目的:分析大骨节病（KBD）患者沉默信息调节因子2相关酶类1（SIRT1）的表达及其与软骨细胞凋亡的关系。方法:从青海省KBD病区贵德县选取20例KBD患者作为KBD组，同时在病区选取年龄和性别匹配的40例健康受试者作为对照组。采集研究对象的空腹肘静脉血，采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测外周血SIRT1及硒蛋白基因[谷胱甘肽过氧化酶（GPX）2、GPX3、硫氧还蛋白还原酶（TXNRD）1、TXNRD3、碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅰ（DIO1）、硒磷酸合成酶2（SPS2）]mRNA水平；并采用曲线拟合法进行KBD患者外周血SIRT1与硒蛋白基因表达关联分析。同时，体外培养人正常软骨细胞，分为对照组（未经任何处理）、单纯白藜芦醇（RES）组（验证RES对SIRT1的激活作用）、叔丁基过氧化氢（tBHP）损伤组（软骨细胞氧化损伤模型）和RES保护组（RES预保护后进行tBHP损伤），采用real-time PCR检测各组细胞SIRT1，硒蛋白基因及凋亡相关基因[B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、BCL2相关X蛋白（BAX）、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤抑制基因P53]mRNA水平。结果:人群研究中，KBD组外周血SIRT1 mRNA水平（1.12 ± 0.38）低于对照组（1.87 ± 0.97），差异有统计学意义（ t = 3.31， P = 0.002）。经曲线拟合分析，KBD组外周血GPX3、TXNRD1和TXNRD3 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均有所升高（ R2 = 0.48、0.66、0.95，均 P < 0.001）；DIO1 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高呈现先下降后上升的趋势（ R2 = 0.51， P = 0.024）；GPX2、SPS2 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均未见显著变化趋势（ R2 = 0.16、0.12， P = 0.064、0.114）。细胞实验中，与对照组（1.00 ± 0.10）比较，单纯RES组SIRT1 mRNA水平（1.79 ± 0.07）较高（ P < 0.05）。与tBHP损伤组比较，RES保护组硒蛋白基因GPX3、TXNRD1、TXNRD3、DIO1 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）；凋亡相关基因BAX、P53 mRNA水平及BAX/BCL2比值均较低，BCL2、NF-κB p65 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）。 结论:KBD患者SIRT1低表达；RES激活SIRT1后可能通过上调硒蛋白基因表达来增强软骨细胞抗氧化能力，从而抑制软骨细胞凋亡。

目的:探讨虾青素（astaxanthin，AST）是否通过激活沉默信息调节因子2相关酶类1（silent mating type information regulation 2 homolog-1，SIRT1）信号通路下调动力相关蛋白1（dynamin-related protein 1，Drp1）介导的线粒体分裂从而减轻对比剂急性肾损伤（contrast-induced acute kidney injury，CI-AKI）。方法:将40只体重160~180 g雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成5组：假手术组（Sham组）、对比剂损伤组（CM组）、虾青素干预组（AST+CM组）、SIRT1抑制剂Ex527干预组（Ex527+CM组）、虾青素联合Ex527干预组（AST+Ex527+CM组）。造模72 h后行心脏取血后处死大鼠并收集肾脏组织进行后续检测。检测各组血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平，同时检测氧化应激相关指标总超氧化物歧化酶（T-SOD）及丙二醛（MDA）含量；HE染色观察肾脏病理改变；透射电镜观察线粒体形态及数量；冰冻切片活性氧（ROS）染色检测ROS含量；TUNEL染色检测细胞凋亡水平；Western印迹检测SIRT1、p53、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、Drp1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平。结果:（1）与CM组比较，AST+CM组Scr和BUN含量较低，T-SOD含量较多，MDA含量较少，而Ex527+CM组T-SOD含量较少，MDA含量较多（均 P<0.05）。（2）与CM组比较，AST+CM组ROS表达量较低，Ex527+CM组ROS表达量较高（均 P<0.05）。（3）与CM组比较，AST+CM组凋亡细胞数量较少，而Ex527+CM组凋亡细胞数量较多（均 P<0.05）。（4）与CM组比较，AST+CM组SIRT1、PGC-1α及Bcl-2蛋白表达量均较高，p53、Drp1及Bax蛋白表达量均较低，Ex527+CM组SIRT1、PGC-1α及Bcl-2蛋白表达量均较低，p53、Drp1及Bax蛋白表达量均较高（均 P<0.05）。 结论:虾青素可以通过激活大鼠SIRT1通路抑制Drp1介导的线粒体分裂从而减轻CI-AKI。

目的 研究沉默信息调节因子2 相关酶类7(silent information regulator 2 related enzyme 7,SIRT7)对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖和迁移的调控作用,并探讨可能的分子作用机制.方法 体外培养HPASMCs建立低氧模型.通过慢病毒介导的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默SIRT7在HPASMCs中的表达.实验分为4 组:常氧对照组、低氧组、低氧+LV-sh-Ctrl组和低氧+LV-sh-SIRT7 组.低氧+LV-sh-Ctrl组HPASMCs感染对照重组腺病毒LV-sh-Ctrl,然后进行低氧处理.低氧+LV-sh-SIRT7 组HPASMCs感染表达SIRT7 shRNA的重组腺病毒LV-sh-SIRT7,然后进行低氧处理.采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测SIRT7 的mRNA表达水平.采用Western blotting检测SIRT7、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转化生长因子β受体Ⅰ(transforming growth factor-βreceptorⅠ,TβRⅠ)、Smad2 和Smad3 的蛋白表达量.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)实验检测细胞增殖.采用流式细胞术检测细胞凋亡.采用Transwell实验检测细胞迁移.结果 与常氧对照组比较,低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组SIRT7 表达水平显著升高(P＜0.01),细胞增殖和迁移水平显著提高(P＜0.01),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05);与低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组比较,低氧+LV-sh-SIRT7 组SIRT7 表达水平显著降低(P＜0.01),细胞增殖和迁移水平显著下降(P＜0.01),细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).与常氧对照组比较,低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组TGF-β1、TβRⅠ、p-Smad2 和p-Smad3 的蛋白表达量显著增加(P＜0.01);与低氧组和低氧+LV-sh-Ctrl组比较,低氧+LV-sh-SIRT7 组TGF-β1、TβRⅠ、p-Smad2 和p-Smad3 的蛋白表达量显著减少(P＜0.01).结论 基因沉默SIRT7 通过调控TGF-β1/Smad信号通路抑制缺氧诱导的HPASMCs增殖和迁移.

氧化应激在高血压的发生发展中起着重要作用.核因子E2相关因子2(Nrf2)属于转录因子cap'n'collar(CNC)家族成员,广泛存在于机体各个器官,是细胞氧化应激反应中的关键因子和中枢调节者.沉默信息调节因子2相关酶类1(Sirt1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的第三类组蛋白去乙酰化酶.Sirt1通过活化Nrf2促进抗氧化基因的表达,在预防和治疗高血压中发挥重要作用.现就Sirt1/Nrf2抗氧化应激在高血压中的保护作用予以综述.

目的 观察苍菊清肝降脂方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)、SIRT2和SIRT3表达的影响.方法 将40只SPF级雄性Wistar大鼠按照随机数字表分为4组,即正常组、模型组、苍菊清肝降脂方低剂量组及苍菊清肝降脂方高剂量组,每组各10只.正常组大鼠予普通饲料喂养;其余3组大鼠第1～2周予高脂低蛋白饲料,第3～4周予纯玉米粉饲料喂养,同时予40％四氯化碳橄榄油溶液1 mL/kg腹腔注射造模,每周2次.造模的同时,正常组及模型组大鼠分别予0.9％氯化钠注射液1 mI/100 g灌胃,苍菊清肝降脂方低剂量组及苍菊清肝降脂方高剂量组分别予相应浓度的苍菊清肝降脂方药液(每mL生药含量分别为0.45、0.90 g)1 mL/100 g灌胃,均每日1次,连续4周.4周后获取4组大鼠肝组织,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法和蛋白质印迹(Western blot)法检测肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA和蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA及蛋白表达均显著降低(P＜0.05);与模型组比较,苍菊清肝降脂方低剂量组及苍菊清肝降脂方高剂量组大鼠肝组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P＜0.05),苍菊清肝降脂方低剂量组与苍菊清肝降脂方高剂量组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 苍菊清肝降脂方可显著增加NASH大鼠肝脏组织SIRT1、SIRT2和SIRT3 mRNA和蛋白表达.

目的 探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达情况及可能的调控机制.方法 收集患儿肝脏标本并统计其临床资料;构建由甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)诱导的人正常肝细胞(L02)胆汁淤积模型;HE染色检测患儿肝脏的形态学改变;Real-time PCR、qRT-PCR测定患儿肝细胞线粒体DNA(mitochondral DNA,mtDNA)拷贝数和转录水平以及mtTFA和沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)通路相关mRNA水平的变化;Western blot测定mtTFA和SIRT1通路相关蛋白水平的变化.结果 统计病例资料结果显示,黄疸组肝功较对照组明显下降(P＜0.000 1);HE染色结果显示,黄疸组肝细胞形态结构紊乱,胆色素沉积,内见胆汁淤积;Real-time PCR、qRT-PCR结果显示,黄疸组肝细胞mtDNA拷贝数与转录水平显著下降(P＜0.01),mtTFA、SIRT1和氧化物酶体增殖物激活受体γy辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)mRNA水平明显降低(P＜0.05);Western blot检测结果显示,黄疸组肝细胞、GCDCA诱导的L02细胞中mtTFA与SIRT1蛋白水平均显著下降(P＜0.01),而PGC-1α差异无统计学意义(P＞0.05),SRT1720激动SIRT1后mtTFA蛋白的表达较前明显升高(P＜0.05).结论 mtTFA在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达显著下降,SIRT1信号通路可能对mtTFA的表达具有调控作用.

卵母细胞衰老及卵巢储备功能降低所造成的生育力下降是生殖领域的瓶颈问题,改善卵巢储备功能是提高不孕女性自然妊娠率及辅助生殖技术(ART)成功率的重要因素.沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)是调节卵子发生和细胞应激反应关键过程的重要参与者,可通过调控卵母细胞数量、改善卵母细胞质量、抑制氧化应激、调节线粒体功能等途径抑制卵母细胞衰老,提高卵巢储备功能,延长卵巢寿命,进而增加ART过程中的获卵数、成胚率及临床妊娠率.综述SIRT1通过抑制卵母细胞衰老改善卵巢储备功能的相关机制研究进展.

目的 研究miR-29c能否通过调控沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)的表达影响动脉粥样硬化(AS)进程中氧化应激及炎症反应.方法 采用ApoE-/-基因敲除小鼠(ApoE-/-),经适应性饲养,于6周龄时以高脂饲料喂养,构建AS模型(AS组);以C57BL/6J小鼠为正常对照组,给予普通饲料喂养.12周后取主动脉,检测miR-29c表达以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA水平、活性氧(ROS)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶水平.培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别转染miR-29c mimic和antagomir,以氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)(50 μg/ml)进行刺激,检测各组TNF-α表达、ROS、NADPH氧化酶水平.此外,实时PCR和Western blot检测oxLDL诱导的内皮细胞损伤模型中SIRT1 mRNA及蛋白表达水平变化,并进一步检测正常细胞转染miR-29c mimic与antagomir后SIRT1 mRNA及蛋白表达水平.结果 与正常组比较,AS组miR-29c表达及TNF-α mRNA、ROS、NADPH氧化酶水平均明显升高(P＜0.05).oxLDL刺激后,与.对照组相比,转染miR-29c an-tagomir细胞中TNF-α、ROS、NADPH氧化酶水平均明显降低(P＜0.05);与之相反,转染miR-29c mimic细胞中TNF-α、ROS、NADPH氧化酶水平明显升高(P＜0.05).此外,oxLDL刺激HUVEC后,细胞的SIRT1 mRNA与蛋白表达水平均有所降低(P＜0.05).然而,正常细胞转染miR-29c mimic和antagomir后结果显示在SIRT1 mRNA水平上差异无统计学意义(P＞0.05),而SIRT1蛋白表达水平有差异,且差异有统计学意义(P＜0.05),提示miR-29c对SIRT1的调控可能处于翻译后水平.结论 miR-29c可下调SIRT1表达进而增强AS进程中氧化应激及炎症反应.

目的 探讨不同浓度米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞增殖及凋亡的影响和作用机制.方法 (1)U87和LN229细胞设对照组(DMSO处理),5μmol/L米诺环素组和10μmol/L米诺环素组,分组处理72 h后采用MTT法检测细胞增殖水平,免疫荧光标记检测细胞自噬蛋白微管相关蛋白l轻链3B亚基(LC3B)表达水平,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达变化.(2)构建沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)-shRNA载体,观察敲低SIRT1表达后,不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬的影响.结果 (1)与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L米诺环素组细胞增殖能力下降,免疫荧光标记显示胞浆内自噬标记蛋白LC3B的表达增多,Western blot结果显示哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)水平显著降低,自噬基因相关蛋白5(Atg5)、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α亚基(p-AMPKα)、SIRT1水平显著增加(P<0.05).与对照组相比,10μmol/L米诺环素组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70s6k)水平显著降低,活化形式的Caspase-3(Cleaved caspase-3)水平显著增加(P<0.05),而5μmol/L米诺环素组除Cleaved Caspase-3表达水平下降外其他凋亡相关蛋白水平未见显著变化(P>0.05).(2)敲低SIRT1表达后,shSIRT1组mTOR和LC3B表达水平较对照组明显下降;而经过米诺环素处理后,mTOR的表达出现明显升高,而LC3B表达水平仅部分恢复.结论 5、10μmol/L的米诺环素均能有效抑制人类胶质瘤U87和LN229细胞的生长,其机制可能与AMPK/SIRT1通路诱导细胞自噬和p70s6k/Bcl-2通路诱导细胞凋亡有关.

目的 探讨雷帕霉素对结肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路的影响.方法 HCT-116细胞分别加入0、2、4、8μg/mL的雷帕霉素处理24、48、72 h,采用MTT法和RT-PCR法分别检测细胞增殖情况和沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)、AMPK mRNA的表达.HCT-116细胞分别加入0、2、4、8μg/mL的雷帕霉素处理24 h,采用膜联蛋白V/碘化丙啶双染法和Western blot法分别检测细胞凋亡和SIRT1、AMPK蛋白表达.另取HCT-116细胞分为对照组和转染组(转染SIRT1短发夹RNA),比较两组细胞增殖及AMPK蛋白表达.结果 雷帕霉素可呈浓度依赖和时间依赖抑制HCT-116细胞的增殖,降低SIRT1、AMPKmRNA表达(P＜0.05).雷帕霉素可呈浓度依赖促进细胞凋亡,降低SIRT1、AMPK蛋白表达(P＜0.05).转染组细胞AMPK蛋白表达量和细胞增殖能力低于对照组(P＜0.05).结论 雷帕霉素可能通过降低SIRT1表达和调节AMPK通路抑制结肠癌细胞的增殖,并促进其凋亡.