目的:分析大骨节病（KBD）患者沉默信息调节因子2相关酶类1（SIRT1）的表达及其与软骨细胞凋亡的关系。方法:从青海省KBD病区贵德县选取20例KBD患者作为KBD组，同时在病区选取年龄和性别匹配的40例健康受试者作为对照组。采集研究对象的空腹肘静脉血，采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测外周血SIRT1及硒蛋白基因[谷胱甘肽过氧化酶（GPX）2、GPX3、硫氧还蛋白还原酶（TXNRD）1、TXNRD3、碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅰ（DIO1）、硒磷酸合成酶2（SPS2）]mRNA水平；并采用曲线拟合法进行KBD患者外周血SIRT1与硒蛋白基因表达关联分析。同时，体外培养人正常软骨细胞，分为对照组（未经任何处理）、单纯白藜芦醇（RES）组（验证RES对SIRT1的激活作用）、叔丁基过氧化氢（tBHP）损伤组（软骨细胞氧化损伤模型）和RES保护组（RES预保护后进行tBHP损伤），采用real-time PCR检测各组细胞SIRT1，硒蛋白基因及凋亡相关基因[B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、BCL2相关X蛋白（BAX）、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤抑制基因P53]mRNA水平。结果:人群研究中，KBD组外周血SIRT1 mRNA水平（1.12 ± 0.38）低于对照组（1.87 ± 0.97），差异有统计学意义（ t = 3.31， P = 0.002）。经曲线拟合分析，KBD组外周血GPX3、TXNRD1和TXNRD3 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均有所升高（ R2 = 0.48、0.66、0.95，均 P < 0.001）；DIO1 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高呈现先下降后上升的趋势（ R2 = 0.51， P = 0.024）；GPX2、SPS2 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均未见显著变化趋势（ R2 = 0.16、0.12， P = 0.064、0.114）。细胞实验中，与对照组（1.00 ± 0.10）比较，单纯RES组SIRT1 mRNA水平（1.79 ± 0.07）较高（ P < 0.05）。与tBHP损伤组比较，RES保护组硒蛋白基因GPX3、TXNRD1、TXNRD3、DIO1 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）；凋亡相关基因BAX、P53 mRNA水平及BAX/BCL2比值均较低，BCL2、NF-κB p65 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）。 结论:KBD患者SIRT1低表达；RES激活SIRT1后可能通过上调硒蛋白基因表达来增强软骨细胞抗氧化能力，从而抑制软骨细胞凋亡。

目的:研究秦皮乙素对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞氧化损伤的影响及其机制。方法:将传代ARPE-19细胞贴壁培养后分为空白对照组、模型对照组、20 μmol/L秦皮乙素组、40 μmol/L秦皮乙素组、80 μmol/L秦皮乙素组和100 μmol/L秦皮乙素组，空白对照组细胞采用正常培养液培养，模型对照组使用900 μmol/L t-BHP单独作用细胞4 h，后4个组分别使用900 μmol/L t-BHP＋不同浓度的秦皮乙素共同作用细胞4 h。采用MTS法检测细胞存活率；采用荧光染色分析法检测细胞内活性氧簇(ROS)活性；采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，以及丙二醛(MDA)含量。结果:空白对照组、模型对照组、20 μmol/L秦皮乙素组、40 μmol/L秦皮乙素组、80 μmol/L秦皮乙素组和100 μmol/L秦皮乙素组细胞存活率分别为(100.00±1.58)%、(49.19±1.06)%、(76.82±3.48)%、(103.90±1.60)%、(111.70±3.36)%和(113.40±3.08)%，组间总体比较差异有统计学意义( F＝95.44， P<0.01)，其中与空白对照组比较，模型对照组细胞存活率明显降低，差异有统计学意义( P<0.01)；与模型对照组比较，各浓度秦皮乙素组细胞存活率明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。各组ROS荧光强度相对值、MDA水平、SOD活力值、CAT活力值、GSH-Px活力值总体比较差异均有统计学意义( F＝575.20、40.61、1 802.00、41.62、38.31，均 P<0.01)，其中与模型对照组比较，各浓度秦皮乙素组ROS荧光强度相对值、MDA水平明显降低，SOD活性、CAT活性和GSH-Px活性明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:秦皮乙素通过上调细胞内抗氧化酶类活性或抗氧化蛋白的表达对氧化损伤的ARPE-19细胞起到保护作用。

目的 探索特发性肺纤维化(IPF)中基底膜标志物及潜在治疗药物.方法 在基因表达综合数据库(GEO)下载IPF相关数据集,处理后构建与IPF相关的基底膜基因表达矩阵并筛选基底膜差异基因(DEBMs);将DEBMs进行功能及通路的富集,并对其使用机器学习算法得到候选特征基因,运用接收机工作特性(ROC)曲线确定特征基因并构建列线图;进行ssGSEA分析探究特征基因与免疫细胞及功能相关性;通过特征基因预测了相应微小核糖核酸(RNA)(miRNA)及治疗药物.结果 共提取DEBMs 56 个;富集分析表明,DEBMs主要富集在"细胞外基质组织"、"细胞外结构组织"等,并与"ECM-受体相互作用"和"局部粘着斑"等通路密切相关,机器学习计算到候选特征基因6 个(TIMP3、P3H2、ITGA7、ITGA4、ADAMTS2、COL8A2),经ROC曲线测试均符合特征基因要求,列线图诊断价值突出(AUC=0.991 523);IPF中B cells、Macrophages等与正常组有显著差异.最后,预测到miRNA以 miR-4305、miR-3684 为主,黄体酮,叔丁基过氧化氢等是与IPF相关性较强的治疗药物.结论 特征基因及预测的miRNA可作为IPF诊断新型标志物,预测药物可能成为治疗IPF的潜在药物来源.

目的:探讨注射用益气复脉(YQFM)通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬减轻叔丁基过氧化氢(TBHP)所致H9c2心肌细胞损伤的机制.方法:体外培养H9c2心肌细胞,分为正常对照组、TBHP组、TBHP+YQFM组.CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞存活率;免疫荧光检测细胞自噬情况;免疫印迹法检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达.结果:用2、4、8、16 g/L的YQFM预处理后,可显著恢复TBHP诱导的H9c2细胞损伤;免疫荧光染色结果显示,与正常对照组相比,TBHP组细胞LC3荧光强度显著升高(P＜0.01);与TBHP组相比,TBHP+YQFM组LC3荧光强度降低,其中2 g/L YQFM组具有显著性(P＜0.05).West-em blot 检测结果显示:TBHP 组 p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著增加,p-mTOR/mTOR比率显著降低;YQFM预处理使自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率明显降低,4 g/L YQFM组p-mTOR/mTOR比率明显升高.结论:注射用益气复脉能有效拮抗TBHP引起的H9c2细胞损伤,其机制与通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬途径有关.

目的 基于网络药理学结合实验验证探索芎归汤对心梗后心衰小鼠心脏功能、心脏病理的改善及作用机制.方法 通过TCMSP、GeneCards、CTD等数据库搜索药物活性成分作用靶点与疾病相关靶点,并将二者取交集.采用DAVID数据库对交集靶点进行GO、KEGG通路富集分析.体内实验采用冠脉结扎构建心梗后心衰小鼠模型,分为假手术组(Sham,n=8)、模型组(Model,n=8)和芎归汤治疗组(XGT,3 g/kg,n=8).体外实验采用叔丁基过氧化氢诱导H9C2细胞凋亡,分为常规培养的对照组(Control)、叔丁基过氧化氢组(TBHP)、芎归汤低剂量组(XGT,50 μg/mL)和芎归汤高剂量组(XGT,100 μg/mL).通过HE、Masson、qPCR、免疫组化、CCK8、ROS、MDA、SOD、Hoechst 33342/PI和JC-1检测,探索芎归汤抗心衰的作用机制.结果 网络药理学分析结果显示,芎归汤治疗心衰的潜在作用靶点共 62个,其核心靶点包括PTGS2、ESR1、Caspase3、PPARG、HSP90AA1、BCL2、JUN、GSK3B等,富集分析显示这些靶点可能涉及细胞凋亡、AGE-RAGE信号通路、P53信号通路、PI3K-Akt信号通路、VEGF信号通路等.体内结果显示,芎归汤能够减少心衰小鼠心肌细胞损伤、减轻心室重构,从而改善心衰小鼠心功能(P<0.05).芎归汤能够抑制心肌凋亡相关蛋白Caspase3和BAX的表达,促进BCL2的表达(P<0.05).体外实验表明,芎归汤通过抑制氧化应激,从而减轻叔丁基过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡(P<0.05).结论 芎归汤能减轻心梗后心衰引起的心肌损伤,改善心衰小鼠心功能,芎归汤可能通过抑制氧化应激诱导的心肌凋亡发挥抗心衰的作用.

雄激素性脱发(androgenetic alopecia,AGA)是一种由激素、遗传、环境及年龄因素相互复杂作用的多基因疾病,是最常见的进行性脱发类型[1].根据国家卫健委发布的数据显示,我国有超 2.5 亿人正饱受脱发的困扰,且这种现象不断年轻化.AGA 的进行性提示着该病症不会自行缓解,必须要进行干预.因此,近年来市场的高需求使脱发药物与食品的研究成为一大热点.

目的:免疫细胞的异常程序性死亡与自身免疫性疾病相关,但系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE),尤其是狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)的程序性死亡模式尚不清楚.本研究旨在探究SLE和LN与免疫细胞死亡模式的关联.方法:在高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载批量RNA测序(bulk RNA sequencing,bulk RNA-seq)和单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)数据,通过生物信息学分析探究SLE患者外周血单个核细胞中3种细胞死亡模式相关基因的表达水平;通过scRNA-seq确定参与细胞死亡模式失衡的关键细胞亚群;采用免疫荧光法检测树突状细胞(dendritic cell,DC)中受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶3(receptor interacting serine/threonine kinase 3,RIPK3)、混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed-lineage kinase domain-like protein、MLKL)、磷酸化MLKL(phosphorylated MLKL,pMLKL)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase 1、CASP1)、CD1c分子(CD1c molecule、CD1C)、含C型凝集素结构域 9A(C-type lectin domain containing 9A、CLEC9A)和X-C基序趋化因子受体1(X-C motif chemokine receptor 1,XCR1)的表达水平;对中南大学湘雅三医院收集的LN患者和健康对照者(healthy control,HC)的肾组织进行scRNA-seq,并通过生物信息学分析参与细胞死亡模式失衡的关键细胞亚群;采用拟时序分析和配受体分析探究不同DC亚群的分化方向和细胞通信.采用瞬时转染技术分别在RAW264.7细胞中转染空质粒、空质粒+dsDNA(HSV-DNA)、空质粒+200 μmol/L叔丁基过氧化氢(tert-butyl-hydroperoxide,TBHP)、STING shRNA质粒、STING shRNA质粒+dsDNA(HSV-DNA)、STING shRNA质粒+200 μmol/L TBHP;采用Annexin V-mCherry和SYTOX Green染色检测各组细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组CASP1、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、RIPK3和MLKL的活化情况.结果:生物信息学分析显示SLE和LN患者存在3种细胞死亡模式的失衡:促炎型细胞焦亡和坏死性凋亡被激活,抗炎型细胞凋亡被抑制.其中的关键细胞亚群为DC亚群,并聚焦于CLEC9A+cDC1.免疫荧光法结果显示在外周血中SLE组DC中RIPK3、MLKL和CASP1表达水平较HC组DC升高;通过CLEC9A和XCR1标记肾组织中的cDC1,结果显示LN组cDC1的pMLKL和CASP1表达水平高于HC组.拟时序分析和配受体分析提示LN肾组织中CLEC9A+cDC1亚群存在外周循环起源.Annexin V-mCherry和SYTOX Green染色结果显示,在RAW264.7细胞中,与转染空质粒组相比,转染STING shRNA质粒组的死亡细胞数目减少;蛋白质印迹法结果显示与转染空质粒组相比,转染STING shRNA质粒组CASP1、GSDMD、RIPK3和MLKL的活化减少.结论:本研究为CLEC9A+cDC1在SLE和LN的细胞死亡模式失衡中的作用提供了新的思路.

目的:考察主成分为沙棘和花生壳提取物的棘脑通的抗抑郁药效及作用机制.方法:(1)动物水平上,采用慢性不可预知温和应激(CUMS)抑郁模型小鼠,随机分为空白组、模型组、棘脑通给药组(棘脑通低浓度组、棘脑通高浓度组)和氟西汀组.通过体重测试、糖水偏嗜实验和悬尾不动时间测试等行为学研究,考察棘脑通的抗抑郁作用.(2)细胞水平上,将不同浓度的棘脑通应用于PC12细胞、SH-SY5Y细胞、BV2细胞和RAW 264.7细胞,研究棘脑通对神经营养因子功能的促进作用,保护神经细胞、诱导神经分化的作用,以及抗氧化、抗炎作用.结果:(1)与空白组相比,模型组小鼠糖水偏嗜率、体重显著降低,悬尾不动时间、强迫游泳不动时间显著延长(P＜0.01);棘脑通给药组小鼠糖水偏嗜率较模型组显著升高(P＜0.05),棘脑通给药组、氟西汀组小鼠体重较模型组显著升高(P＜0.01),棘脑通低、高浓度组小鼠悬尾不动时间较模型组显著缩短(P＜0.01、P＜0.05),棘脑通给药组小鼠强迫游泳不动时间较模型组显著缩短(P＜0.01),上述差异均有统计学意义.(2)棘脑通与神经生长因子(5、50 ng/mL)协同使用时,PC12细胞分化程度、pNF200-Luc表达荧光素酶活性显著提高.棘脑通与脑源性神经营养因子、神经营养因子-3和神经营养因子-4(5 ng/mL)协同使用时,荧光素酶的活性显著提高.100～1 000 μg/mL的棘脑通可显著降低β-淀粉样蛋白的聚集.采用叔丁基过氧化氢诱导PC12细胞的氧化损伤后,应用棘脑通可提高PC12细胞活性,且浓度越高,效果越好.采用Erastin诱导SH-SY5Y细胞铁死亡后,应用棘脑通可提高SH-SY5Y细胞活性,且浓度越高,效果越好.将脂多糖用于BV2、RAW 264.7细胞后,应用棘脑通可降低白细胞介素1β的mRNA水平、核因子κB转录活性,且具有浓度依赖性.结论:棘脑通具有抗炎、抗氧化,保护神经细胞,诱导神经微丝表达,增强神经营养因子样的作用;该药通过以上作用发挥抗抑郁效果.

背景:干细胞移植是防治椎间盘退变的新思路,但移植后的干细胞如何顺利存活、增殖、分化,并恢复髓核细胞功能,是目前亟需克服的重点和难点.目的:探讨补肾活血方对脂肪间充质干细胞存活、增殖、类髓核分化的影响.方法:采用Transwell小室构建人脂肪间充质干细胞和人退变髓核细胞共培养模型.实验分为对照组、模型组、含药血清组、无药血清组,除对照组外,其余各组均用50 μmol/L叔丁基过氧化氢干预24 h,然后含药血清组和无药血清组分别予以含体积分数20%补肾活血方含药血清或无药血清的DMEM低糖完全培养液干预48 h,取下层脂肪间充质干细胞,甲苯胺蓝染色法观察蛋白聚糖合成水平,Real-Time PCR法检测Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9的mRNA表达,Western blot法检测SOX9的蛋白表达,乳酸脱氢酶法检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞活性氧水平,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况.结果与结论:①与对照组相比,模型组坏死脱落细胞比例增加,甲苯胺蓝染色变浅,Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA和SOX9蛋白表达水平下降(P<0.05);与模型组相比,补肾活血方含药血清可显著减轻细胞损伤并促进Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA和SOX9蛋白表达(P<0.05),但无药血清组改善不明显(P>0.05);②与对照组相比,模型组细胞毒性、活性氧水平、细胞衰老水平显著增加;与模型组相比,补肾活血方干预后共培养体系微环境得到明显改善(P<0.05),无药血清对共培养体系微环境改善作用不明显(P>0.05);③结果表明,补肾活血方可以促进脂肪间充质干细胞存活、增殖、类髓核分化.

该文研究桃叶珊瑚苷(aucubin)协同脂肪间充干细胞外泌体(adipose-derived stem cells-exosomes,ADSCs-exos)对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的人源髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)炎性损伤、衰老及凋亡的保护作用及机制.将TBHP诱导NPCs分为正常组、模型组、aucubin组、ADSCs-exos组及aucubin+ADSCs-exos组.细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖,细胞染色-β-半乳糖苷酶活性染色方法(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-Gal)检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immu-nosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)炎症因子的表达,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印记(Western blot)法检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原α1(collagen type Ⅱ alpha 1,COL2A1)、Toll 样受体 4(Toll-like recep-tor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的mRNA和蛋白表达情况.结果显示,与模型组比较,aucubin或ADSCs-exos组NPCs活性和增殖上升,G0/G1 期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增加,凋亡减少,细胞衰老比例降低,IL-1β和TNF-α水平下降,TLR4 和NF-κB mRNA及蛋白表达显著减少,IL-10 水平上升,aggrecan和COL2A1 mRNA及蛋白表达均升高;与aucubin或ADSCs-exos单独处理组比较,aucubin+ADSCs-exos组NPCs活性和增殖进一步上升,G0/G1 期细胞比例进一步降低,S期细胞比例进一步增加,凋亡水平和细胞衰老比例都进一步降低,IL-1β和TNF-α水平,TLR4 及NF-κB mRNA和蛋白表达水平均进一步下降,而IL-10 和aggrecan、COL2A1 mRNA及蛋白水平均进一步上升.综上所述,aucubin和ADSCs-exos均能通过抑制炎症反应,减少NPCs凋亡和衰老,促进细胞活性、增殖以及细胞外基质(ECM)的合成而发挥保护作用,其作用机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,而两者联合应用,可以对保护作用起协同增效的作用.