融合或缺失，严重威胁基因组的稳定性，进而促进肿瘤的发生发展。作为基因组不稳定性的重要体现形式，双微体(double minute chromosomes，DMs)的形成与端粒的结构功能异常也存在相关性。本文总结了肿瘤细胞中shelterin复合体异常与基因组不稳定性的关联，试图阐明端粒蛋白参与的肿瘤恶性进展机制，为临床上改善恶性肿瘤预后提供新的靶点和思路。

目的 探究双微体(Double minute chromosomes,DMs)在肿瘤细胞周期各时相内的主要存在形式,明确DMs的复制、分离时相.方法 通过无血清饥饿法阻滞人结直肠癌细胞COLO 320DM周期进展后,取花萼海绵体诱癌素A(Calycu-lin-A)诱导间期细胞以染色质超前凝集制备核型样本.用秋水仙素处理COLO 320DM细胞以获取有丝分裂(M)期细胞进行核型分析.在普通光学显微镜下观察并拍摄DNA合成前期(G1 期)、DNA合成后期(G2 期)、M中期、M后期和M末期核型,并统计DMs数量.结果 DMs在G1 期、M后期和M末期时相细胞中主要以单体形式存在;在G2 期和M中期时相细胞中主要以双体形式存在.结论 单体型DMs在S期发生复制后由单体转变为双体,双体型DMs在M后期完成分离并由双体转变为单体.

基于CKB/p53 信号通路研究白花丹醌对人肝癌Huh-7 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.将白花丹醌 1～12 μmol·L-1 处理Huh-7细胞,进行细胞增殖和活性cell counting kit-8(CCK-8)实验,确定1、3、6 μmol·L-1 为低、中、高浓度用于后续实验.采用规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)-9 基因编辑技术敲除 Huh-7 细胞中的脑型肌酸激酶(creatine kinase,brain type,CKB)基因;CKB过表达慢病毒转染Huh-7细胞上调CKB的表达.通过平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测CKB的mRNA表达情况;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验检测CKB、p53、双微体同源基因2(mouse double minute 2 homolog,MDM2)、B淋巴瘤细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱天冬酶(caspase)-3 蛋白表达水平.结果显示白花丹醌显著抑制Huh-7细胞增殖,诱导细胞凋亡.与对照组比较,白花丹醌组凋亡水平显著升高,而白花丹醌联合凋亡抑制剂组凋亡水平显著降低.白花丹醌可显著下调CKB、Bcl-2和MDM2 蛋白表达水平,上调p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平.敲除CKB基因后,Huh-7细胞增殖能力降低,凋亡率升高,Bcl-2 和MDM2 蛋白表达水平降低,p53、Bax和caspase-3 蛋白表达水平升高.上调CKB表达后,Huh-7细胞增殖能力增强,Bcl-2和MDM2 蛋白表达水平升高,p53、Bax和caspase-3 蛋白表达水平降低.而白花丹醌可逆转过表达CKB对Huh-7细胞增殖和凋亡的作用.该实验表明,白花丹醌可显著抑制Huh-7细胞的增殖能力,其机制可能是通过抑制CKB表达,激活p53 信号通路,调控线粒体相关凋亡蛋白的表达,最终诱导细胞凋亡.

目的 观察益母草碱调节蛋白激酶B(Akt)/双微体同源基因2(MDM2)/p53 信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响.方法 2022 年3-9 月于湖北省十堰市太和医院实验室进行实验.采用CCK-8 法测定不同浓度(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L)益母草碱处理的小鼠脑胶质瘤细胞GL261 存活率并筛选出其最佳作用浓度.体外培养GL261 细胞并随机分为对照组、益母草碱组、益母草碱+SC79(Akt激活剂)组,以益母草碱1.6 mmol/L和5 μmol/L的SC79 分组处理后,采用蛋白免疫印记法检测各组细胞Akt/MDM2/p53 通路相关蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况.构建颅内胶质瘤小鼠模型30 只并随机分为对照组、益母草碱低剂量组、益母草碱中剂量组、益母草碱高剂量组及益母草碱高剂量+ SC79组,分组处理后以 TUNEL染色检测各组小鼠颅内胶质瘤细胞凋亡情况;以免疫印记法检测各组胶质瘤组织 Akt/MDM2/p53 通路相关蛋白表达.结果 (1)细胞实验:与对照组比较,益母草碱组细胞凋亡率、p53 蛋白表达显著升高(P<0.05),存活率、迁移率、侵袭数、p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2 降低(P<0.05);与益母草碱组比较,益母草碱+ SC79 组细胞凋亡率、p53 蛋白表达降低(P<0.05),存活率、迁移率、侵袭数、p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2 升高(P<0.05).(2)动物实验:与对照组比较,益母草碱组胶质瘤组织细胞凋亡率、p53 蛋白表达升高(t/P =20.076/<0.001、7.486/<0.001),p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2 降低(t/P =11.769/<0.001、7.579/<0.001);与益母草碱组比较,益母草碱+SC79 组胶质瘤组织细胞凋亡率、p53 蛋白表达降低(t/P =18.328/<0.001、7.359/<0.001),p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2升高(t/P =9.640/<0.001、5.529/<0.001).结论 益母草碱可通过抑制Akt/MDM2/p53 信号而抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭及在小鼠体内生长,并诱导其凋亡,最终抑制其恶性进展.

急性骨髓性白血病(AML)是成年人常见的急性白血病类型,严重危害健康.Idasanutlin是首个强效的口服双微体2蛋白抑制药,能激活p53通路,诱导癌细胞凋亡.目前的临床前研究和临床试验已经充分证实了其有效性和安全性;与其他的抗癌药合用,也呈现极好的协同作用,是治疗AML的良药,有希望不久获批上市.

染色体外环状 DNA (extrachromosomal circular DNAs , eccDNAs)产生于染色体上的序列,在起源上有较高的异质性.eccDNAs 的产生在不同的背景下可能涉及不同发生模型以及修复机制.高通量测序等技术对发现和理解更多 eccDNAs 有重要贡献.近期在人循环系统中也发现了大量 eccDNAs 分子的存在.eccDNAs 可以影响细胞生命活动,促进肿瘤细胞演进和适应性进化,增加了基因组的可塑性和不稳定性,在肿瘤的诊治、液体活检等方面可能有重要的应用潜力.本综述旨在阐述目前报道的主要人类 eccDNAs 类型在起源、结构、研究方法、功能和应用价值等方面的研究进展.

目的 比较不同治疗方法对前交通动脉复合体(ACoAC)动脉瘤的效果.方法 回顾分析我院2015年6月-2016年10月收治的120例破裂ACoAC动脉瘤病人临床资料,60例应用血管内个体化治疗(A组),其中采用单微导管栓塞法治疗25例(38.37％),双微导管栓塞法治疗18例,支架辅助法治疗10例,球囊辅助法治疗7例;60例采用传统开颅夹闭术治疗(B组).比较A组不同方法治疗病人术后即刻完全栓塞率、术后6个月复发率及DSA复查距栓手术时间;比较A组和B组手术时间、术中出血量、住院时间、住院费用、术后1年改良Rankin评分及并发症发生情况.结果 A组不同栓塞术病人即刻完全栓塞率、复发率、DSA复查距栓手术时间比较差异均无显著性(P＞0.05).A组病人住院时间明显短于B组,住院费用、手术时间、术中出血量明显多于B组(t=4.334～26.105,P＜0.05);两组病人术后并发症发生率均无明显差异(P＞0.05).术后随访6～12月,平均(7.9±1.1)月,A组改良Rankin评分与B组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 血管内介入动脉瘤栓塞术与传统开颅夹闭术对破裂ACoAC动脉瘤病人均具有良好治疗效果,其中前者适用于对手术耐受度较差、瘤体解剖位置较深的病人,后者适用于血管瘤解剖位置复杂的病人.

染色体外DNA (extrachromosomal DNA,ecDNA)是存在于肿瘤细胞中、可在有丝分裂中期被光镜观察到的游离于染色体外的环形DNA.ecDNA不仅携带高拷贝的癌基因,而且转录活跃,是癌基因表达的主要来源;另外其还是形成肿瘤异质性的关键.本文将就上述ecDNA对肿瘤的作用机制进行概述,并提出关于该领域的研究展望.