目的 探究脑靶向肽Angiopep2包载si-WDR4对胶质母细胞瘤的影响及其潜在机制.方法 制备Angiopep2/si-RNA,并检测其包封率和摄取率;在体外,分别对U87细胞进行磷酸盐缓冲液(PBS),Angiopep2/si-NC,si-WDR4和Angiopep2/si-WDR4处理,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测WDR4的mRNA含量,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测WDR4、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测U87细胞活力,通过5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色检测U87细胞的增殖;在体内,通过U87-Luc细胞构建异种原位移植瘤模型,7 d后,分别通过尾静脉注射PBS、Angiopep2/si-NC、si-WDR4和Angiopep2/si-WDR4.第28天,通过小动物活体成像检测肿瘤双荧光素酶活性,通过苏木精-伊红(HE)染色检测肿瘤大小.计量资料比较采用t检验.结果 Angiopep2对si-WDR4具有良好的结合能力,在N/P比为3∶1时形成完整复合物,并能够促进肿瘤细胞对si-RNA的摄取;在体外,与Angiopep2/si-NC 比较,Angiopep2/si-WDR4 处理能降低 U87 细胞内 WDR4 的 mRNA(0.21±0.14,t=4.13,P＜0.05)和蛋白水平(0.42±0.17,t=3.53,P＜0.05),减少 PI3K(0.34±0.19,t=5.17,P＜0.05)和 Akt(0.24±0.17,4.26,P＜0.05)的表达,降低 U87 细胞活性(52.00±11.33,t=4.59,P＜0.05),减少 EdU 阳性细胞数(23.00±7.28,t=12.12,P＜0.05);在体内,Angiopep2/si-WDR4 处理后裸鼠脑组织双荧光素酶活性降低(10.02±2.06,t=6.14,P＜0.05),肿瘤相对体积减小(0.38±0.17,t=7.42,P＜0.05).结论 Angiopep2/si-WDR4能促进肿瘤细胞对si-WDR4的摄取,抑制胶质母细胞瘤的增殖.

目的:探究竹节参总皂苷(TSPJ)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞铁死亡的作用及调控机制。方法:实验1：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ低剂量组、TSPJ高剂量组、二甲双胍组(Met)，每组各10只。实验2：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C组、TSPJ＋AMPK激动剂AICAR组，每组各10只。除对照组外，其余各组大鼠均采取腹腔注射链脲佐菌素构建DCM模型。各组大鼠给予对应药物干预8周后，检测各组大鼠体重及糖脂代谢水平；超声心动图检测大鼠心功能指标；酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平；苏木精-伊红(HE)染色和电镜观察心肌组织病理变化；试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛、活性氧簇(ROS)及Fe 2＋水平；Western印迹法检测心肌组织铁死亡、铁自噬以及AMPK/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/UNC-51样激酶1(mTOR/ULK1)信号通路相关蛋白表达。 结果:与对照组相比，DCM组大鼠左心室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、舒张早期与晚期血流速度峰值比值(E/A)均显著降低，舒张末期左心室内径(LVEDd)增加，血清LDH、cTnI、CK-MB升高，心肌组织SOD、GSH降低，丙二醛、ROS和Fe 2＋增加，转铁蛋白受体1(TFR1)、核受体共激活因子4(NCOA4)、LC3-II/LC3-I、Beclin-1、磷酸化AMPK及磷酸化ULK1表达水平升高，谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、磷酸化mTOR表达水平降低。与DCM组相比，各治疗组大鼠上述指标均得到显著改善。与TSPJ组相比，AMPK激动剂AICAR能够逆转TSPJ对DCM大鼠心肌细胞铁死亡及AMPK/mTOR/ULK1通路介导的铁自噬作用。 结论:TSPJ能够通过调控AMPK/mTOR/ULK1介导的铁自噬抑制DCM大鼠心肌细胞铁死亡，改善心肌损伤。

目的:探讨二甲双胍改善小鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)脂肪代谢和炎症的作用机制。方法:将18只8周C57BL/6J雄性小鼠按随机数字法分为3组：正常饮食组、高糖高脂加胆固醇饮食(HFF)模型(HFF组)和HFF模型二甲双胍处理组(Met组)，每组6只小鼠，喂养16周，第12周起Met组每天给予一次二甲双胍药物(150 mg/kg)灌胃干预，持续4周，正常饮食组和HFF组给予等体积生理盐水灌胃处理。造模结束后，麻醉并称取小鼠体重后，取小鼠血清和肝组织，计算肝脏指数(肝重/体重)，检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及血清甘油三酯(TG)、肝脏TG；通过苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏的病理变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测脂质合成相关蛋白甾醇调节元件结合蛋白(SREBP1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FASN)的蛋白表达水平；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Acc、Fasn、Srebf1、白细胞介素-1β(IL-1β)、淋巴细胞抗原6(Ly6g)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA相对表达水平。其次，利用HFF组和Met组小鼠肝组织进行表达谱高通量测序并分析相关信号通路的变化。最后，Western blot检测自噬底物p62、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3-Ⅰ/Ⅱ)、自噬相关基因5(ATG5)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)及其磷酸化水平，以及M1型巨噬细胞标志物[IL-1β、iNOS、单位细胞趋化蛋白1(MCP1)、CD86]和M2型巨噬细胞标志物(CD163、CD206)的蛋白水平。两组间采用 t检验进行比较。 结果:HE染色和油红O染色显示，与正常饮食组比较，HFF组小鼠肝组织脂滴累积，炎性细胞浸润增加；HFF组小鼠肝组织ACC、SREBP1c以及iNOS、MCP1的蛋白表达水平高于正常饮食组(1.03±0.15比0.60±0.15， t＝3.277， P<0.05；1.04±0.08比0.70±0.10， t＝4.467， P<0.05；1.16±0.02比0.54±0.22， t＝3.772， P<0.05；1.20±0.15比0.51±0.09， t＝6.908， P<0.05)。Met组小鼠体重、肝重、肝脏指数低于HFF组[(27.45±4.26) g比(35.51±1.69) g， t＝4.306， P<0.05；(1.20±0.21) g比(1.74±0.17) g， t＝4.839， P<0.05；0.04±0.01比0.05±0.01， t＝2.147， P<0.05]；Met组小鼠血清ALT和AST对比HFF组无明显变化[(21.33±4.32) U/L比(30.33±10.84) U/L， t＝1.889， P>0.05；(106.70±17.33) U/L比(112.30±14.33) U/L， t＝0.617， P>0.05)]。Met组小鼠血清TG、肝脏TG水平低于HFF组[(0.72±0.27) mmol/L比(1.33±0.41) mmol/L， t＝3.004， P<0.05；(0.02±0.01) mmol/L比(0.05±0.03) mmol/L， t＝2.350， P<0.05)]；HE染色和油红O染色结果观察到Met组小鼠肝细胞内未见明显空泡和脂滴；Met组小鼠肝组织中ACC、FASN、SREBP1c蛋白表达水平低于HFF组(0.37±0.13比0.66±0.09， t＝3.174， P<0.05；0.61±0.03比1.11±0.14， t＝6.069， P<0.05；0.48±0.05比0.88±0.01， t＝12.310， P<0.05)；Met组小鼠肝组织中ACC、FASN、SREBP1c mRNA表达水平低于HFF组(2.21±0.08比8.13±3.45， t＝2.974， P<0.05；1.06±0.12比1.39±0.05， t＝4.310， P<0.05；1.03±0.06比1.50±0.26， t＝3.055， P<0.05)。Met组小鼠IL-1β、Ly6g、NLRP3、iNOS mRNA表达水平低于HFF组(0.47±0.02比1.40±0.08， t＝21.030， P<0.05；0.16±0.06比0.65±0.19， t＝4.276， P<0.05；0.67±0.04比1.17±0.16， t＝5.082， P<0.05；0.82±0.52比4.49±0.78， t＝6.784， P<0.05)。Met组小鼠肝组织p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K比值低于HFF组(1.05±0.02比1.58±0.04， t＝15.420， P<0.05；0.47±0.11比1.07±0.10， t＝6.906， P<0.05)；Met组小鼠肝组织ATG5、CD163蛋白表达和LC3II/LC3I比值高于HFF组(1.05±0.11比0.52±0.04， t＝7.690， P<0.05；0.99±0.02比0.64±0.04， t＝14.470， P<0.05；1.58±0.05比1.34±0.03， t＝7.091， P<0.05)；Met组小鼠肝组织P62、IL-1β、iNOS、MCP1蛋白表达低于HFF组(0.72±0.06比1.07±0.08， t＝6.047， P<0.05；0.17±0.10比0.56±0.10， t＝4.310， P<0.05；0.42±0.03比0.78±0.15， t＝4.038， P<0.05；0.39±0.10比0.72±0.02， t＝4.253， P<0.05)；Met组小鼠肝组织CD86、CD206蛋白表达对比HFF组无明显变化(0.65±0.04比0.68±0.08， t＝0.600， P>0.05；0.72±0.33比0.88±0.21， t＝0.664， P>0.05)。 结论:二甲双胍治疗通过抑制PI3K/Akt通路，增强自噬，促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化，从而减轻小鼠NASH的肝脂肪变性和炎症。

目的:探讨人脂肪间充质干细胞（ADSC）外泌体对小鼠RAW264.7细胞介导的炎症反应和小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法:采用实验研究方法。取2020年6—9月于空军军医大学第一附属医院行腹部手术的3例女性患者（10~25岁）废弃脂肪组织，采用Ⅰ型胶原酶消化法提取ADSC，采用流式细胞术进行鉴定。使用差速超高速离心法提取人ADSC外泌体，采用透射电子显微镜观察形态，纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径，蛋白质印迹法检测CD9、CD63、肿瘤易感基因101（TSG101）和β肌动蛋白的蛋白表达。将人ADSC外泌体与RAW264.7细胞共培养12 h后，观察RAW264.7细胞对人ADSC外泌体的吞噬情况。将RAW264.7细胞分为采用磷酸盐缓冲液（PBS）刺激适宜时间的PBS组及内毒素/脂多糖（LPS）刺激相应时间点的LPS刺激2 h组、LPS刺激4 h组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组，每组3孔，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法检测白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-6及IL-10的mRNA表达。将RAW264.7细胞分为PBS组、单纯LPS组、LPS+ADSC外泌体组，每组3孔，按前一实验筛选的时间进行相应刺激，采用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、转化生长因子β（TGF-β）及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg1）的蛋白表达。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠，采用随机数字表法分为ADSC外泌体组和PBS组，每组12只，在背部造成1 cm×1 cm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻，2组小鼠创面分别进行相应的处理。伤后1 d，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β和TNF-α的浓度，采用实时荧光定量RT-PCR法检测创面组织IL-1β、TNF-α及IL-6的mRNA表达。伤后3、6、9、12、15 d观察创面愈合情况，并计算创面未愈合率；伤后15 d，行苏木精-伊红染色和Masson染色，分别检测创面皮肤附件缺损长度及胶原容积分数（CVF）；免疫组织化学法检测创面CD31表达及血管新生情况；免疫荧光法检测创面Ki67阳性细胞比、iNOS和Arg1双阳性细胞比、iNOS阳性细胞和Arg1阳性细胞的比值及两者的荧光强度。动物实验中样本数均为6。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、独立样本 t检验。 结果:培养12 h，细胞呈典型梭形结构，经流式细胞术鉴定为ADSC。外泌体呈囊泡状，粒径29~178 nm，表达CD9、CD63及TSG101而不表达β肌动蛋白。共培养12 h后，人ADSC外泌体成功被RAW264.7细胞吞入细胞质。LPS刺激2 h组、LPS刺激4 h组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达均明显高于PBS组（ t值分别为39.10、14.55、28.80、4.74，48.80、22.97、13.25、36.34，23.12、18.71、29.19、41.08，11.68、18.06、8.54、43.45，62.31、22.52、21.51、37.13， P<0.01），选择各种炎症因子表达均高表达的刺激12 h作为后续实验时间点。刺激12 h后，单纯LPS组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达均明显高于PBS组（ t值分别为44.20、51.26、14.71、8.54， P<0.01）；LPS+ADSC外泌体组RAW264.7细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达均明显低于单纯LPS组（ t值分别为22.89、25.51、8.03， P<0.01），而IL-10、TGF-β和VEGF mRNA表达均明显高于单纯LPS组（ t值分别9.89、13.12、7.14， P<0.01）。刺激12 h后，单纯LPS组RAW264.7细胞iNOS的蛋白表达明显高于PBS组和LPS+ADSC外泌体组（ t值分别为11.20、5.06， P<0.05或 P<0.01），Arg1蛋白表达明显低于LPS+ADSC外泌体组（ t=15.01， P<0.01）。伤后1 d，ADSC外泌体组小鼠血清中IL-1β和TNF-α浓度及创面组织中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达均明显低于PBS组（ t值分别为15.44、12.24，9.24、7.12、10.62， P<0.01）。伤后3、6、9、12、15 d，ADSC外泌体组小鼠创面未愈合率分别为（73.2±4.1）%、（53.8±3.8）%、（42.1±5.1）%、（24.1±2.8）%、0，均分别明显低于PBS组的（82.5±3.8）%、（71.2±4.6）%、（52.9±4.1）%、（41.5±3.6）%、（14.8±2.5）%（ t值分别为4.77、8.93、5.54、7.63、7.59， P<0.01）。伤后15 d，PBS组小鼠创面皮肤附件缺损长度明显长于ADSC外泌体组（ t=9.50， P<0.01），CVF明显低于ADSC外泌体组（ t=9.15， P<0.01）。伤后15 d，ADSC外泌体组小鼠创面组织CD31阳性表达和新生血管数（ t=12.99， P<0.01）明显多于PBS组，Ki67阳性细胞比明显高于PBS组（ t=7.52， P<0.01）。伤后15 d，PBS组小鼠创面组织iNOS和Arg1双阳性细胞比为（12.33±1.97）%，明显高于ADSC外泌体组的（1.78±0.29）%（ t=13.04， P<0.01），且iNOS荧光强度明显强于ADSC外泌体组，Arg1荧光强度明显强于ADSC外泌体组，iNOS阳性细胞和Arg1阳性细胞的比值明显高于ADSC外泌体组（ t=35.16， P<0.01）。 结论:人ADSC外泌体可以减轻小鼠RAW264.7细胞的炎症反应，在小鼠全层皮肤缺损创面中减少巨噬细胞浸润和促炎性细胞因子分泌，增加抗炎细胞因子分泌，促进新生血管形成，增强创面细胞增殖，加速创面愈合。

目的:探讨人脂肪间充质干细胞（ADSC）来源外泌体对脓毒症小鼠肺血管内皮细胞（PMVEC）损伤的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取空军军医大学第一附属医院收治的3例行腹部手术切除患者（均为女性，年龄10~25岁）遗弃的新鲜脂肪组织进行原代人ADSC的分离培养，于第5天采用倒置相差显微镜观察细胞形态。取第3代ADSC，采用流式细胞术检测ADSC中CD29、CD34、CD44、CD45、CD73和CD90的表达情况。选取第3~5代ADSC，采用差速超高速离心法获取其上清液中的外泌体，采用透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法及蛋白质印迹法分别检测外泌体形状、粒径大小及CD9、CD63、肿瘤易感基因101（TSG101）和β肌动蛋白的蛋白表达。取24只成年雄性BALB/c小鼠，按照随机数字表法（分组方法下同）分成正常对照组、单纯盲肠结扎穿孔（CLP）组和CLP+ADSC外泌体组，每组8只，分别进行相应处理。术后24 h，采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）水平，采用苏木精-伊红染色和髓过氧化物酶染色检测小鼠肺组织形态，采用免疫荧光法检测小鼠肺组织细胞中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的表达。取1个月龄雌雄不拘C57小鼠，采用组织块法获取原代PMVEC。取第3代PMVEC，采用免疫荧光法和流式细胞术检测PMVEC中CD31的表达。取第3代PMVEC，与ADSC来源外泌体共培养12 h，采用PKH26试剂盒检测PMVEC吞噬外泌体的情况。取第3代PMVEC，将细胞分为空白对照组、单纯巨噬细胞上清液组和巨噬细胞上清液+ADSC外泌体组，每组3孔，分别进行相应处理。24 h后，采用流式细胞术检测细胞中活性氧含量，采用免疫荧光法检测细胞中8-OHdG表达，采用Transwell实验测定细胞单分子层通透性。以上样本数均为3。对数据行单因素方差分析和LSD- t检验。 结果:分离的原代ADSC培养至第5天，呈梭形密集生长，呈典型的漩涡样排列。第3代ADSC中CD29、CD44、CD73和CD90阳性细胞百分比均>90%，CD34和CD45阳性细胞百分比均<5%。第3~5代ADSC来源外泌体呈典型的双凹盘状结构，外泌体平均粒径为103 nm，外泌体中CD9、CD63和TSG101的蛋白表达均呈阳性，β肌动蛋白的蛋白表达呈阴性。术后24 h，与正常对照组比较，单纯CLP组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量均明显增加（ t值分别为28.76、29.69， P<0.01）；与单纯CLP组比较，CLP+ADSC外泌体组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量均明显降低（ t值分别为9.90、4.76， P<0.05或 P<0.01）。术后24 h，正常对照组小鼠肺组织结构清晰完整、无炎症细胞浸润，单纯CLP组小鼠的肺组织较正常对照组水肿明显、炎症细胞浸润现象明显，CLP+ADSC外泌体组小鼠肺组织较单纯CLP组水肿症状明显减轻、炎症细胞浸润明显减少。术后24 h，3组小鼠肺组织中CD31呈阳性表达；单纯CLP组小鼠肺组织中8-OHdG阳性细胞荧光强度较正常对照组显著增大，CLP+ADSC外泌体组小鼠肺组织中8-OHdG阳性细胞荧光强度较单纯CLP组明显下降。第3代PMVEC的免疫荧光结果显示CD31呈阳性表达，流式细胞术鉴定结果显示CD31阳性细胞占比为99.5%。共培养12 h，ADSC来源外泌体成功被PMVEC吞噬，进入胞质。第3代PMVEC培养24 h后，与空白对照组比较，单纯巨噬细胞上清液组PMVEC的活性氧荧光强度明显增加（ t=15.73， P<0.01）；与单纯巨噬细胞上清液组比较，巨噬细胞上清液+ADSC外泌体组PMVEC的活性氧荧光强度明显降低（ t=4.72， P<0.01）。第3代PMVEC培养24 h，与空白对照组相比，单纯巨噬细胞上清液组PMVEC的8-OHdG阳性荧光强度明显增强，巨噬细胞上清液+ADSC外泌体组PMVEC的8-OHdG阳性荧光强度介于空白对照组和单纯巨噬细胞上清液组之间。第3代PMVEC培养24 h，与空白对照组比较，单纯巨噬细胞上清液组的PMVEC单分子层细胞通透性明显增加（ t=6.34， P<0.01）；与单纯巨噬细胞上清液组比较，巨噬细胞上清+ADSC外泌体组的PMVEC单分子层细胞通透性明显降低（ t=2.93， P<0.05）。 结论:ADSC来源外泌体可改善小鼠肺组织氧化性损伤，降低由巨噬细胞上清液诱导的PMVEC的活性氧含量、8-OHdG表达以及细胞通透性。

目的:探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)在体内外对小鼠全层皮肤缺损创面巨噬细胞表型的调控及对创面愈合相关炎症因子的影响。方法:(1)取遵义医科大学附属医院妇产科5名足月分娩健康孕妇产后弃用的新鲜羊膜，酶消化法分离纯化培养hAMSC，取第3代细胞，经成骨、成脂诱导分化鉴定；取第4代细胞，经hAMSC表面标志物鉴定。取10只C57BL/6小鼠(均为雄性，6～8周龄，性别、鼠龄下同)，腹腔灌洗法提取小鼠腹腔巨噬细胞，用含γ干扰素的DMEM培养基培养诱导制备M1型巨噬细胞。将M1型巨噬细胞分为hAMSC＋巨噬细胞组及单纯巨噬细胞组。hAMSC＋巨噬细胞组每孔巨噬细胞加入1×10 4个第4代hAMSC后加入DMEM培养基2 mL，常规培养；单纯巨噬细胞组每孔巨噬细胞仅加入2 mL DMEM培养基常规培养。于培养1、7 d，酶联免疫吸附测定法检测2组细胞培养上清液中白细胞介素12(IL－12)、精氨酸酶1及IL－10含量(样本数为6)。(2)取56只C57BL/6小鼠，建立背部全层皮肤缺损创面模型，按随机数字表法分为hAMSC组和磷酸盐缓冲液(PBS)组，每组28只。hAMSC组小鼠于创周皮下注射100 μL采用PBS悬浮的含1×10 7个/mL hAMSC的细胞悬液，PBS组小鼠创周仅注射100 μL PBS。于注射后1、3、7、14 d，2组分别取7只小鼠，处死后行苏木精－伊红染色组织病理学观察，免疫荧光染色检测创面巨噬细胞表面标志物[CD68与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)双阳性、CD68与精氨酸酶1双阳性]表达，实时荧光定量反转录PCR检测创面IL－10、巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP－1α)、MIP－2的mRNA表达。对数据行析因设计方差分析、 t检验、Bonferroni校正。 结果:(1)培养1 d，2组细胞培养上清液中IL－12、精氨酸酶1含量相近( t＝0.448、0.536， P>0.05)，hAMSC＋巨噬细胞组细胞培养上清液中IL－10含量明显低于单纯巨噬细胞组( t＝14.722， P<0.01)。培养7 d，hAMSC＋巨噬细胞组细胞培养上清液中IL－12含量明显低于单纯巨噬细胞组( t＝13.226， P<0.01)，精氨酸酶1和IL－10含量明显高于单纯巨噬细胞组( t＝30.172、31.406， P<0.01)。(2)注射后1 d，2组小鼠创面均有大量炎性细胞浸润；注射后3 d，2组小鼠创面炎性细胞浸润均增多，hAMSC组炎性细胞浸润较PBS组少；注射后7 d，2组小鼠创面炎性细胞浸润均减少，hAMSC组炎性细胞浸润较PBS组少；注射后14 d，2组小鼠创面均未见明显炎性细胞浸润。(3)注射后1、14 d，2组小鼠创面CD68与iNOS双阳性细胞百分比、CD68与精氨酸酶1双阳性细胞百分比相近( t1 d＝0.134、0.693， t14 d＝1.146、2.585， P>0.05)；注射后3、7 d，hAMSC组小鼠创面CD68与iNOS双阳性细胞百分比明显低于PBS组( t＝6.396、4.787， P<0.01)，CD68与精氨酸酶1双阳性细胞百分比明显高于PBS组( t＝3.928、4.473， P<0.01)。(4)注射后1 d，2组小鼠创面IL－10的mRNA表达相近( t＝2.005， P>0.05)；注射后3、7、14 d，hAMSC组小鼠创面IL－10的mRNA表达明显高于PBS组( t＝7.758、124.355、80.823， P<0.01)。注射后1、3、7、14 d，hAMSC组小鼠创面MIP－1α和MIP－2的mRNA表达(0.341±0.212、0.648±0.004、0.611±0.106、0.763±0.049，1.377±0.099、1.841±0.042、1.181±0.035、0.553±0.028)均明显低于PBS组(3.853±0.035、6.914±0.163、3.648±0.113、2.250±0.046，11.119±0.495、8.634±0.092、5.722±0.021、4.862±0.036， t＝43.198、101.904、51.845、58.231，51.074、177.501、291.752、251.614， P<0.01)。 结论:hAMSC具有促进小鼠全层皮肤缺损创面M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化的生物学效应；可以上调抗炎及抗纤维化因子IL－10的表达，下调重要的炎症反应介导因子MIP－1α和MIP－2的表达。

目的:研究并评估适合临床实验室开展的食源性腹泻弯曲菌检测方法及抗菌药物敏感性试验。方法:分为预实验和大样本验证。（1）预实验：收集2017年9月至2018年1月就诊于北京地区某三甲医院食源性腹泻患者粪便标本400份。采用双孔滤膜培养法及改良头孢哌酮-木炭-脱氧胆酸盐（CCD）琼脂培养法在微需氧环境中培养48 h，挑选可疑菌落进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定，同时进行实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测空肠弯曲菌及结肠弯曲菌。（2）大样本验证：收集2018年4月至2019年3月就诊于北京不同地区不同级别3家医院肠道门诊食源性腹泻患者粪便标本2 062份，进行qPCR检测及培养。阳性菌株按照美国临床与实验室标准化协会及美国国家肠道细菌耐药监测中心推荐的纸片扩散法及琼脂稀释法进行药物敏感性试验并进行结果判读。采用卡方检验比较3种检测方法的检测结果及2种抗菌药物敏感性试验的一致性。结果:预实验中qPCR、双孔滤膜培养法及改良CCD琼脂培养法检测弯曲菌（空肠弯曲菌/结肠弯曲菌）的检出率分别是9.0%（36/400）、5.0%（20/400）和3.5%（14/400），差异有统计学意义（χ2=11.772， P<0.01）且qPCR阴性，培养法均为阴性。大样本验证中，qPCR的检出率为8.1%（168/2 062），其中空肠弯曲菌7.0%（144/2 062），结肠弯曲菌1.2%（24/2 062）。qPCR阳性标本进行双孔滤膜培养法培养，阳性率为61.9%（104/168），其中空肠弯曲菌为58.3%（84/144），结肠弯曲菌为83.3%（20/24），与预实验检出率差异无统计学意义（ P>0.1）。空肠弯曲菌和结肠弯曲菌对环丙沙星耐药率分别为94.0%（94/100）和100.0%（24/24），对红霉素耐药率分别为6.0%（6/100）和33.3%（8/24），两种抗菌药物敏感性试验方法一致性较好（Kappa值>0.75）。 结论:qPCR快速、灵敏、操作简单，适合临床实验室常规开展。双孔滤膜培养法检出率显著高于改良CCD琼脂培养法，弯曲菌对喹诺酮类药物显示出极高的耐药率，已不适用于北京地区弯曲菌食源性腹泻的治疗，应选择大环内酯类抗菌药物。

目的:探讨低氧预处理大鼠脂肪源性间充质干细胞(ADSC)条件培养基对全层皮肤缺损大鼠创面愈合的影响。方法:(1)取6周龄雄性SD大鼠1只，颈椎脱臼处死，分离双侧腹股沟脂肪组织，胶原酶消化法提取第3代ADSC，观察细胞形态后用于后续实验。取细胞，采用随机数字表法(分组方法下同)分为成脂诱导组和成骨诱导组，每组各6孔。成脂诱导组培养14 d观察成脂情况，成骨诱导组培养28 d观察成骨情况。(2)取第3代ADSC，分为常氧组和低氧组，常氧组细胞置于氧气体积分数20%的常氧培养箱中培养，低氧组细胞置于氧气体积分数2%的低氧培养箱中培养。常氧组培养3 h，低氧组培养3、6、12、24、48 h，分别取3个样本，进行后续指标检测。实时荧光定量反转录PCR检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的mRNA表达量。收集2组细胞培养上清液，离心过滤后获得常氧条件培养基(normo-CM)和低氧条件培养基(hypo-CM)，酶联免疫吸附测定法检测条件培养基中VEGF、转化生长因子β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF)含量。(3)取27只6～8周龄雄性SD大鼠，分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、normo-CM组和hypo-CM组，每组9只，在其背部制作直径为1 cm的圆形全层皮肤缺损创面并分别滴加50 μL PBS、normo-CM及hypo-CM。伤后0、3、5、7、9、11 d，观察创面大体情况，测量创面面积并计算创面未愈合率。取创面组织，苏木精-伊红染色观察伤后3、9、11 d创面炎症反应及伤后9 d创面再上皮化水平；Masson染色观察伤后11 d创面胶原沉积情况，并分析胶原容积分数(CVF)。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、 t检验、Bonferroni校正。 结果:(1)细胞融合度低时呈长梭形、贴壁生长、排列紧密。培养14 d，成脂诱导组细胞经油红O染色后被染成红色的脂滴。培养28 d，成骨诱导组细胞经茜素红S染色后可见红色结节。细胞鉴定为ADSC。(2)与常氧组比较，低氧组细胞培养12、24 h HIF-1α mRNA表达量明显升高( t＝5.43、5.11， P<0.05)；培养6、12 h VEGF mRNA表达量明显升高( t＝3.29、2.33， P<0.05或 P<0.01)；bFGF mRNA培养12 h表达量明显升高( t＝12.59， P<0.01)，培养48 h明显降低( t＝9.34， P<0.01)；培养3、12、24 h PPAR-γ mRNA明显降低( t＝5.14、6.56、4.97， P<0.05)。(3)与常氧组相比，低氧组细胞培养3、6、12、24、48 h VEGF含量明显升高( t＝5.74、12.37、14.80、15.70、34.63， P<0.05或 P<0.01)，培养6、12、24、48 h IGF含量明显升高( t＝5.65、8.06、20.12、22.99， P<0.05或 P<0.01)，培养各时间点TGF-β和EGF含量无明显变化。(4)伤后0～11 d，3组大鼠创面均不同程度缩小，未见明显感染、渗出等。伤后11 d，PBS组大鼠创面面积仍较大；normo-CM组大鼠创面面积较PBS组缩小，hypo-CM组大鼠创面已基本愈合。伤后7 d，normo-CM组和hypo-CM组大鼠创面未愈合率明显低于PBS组( t＝10.26、16.03， P<0.05)。伤后9 d，hypo-CM组大鼠创面未愈合率明显低于PBS组和normo-CM组( t＝17.25、6.89， P<0.05或 P<0.01)，normo-CM组大鼠创面未愈合率明显低于PBS组( t＝8.81， P<0.05)。伤后11 d，hypo-CM组大鼠创面未愈合率为(2.4±1.5)%，明显低于PBS组的(20.0±5.0)%和normo-CM组的(7.7±1.7)%， t＝30.15、84.80， P<0.05。(5)伤后3 d，hypo-CM组大鼠创面炎症细胞浸润明显多于其余2组；伤后9 d，normo-CM组和hypo-CM组大鼠创面炎症细胞浸润均少于PBS组；伤后11 d，hypo-CM组大鼠创面炎症细胞浸润明显少于PBS组和normo-CM组。(6)伤后9 d，hypo-CM组大鼠创面"表皮迁移舌"长度长于其他2组，表皮厚度接近正常皮肤。伤后11 d，与PBS组和normo-CM组相比，hypo-CM组大鼠创面中可见大量结构致密、排列整齐、成熟度较高的胶原沉积。PBS组大鼠创面CVF为(22.90±1.25)%，显著低于normo-CM组的(31.96±0.14)%和hypo-CM组的(56.10±1.50)%( t＝12.48、29.43， P<0.05)；normo-CM组大鼠创面CVF显著低于hypo-CM组( t＝27.73， P<0.05)。 结论:低氧处理可显著增强大鼠ADSC的旁分泌作用，低氧预处理的大鼠ADSC条件培养基可通过调控炎症细胞浸润程度、促进创面再上皮化和胶原沉积，加速大鼠全层皮肤缺损创面愈合。

目的:探讨左卡尼汀对草酸钙诱导肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的影响。方法:采用蛋白质印迹法检测不同浓度(0、2、4、8 mmol/L)草酸钙对HK-2细胞铁死亡相关蛋白长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、胱氨酸转运蛋白系统(XCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的影响，筛选实验最适的草酸钙浓度。将HK-2细胞分为4组：①对照组，细胞贴壁后用正常培养基培养12 h，然后继续用正常培养基；②左卡尼汀组，细胞贴壁后用含5 mmol/L左卡尼汀的培养基预处理12 h，然后更换为含有5 mmol/L左卡尼汀的培养基；③草酸钙组，细胞贴壁后用正常培养基培养12 h，然后更换为含有最适浓度草酸钙的培养基；④草酸钙+左卡尼汀组，细胞贴壁后用含5 mmol/L左卡尼汀的培养基预处理12 h，然后更换为含有5 mmol/L左卡尼汀和最适浓度草酸钙的培养基。4组更换培养基后继续培养24 h，收集细胞或上清液，采用蛋白质印迹法检测铁死亡相关蛋白醌氧化还原酶(NQO1)、ACSL4、XCT、GPX4蛋白表达水平。采用相应试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛水平；活性氧试剂盒检测细胞活性氧水平；二价铁离子探针检测细胞内铁离子蓄积情况。采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞损伤程度。采用透射电镜观察线粒体损伤情况。对细胞行DAPI染色观察细胞核损伤情况；行苏木素染色观察草酸钙晶体黏附情况。结果:蛋白质印迹法检测结果显示，0、2、4、8 mmol/L草酸钙组的ACSL4蛋白表达分别为0.37±0.16、0.68±0.16、0.73±0.09、0.89±0.03，XCT蛋白表达分别为1.11±0.10、0.91±0.14、0.83±0.09、0.80±0.07，GPX4蛋白表达分别为1.23±0.13、0.99±0.17、0.81±0.05、0.72±0.06，与0 mmol/L组相比，2、4、8 mmol/L组ACSL4蛋白表达升高，XCT、GPX4蛋白表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)，其中4 mmol/L组与0 mmol/L组比较差异更显著( P<0.01)，故将4 mmol/L作为最适浓度进行后续实验。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组的NQO1水平分别为0.36±0.06、0.54±0.05、0.76±0.07、0.90±0.03，左卡尼汀组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)；ACSL4水平分别为0.66±0.10、0.58±0.08、0.99±0.03、0.77±0.09，XCT水平分别为0.93±0.08、0.85±0.07、0.76±0.06、0.99±0.05，GPX4水平分别为1.10±0.09、1.09±0.09、0.85±0.03、0.99±0.02，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组SOD水平分别为(100.00±5.79)%、(105.80±3.26)%、(44.74±7.60)%、(85.01±5.15)%，GSH水平分别为(100.00±4.73)%、(107.10±5.48)%、(53.49±3.98)%、(81.18±5.48)%，丙二醛水平分别为(100.00±2.36)%、(98.00±11.10)%、(129.11±2.59)%、(113.35±5.79)%，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组活性氧荧光强度分别为(63.98±9.41)AU、(145.41±8.39)AU、(85.37±4.51)AU，亚铁离子荧光强度分别为(39.77±0.68)AU、(68.40±3.14)AU、(48.60±4.30)AU，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.01)。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组LDH水平分别为(100.00±5.37)%、(99.50±6.38)%、(153.77±6.06)%、(132.50±5.58)%，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。透射电镜检查结果显示，相较于对照组，草酸钙组的线粒体皱缩，嵴断裂或消失，可见明显的双层膜结构；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组线粒体皱缩情况减轻，嵴相对增多，个别可见双层膜结构。DAPI染色结果显示，相较于对照组，草酸钙组部分细胞核损伤明显加重；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组细胞核损伤明显减轻。晶体黏附实验结果显示，相较于对照组，草酸钙组草酸钙晶体呈黑色颗粒状黏附于细胞，汇聚成团；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组黑色颗粒黏附于细胞的情况明显减轻。 结论:左卡尼汀能够减轻草酸钙诱导HK-2细胞的氧化应激和铁死亡，从而减轻细胞损伤和晶体黏附。

瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis的茎皮为彝族药,彝族名为"理娃资姓",用于治疗慢性胃炎等疾病,但其活性成分未见报道.该研究以幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)为模型,试图阐明白木香茎皮的活性成分.采用柱色谱、高效液相色谱、重结晶等方法从白木香茎皮中分离得到19个化合物,包括1个新的木脂素:白木香双酯(1),以及18个已知化合物:咖啡酸二十二酯(2)、6-羟基-2-[2-(4-甲氧基苯基)乙基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮(3)、qinanone A(4)、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮(5)、6-羟基-2-[2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮(6)、6-羟基-2-[2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)乙基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮(7)、6-经基-2-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]色酮(8)、6-羟基-2-[(1E)-2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)乙基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮(9)、芫花素(10)、5-羟基-2-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-7-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮(11)、3-羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(12)、(+)-丁 香脂素(13)、浙贝素(14)、aquilarin A(15)、caruilignan D(16)、(-)-榕醛(17)、pistaciamide(18)、原儿茶酸(19).抗菌结果显示,化合物2～7、10～11和13对Hp有一定的抑制活性,其中,2-(2-苯乙基)色酮类化合物6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮(5)和6-羟基-2-[2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)乙基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮(7)对Hp抑制作用最强,MIC均为6.25 μmol·L-1.2-(2-苯乙基)色酮类化合物是白木香茎皮的主要活性成分.