目的:探讨益生菌调节肠道菌群对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖及抑郁样行为的影响。方法:将24只大鼠分为正常对照组、糖尿病并发抑郁症（DD）组和益生菌组，每组8只。通过高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素（每只60 mg/kg）诱导，给予慢性不可预计温和应激（CUMS）刺激28 d建立DD大鼠模型，同时给予益生菌（双歧杆菌联合乳酸菌）重建其肠道菌群。每周称量大鼠体重的同时进行空腹血糖（FPG）检测，采用强迫游泳实验和矿场实验检测各组大鼠抑郁样行为，采用酶联免疫吸附测定法检测促炎性细胞因子［白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］、下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）相关蛋白［促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质醇］及脂多糖（LPS）在血清中的含量；采用16s rRNA对各组大鼠肠道内容物微生物菌群进行测序分析。两组之间比较采用独立样本 t检验，多组之间比较采用单因素或双因素方差分析。 结果:与对照组比较，DD组大鼠FPG升高并表现出明显抑郁样行为（静止时间增加、水平活动降低）和HPA亢进［功能相关的蛋白（CRH、ACTH和皮质醇）均升高］，且血清中LPS及促炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）含量均升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与DD组相比，益生菌组大鼠FPG降低，LPS及促炎性细胞因子含量明显降低，同时抑郁样行为和HPA亢进明显缓解，差异均有统计学意义（ P<0.05）。16s rRNA肠道菌群测序提示，各组大鼠肠道菌群α多样性无明显差异，β多样性存在差异；厚壁菌门和拟杆菌门为大鼠肠道菌群的主要菌种，其次为变形菌门和放线菌门；与对照组比较，DD组6个科［瘤胃球菌科_UCG-005（ Ruminococcaceae_UCG-005）、瘤胃球菌科_UCG-013（ Ruminococcaceae_UCG-013）、瘤胃梭菌科（ Ruminiclostridium）、颤杆菌克科（ Oscillibacter）、脱硫弧菌科（ Desulfovibrionaceae）和普雷沃菌科（ Prevotellaceae）］的丰度均降低（ P<0.01）。Bugbase表型预测显示，与对照组比较，DD组的好氧菌和革兰阴性菌丰度升高，而厌氧菌丰度下降，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:益生菌干预改善肠道菌群，可缓解DD大鼠的抑郁症状并降低促炎性细胞因子的表达。

目的:对艰难拟梭菌630（Cd630）菌株和致病决定区基因座（PaLoc）敲除突变株（ΔPaLoc）进行转录组测序和分析，获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱，并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力，为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫苗奠定基础。方法:对Cd630菌株和ΔPaLoc敲除突变株进行转录组测序，接着对差异表达基因进行筛选，随后对差异基因进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。最后在非洲绿猴肾细胞（Vero）和人克隆结肠腺癌细胞株（Caco-2）中进行Cd630野生型菌株和ΔPaLoc敲除突变菌株的细胞毒性验证实验。结果:转录组数据表明ΔPaLoc突变株毒素基因 tcdA、 tcdB未转录。 CD630_36010、 CD630_020910、 CD630_02080和 cel等基因分别上调17.92、11.40、8.93和7.55倍；编码高丝氨酸脱氢酶的 hom2基因、孢子形成蛋白基因 CD630_15810、锌结合脱氢酶基因 CD630_23230、1-磷酸半乳糖醇 5-脱氢酶基因 CD630_23240分别下调为野生型的0.06、0.075、0.133和0.183倍。GO和KEGG富集分析结果表明，ΔPaLoc突变株差异转录基因主要富集于密度感应系统、ABC运输系统、双组分系统、磷酸转移酶（PTS）系统、糖代谢通路以及万古霉素耐药相关的通路等。细胞毒力实验结果表明野生型Cd630菌株对Vero细胞和Caco-2细胞具有毒力，ΔPaLoc突变株丧失对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力。 结论:通过对Cd630和ΔPaLoc突变株进行转录测序，表明毒素基因未转录，其他差异性基因可为进一步研究ΔPaLoc突变株生理生化特征提供指引。细胞毒力实验表明，ΔPaLoc突变株丧失了对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力，ΔPaLoc突变株为艰难拟梭菌全菌减毒疫苗的构建奠定了基础。

目的 评估难辨梭状芽胞杆菌感染(CDI)消化系统疾病患者肠道菌群变化,以期为临床诊治提供参考.方法 纳入东莞市人民医院于2020年6月-2023年6月收治的189例医院获得性腹泻消化疾病患者的资料,按照难辨梭状芽胞杆菌感染(CDI)阳性与阴性1∶2匹配分组(63例:126例),检验艰难梭菌分离物,进行临床培养,鉴定病原菌及药敏,对难辨菌分离株进行基因分型并与临床结果进行比较,使用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测肠道微生物组的细菌靶点.结果 189例消化疾病患者中检出51株艰难梭菌,其中23株为产毒菌株;18.3％(22/120)的皮肤和环境样本显示艰难梭菌定植阳性结果;低浓度的甲硝唑和万古霉素[最低抑菌浓度(MIC)90、0.5和1.2 mg/L]对所有产毒艰难梭菌均有抑制作用;此外,这些菌株对莫西沙星和克林霉素的耐药率最高(MIC 90、0.5和1.6 mg/L);消化疾病组患者与健康对照组菌种比较差异均有统计学意义(P＜0.05);且除双歧杆菌属、肠球菌外,CDI消化疾病组患者与非CDI消化疾病组患者菌种亦存在差异(P＜0.05);CDI消化疾病组患者厚壁菌门载量高于非CDI消化疾病组(P＜0.05),而非CDI消化疾病组高于健康对照组(P＜0.05);就拟杆菌门载量而言,健康对照组＞非CDI消化疾病组＞CDI消化疾病组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 尽管消化系统疾病重症监护病房采取了适当的感染控制策略,但CDI在严重消化疾病患者中仍然很普遍.CDI消化疾病患者中黏液弧菌过度生长和普氏金黄色葡萄球菌丰度降低可能是消化疾病患者潜在的微生物组生物标志物.

目的 探讨病理性黄疸新生儿与健康新生儿肠道菌群丰度的差异及其与临床指标的相关性,评估肠道菌群丰度在病理性黄疸新生儿诊断中的价值.方法 选取2022年9月-2023年6月宁波大学附属第一医院新生儿科收治的60例病理性黄疸新生儿为黄疸组,选取同期在该院体检的健康新生儿80例作为对照组.收集两组新生儿一般资料并采集静脉血进行临床检测.采集两组新生儿粪便并使用高通量16S rRNA基因测序技术检测两组新生儿粪便样本中菌群RNA,分析肠道菌群α多样性[Chao指数、Shannon指数、Simpson指数],采用Pearson法分析临床指标与健康、病理性黄疸新生儿肠道菌群失调的相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析新生儿肠道菌群丰度与临床指标对病理性黄疸的诊断价值.结果 黄疸组高敏C反应蛋白(hs-CRP)、一氧化碳血红蛋白(CoHb)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γGT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)水平均高于对照组(P＜0.05).两组新生儿红细胞计数(RBC)、中性粒细胞计数(NE)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).两组新生儿肠道菌群Shannon指数、Simpson指数、Chao指数比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).黄疸组普拉梭菌属、柠檬酸杆菌属丰度高于对照组(P＜0.05).两组新生儿肠道埃希菌属、葡萄球菌属、克雷伯菌属、双歧杆菌属丰度比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).Pearson相关性分析显示,病理性黄疸组新生儿hs-CRP、CoHb、WBC、ALT、γGT、TBIL、DBIL 水平与肠道菌群普拉梭菌属呈正相关(r=0.280、0.330、0.375、0.160、0.229、0.470 和 0.449,均P＜0.05),HGB、HCT、AST与肠道菌群普拉梭菌属无相关性(r=0.161、0.091和0.074,均P＞0.05).hs-CRP、CoHb、WBC、HGB、ALT、γGT、TBIL、DBIL水平与肠道菌群柠檬酸杆菌属呈正相关(r=0.360、0.394、0.475、0.246、0.223、0.256、0.581 和 0.542,均 P＜0.05),HCT、AST 与肠道菌群柠檬酸杆菌属无相关性(r=0.148和0.118,均P＞0.05).ROC曲线分析结果显示,联合诊断效能最高,其曲线下面积为0.959(95％CI:0.926,0.992),敏感性为 95.0％(95％CI:0.861,0.990),特异性为 95.1％(95％CI:0.877,0.986).结论 证实了病理性黄疸新生儿肠道菌群丰度与多样性的变化,其与血清胆红素水平有相关性.肠道菌群的丰度及多样性作为生物标志物,可能对病理性黄疸的早期诊断和治疗具有重要价值.

目的 研究调脾安肠方对伊立替康致迟发性腹泻小鼠肠道菌群结构及其毒性代谢产物活性的影响.方法 将32只健康BALB/c雌性小鼠随机分为空白组、模型组、调脾安肠方组、黄连素组,每组8只.除空白组外,其余3组小鼠制备CT26皮下荷瘤模型后再建立伊立替康致迟发性腹泻模型,从伊立替康腹腔注射当天开始,调脾安肠方组每天于化疗前2 h给予调脾安肠方浓缩制剂0.4 mL(28 g/kg)灌胃,模型组每天于化疗前2 h给予生理盐水0.4 mL灌胃,黄连素组每天于化疗前2 h给予盐酸小檗碱片水溶液0.4 mL灌胃(100 mg/kg),空白组与造模组相同时间段给予生理盐水0.4 mL灌胃,均连续灌胃10d.于实验结束后当天留取各组小鼠粪便,分光光度法检测粪便样本中β-葡萄糖醛酸苷酶活性,16S rRNA高通量测序技术检测样本中肠道菌群结构及分布情况.结果 模型组β-葡萄糖醛酸苷酶活性明显高于空白组(P＜0.05);调脾安肠方组及黄连素组β-葡萄糖醛酸苷酶活性均明显低于模型组(P均＜0.05),且调脾安肠方组明显低于黄连素组(P＜0.05).粪便样本测序显示,模型组小鼠肠道菌群物种丰度、均匀度及多样性下降,而调脾安肠方组小鼠肠道菌群物种丰度、均匀度及多样性均得到逆转,趋近于正常小鼠,且在菌群物种组成上与空白组相似,黄连素组与模型组相似;空白组及调脾安肠方组OTUs数量较多,其次为黄连素组,模型组数量最少;肠道菌群物种门水平分析,各组样本中厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度均较高,其中疣微菌门(Verrucomicrobia)、变形 菌门(Proteobacteria)在模型组样本中具有较高丰度;肠道菌群物种属水平分析,乳杆菌属(Lactobacillus)在各组均有较高丰度,模型组样本中阿克曼菌属(Akkermansia)、拟杆菌属(Bacteroides)丰度降低,调脾安肠方组丰度上调至接近正常水平;各组OTUs相比,模型组小鼠肠道菌群中丹毒丝菌目、梭菌目、疣微菌目、伯克菌目、红蝽菌目数量上调,调脾安肠方组小鼠肠道菌群中厚壁菌门、双歧杆菌目、拟杆菌目和乳杆菌目菌群数量增加;模型组的标志物种包括肠球菌科、肠球菌属、帕拉普菌科、普雷沃菌属等,调脾安肠方组的标志物种包括双歧杆菌目、双歧杆菌科、双歧杆菌属及拟杆菌目的S24-7科等,黄连素组的标志物种包括颤螺菌属、副拟杆菌属、粪球菌属、瘤胃球菌属和紫单胞菌科等.结论 伊立替康会导致小鼠肠道菌群物种丰度、均匀度及多样性下降,增加β-葡萄糖醛酸苷酶活性,调脾安肠方可调节肠道菌群结构并降低毒性代谢产物活性.

建立气阴两虚病证糖尿病肾脏疾病病证结合动物模型及评价指标.将30只Wistar大鼠按照体重随机分为正常组(10只)、模型组(20只).模型组采用高糖高脂饲料喂养4周,腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)25 mg/kg诱导形成糖尿病大鼠.把成模大鼠按照24 h尿蛋白值分配到糖尿病肾脏疾病模型组(10只)、气阴两虚病证结合模型组(10只),气阴两虚病证结合模型组以附子、青皮、枳实按照5:6:6,13 g/kg灌胃诱导8周.对大鼠各项测量指标进行观测.发现与正常组和糖尿病肾脏疾病模型组比较,气阴两虚病证结合模型组大鼠粪便中有益菌:乳酸杆菌属、梭菌属、拟杆菌门、双歧杆菌属含量显著降低;致病菌:梭杆菌属、肠杆菌、毛螺菌科、粪肠球菌含量显著升高;气阴两虚病证结合模型组大鼠血清中免疫球蛋白G(IgG)(0.5±0.1 g/L)、免疫球蛋白M(IgM)(14.2±0.6 g/L)和肾脏组织中钠钾泵酶(Na+/K+-ATP)(0.8±0.3 U/mg)、钙镁泵酶(Ca2+-Mg2+-ATP)(2.0±0.3 U/mg)显著低于正常组(P＜0.05),环磷酸腺苷(cAMP)(0.9±0.2 mmol/L)、环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷(cGMP)(0.3±0.1 mmol/L)显著高于正常组(P＜0.05).HE染色显示:与正常组和糖尿病肾脏疾病模型组比较,气阴两虚病证结合模型组大鼠出现明显肾脏和结肠损伤;肾脏和结肠组织的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)蛋白表达均显著升高,结肠中毒蕈碱型胆碱受体M3(M3R)、5-羟色胺受体3A(5-HT3A)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(ZO-1)表达显著降低.实验结果表明通过高糖高脂喂养4周联合腹腔注射STZ25 mg/kg、附子、青皮、枳实灌胃诱导大鼠8周,可部分形成气阴两虚证糖尿病肾脏疾病基本证候特征,用于评价气阴两虚证糖尿病肾脏疾病的建立.

目的:观察抵当汤联合盐酸二甲双胍缓释片治疗 2 型糖尿病的疗效及对肠道微生态、糖脂代谢的影响.方法:选取 60 例 2 型糖尿病患者作为研究对象,按随机数字表法分为对照组及观察组各 30 例.对照组给予盐酸二甲双胍缓释片治疗,观察组在对照组基础上联合抵当汤治疗,2 组均治疗 8 周.比较 2 组临床疗效,比较 2 组治疗前后中医证候积分、糖脂代谢[空腹血糖(FBG)、餐后 2h 血糖(P2hBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹胰岛素]指标值、氧化应激[超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)]指标值、肠道微生态指标值的变化.结果:观察组临床疗效总有效率为 93.33%,对照组为 73.33%,2 组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,2 组神疲乏力、烦躁易怒、口苦咽干、舌红苔黄中医证候积分均较治疗前下降(P＜0.05),观察组上述 4 项中医证候积分均低于对照组(P＜0.05).治疗后,2 组血清FBG、P2hBG、HOMA-IR、TG水平均较治疗前下降(P＜0.05),血清HDL-C水平均较治疗前升高(P＜0.05);观察组FBG、P2hBG、HOMA-IR、TG水平均低于对照组(P＜0.05),血清HDL-C水平高于对照组(P＜0.05).2 组TC治疗前后比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).治疗后,2 组血清SOD水平均较治疗前升高(P＜0.05),血清ROS、MDA水平均较治疗前下降(P＜0.05);观察组SOD水平高于对照组(P＜0.05),血清ROS、MDA水平均低于对照组(P＜0.05).治疗后,2 组拟杆菌、双歧杆菌、柔嫩梭菌、乳酸杆菌菌落数均较治疗前升高(P＜0.05),肠球菌、肠杆菌菌落数均较治疗前下降(P＜0.05);观察组拟杆菌、双歧杆菌、柔嫩梭菌、乳酸杆菌菌落数均高于对照组(P＜0.05),肠球菌、肠杆菌菌落数均低于对照组(P＜0.05).结论:抵当汤联合盐酸二甲双胍缓释片可有效缓解 2 型糖尿病患者临床症状,改善糖脂代谢及肠道微生态情况,降低机体氧化应激反应.

[背景]重性抑郁症(major depressive disorder,MDD)是一种常见的重大精神疾病,MDD患者多伴有胃肠道症状,但很少有研究关注 MDD 患者胃肠道症状发生的机制.[目的]探索首发未治疗MDD患者肠道菌群的特征及其与炎症标志物和胃肠道症状的相关性,为MDD的治疗提供理论依据.[方法]募集符合入组和排除标准的 91 例首发未服药MDD患者和 105 名健康对照者(healthy controls,HCs).采用 16S rRNA基因测序技术和生物信息学分析评估粪便菌群组成.采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血高敏 C 反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α);采用胃肠症状评定量表(gastrointestinal symptom rating scale,GSRS)和汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)分别评估胃肠道症状和抑郁症状的严重程度.[结果]所有 MDD 患者都伴有胃肠道症状,食欲下降、早饱感、恶心呕吐的发生率均高于 70%.与 HCs相比,MDD患者外周血中 hs-CRP水平明显升高(P<0.05);两组受试者肠道菌群 α多样性和 β多样性存在明显差异(P<0.05).在属水平上,MDD 组中地嗜皮菌属、异斯卡多维亚菌属、双歧杆菌属、布洛特菌属、钩丝菌属、红长菌属、马赛菌属、嗜血杆菌属、Candidatus Xiphinematobacter和 Chthoniobacter 的相对丰度较高,拟杆菌属、副拟杆菌属、SMB53、厌氧菌属、梭菌属、毛梭菌属、罗斯氏菌属、粪杆菌属、瘤胃球菌属、小杆菌属、考拉杆菌属和萨特氏菌属的相对丰度较低.相关性分析发现罗斯氏菌属、萨特氏菌属、副拟杆菌属的相对丰度与 hs-CRP、HAMD-17 总分、GSRS总分及GSRS部分条目呈负相关(P<0.05).[结论]MDD患者外周血hs-CRP升高,紊乱的肠道菌群与hs-CRP、抑郁症状和胃肠道症状密切相关.

目的 原核表达具有甲基化酶活性的艰难拟梭菌CamA(Clostridiodies difficile adenine methltransferase A,CamA)蛋白.方法 PCR扩增艰难拟梭菌1870标准菌株CamA蛋白的基因序列,克隆至质粒pGEX-4T-l-MBP中,转化至大肠埃希菌HB101,经1 mmol/L IPTG诱导表达重组目的蛋白,利用Amylose Resin纯化后,CamA蛋白再经烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶酶切,采用体外MTase-GloTM Methyltransferase Assay分析技术验证其甲基化活性.结果 PCR测序结果显示克隆的CamA基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pGEX-4T-1-MBP-CamA经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后显示1 731 bp的CamA基因已连接至载体上;表达的重组蛋白相对分子质量约为108 800(含1个MBP标签),经Amylose Resin纯化后,纯度达90％以上;在20 μmol/L DNA和20 μmol/L S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)的条件下室温反应30 min,0.5 μg CamA能产生浓度约为101.60 nmol/L的S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl-L-homocysteine,SAH),酶活性为(0.339±0.027)U/mg.结论 成功表达并纯化了艰难拟梭菌CamA蛋白,其具有甲基化酶活性,为后续进一步研究CamA的功能及其在艰难拟梭菌感染发生、发展及治疗中的作用奠定了基础.

目的 观察通腑清胰方中药灌肠经肠道菌群调控治疗重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)的临床疗效.方法 选取2017 年 1 月—2020 年 12 月期间北京市怀柔区中医医院收治的 152 例SAP患者,采用随机数字表法分为对照组76 例与试验组76 例,另选择 100 例健康体检对象作为参照.对照组给予西医内科综合治疗,共治疗7d,试验组在西医内科综合治疗基础上联合通腑清胰方中药灌肠,连续灌肠7d.观察比较SAP患者与健康对象肠道菌群分布情况.观察比较两组患者治疗前后肠道菌群变化及生化指标[二胺氧化酶(Diam-ine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lactic acid,D-LA)、血清淀粉酶(Amylase,AMY)、内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)]变化,并比较两组患者临床疗效(疾病疗效与证候疗效)、病情评分[急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(Acute physiology and chronic health conditionsⅡ,APACHE Ⅱ)评分、Balthazar CT评分]、预后与治疗安全性.结果 SAP患者乳酸杆菌、双歧杆菌水平较健康对象低,肠球菌、肠杆菌、葡萄球菌、产气荚膜梭菌水平较健康对象高,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗7d后两组患者乳酸杆菌、双歧杆菌含量较治疗前升高,肠球菌、肠杆菌、葡萄球菌、产气荚膜梭菌含量较治疗前降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且试验组乳酸杆菌、双歧杆菌含量明显高于对照组,肠球菌、肠杆菌、葡萄球菌、产气荚膜梭菌含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗 7d后两组患者DAO、D-LA、AMY、LPS 水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且试验组DAO、D-LA、AMY、LPS水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后试验组疾病总有效率 94.67%(71/75)明显高于对照组 81.08%(60/74),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后试验组证候总有效率 90.67%(68/75)明显高于对照组67.57%(50/74),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后试验组APACHE Ⅱ评分、Balthazar CT评分均较对照组明显降低,住院时间较对照组明显缩短,且 28d病死率(2.67%)较对照组(10.81%)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗期间,两组患者均无严重不良反应情况.结论 SAP患者普遍存在肠道菌群紊乱,经通腑清胰方中药灌肠治疗,效果显著,有利于缓解病情,改善患者预后,且可能与调节肠道菌群有关.