目的:分析陕西省首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1猪流感病毒（EA H1N1 SIV）的基因特征。方法:采集患者咽拭子标本，接种MDCK细胞进行病毒分离获得毒株，采用全基因组深度测序方法获得分离株的8个基因节段序列，通过GenBank数据库中Blast程序进行核苷酸同源性分析，构建系统进化树，分析病毒基因特征。结果:病例咽拭子标本经实验室确诊为EA H1N1 SIV，后分离毒株命名为A/Shaanxi-Weicheng/1351/2022（H1N1v）。同源性分析显示，该分离株的PB2、NP、HA、NA和M基因均与A/swine/Beijing/0301/2018（H1N1）核苷酸同源性最高，分别为98.29%、98.73%、97.41%、97.52%和99.08%。进化树显示，该分离株属于G4基因型EA H1N1 SIV，其中PB2、PB1、PA、NP和M基因来自pdm/09 H1N1，HA和NA基因来自EA H1N1，NS基因来自三源重配H1N1。其HA蛋白裂解位点为IPSIQSR↓G，为低致病性流感病毒的分子特征。NA蛋白未出现与神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。PB2蛋白701N、PA蛋白P224S突变、NP蛋白Q357K突变、M蛋白P41A突变和NS蛋白92D均说明其对哺乳动物的适应性增强。结论:该患者为陕西省首例人感染G4基因型EA H1N1 SIV病例，该病毒为低致病性，但其对哺乳动物的适应性增强，需要加强对此类SIVs的监测。

序贯免疫接种是在当前COVID-19疫情严重时期，解决疫苗短缺、应对新型冠状病毒突变、提高疫苗效力的特殊手段之一。本文以世界卫生组织授权的新型冠状病毒疫苗(新冠疫苗)为主，就目前采用灭活疫苗初次免疫+重组蛋白疫苗/载体疫苗/mRNA疫苗加强免疫、载体疫苗初次免疫+mRNA疫苗加强免疫，以及不同剂型的mRNA疫苗互为初次和加强免疫的5种新冠疫苗序贯免疫接种方式的研究和临床试验进行综述。多项研究结果表明，异源序贯接种策略安全有效，接种者获得的免疫原性和有效性超出其中任何一种疫苗的同源接种，且在对抗新型冠状病毒变异株方面也有一定的效力。

目的:了解云南省蝙蝠体表寄生蛛蝇中肯科伊病毒(Kaeng Khoi virus，KKV)的感染情况。方法:2014年在保山市和2017年在瑞丽市采集蝙蝠体表寄生蛛蝇标本并进行鉴定，应用细胞组织培养法进行病毒分离，对阳性分离物进行序列扩增测序，对病毒全基因序列进行同源性和系统进化分析。结果:用蛛蝇标本研磨上清液接种BHK-21细胞，从瑞丽市和保山市蛛蝇标本分离到3株阳性分离物(WDBC1704、WDBC1710和BSBC1406)，均能使BHK-21细胞出现圆缩、脱落的细胞病变。经RT-PCR和高通量测序扩增后，获得3株阳性分离物的全基因组序列。系统进化分析显示3株阳性分离物的S、M、L基因均与泰国分离的KKV原型株PSC-19在同一进化支。本次分离的3株KKV与云南省既往分离株WDBC1403亲缘关系最近，其中BSBC1406株又形成一个独立的小分支。序列对比显示3株分离株之间在M基因上存在较大差异，BSBC1406与其他2株相似度仅为78.0%~78.1%，开放阅读框区中Gc蛋白的氨基酸相似度均为85.3%。结论:从云南蝙蝠寄生蛛蝇中新分离的3株KKV与原型株有较大差异，特别是BSBC1406株与其他分离株存在一定差异，可能已发生了变异，应加强云南省媒介昆虫携带KKV的监测及其与人类疾病关系的研究。

目的:研究沧源县蠓携带版纳病毒的全基因及其遗传进化特征。方法:2018年在沧源县采集蠓，研磨后将上清液接种BHK-21细胞进行病毒分离的同时用宏转录组学方法检测蠓携带病毒情况，用Perl、Mafft等软件进行病毒序列比对、同源性和分子遗传进化分析。结果:通过宏转录组学方法，从CYC1801组中获得1株版纳病毒的全基因序列，对全基因进行分析显示，节段4和节段7与越南株亲缘关系较近，其余节段均与中国株亲缘关系较近，根据节段12基因序列的系统进化分析，CYC1801与A2基因亚型处于同一进化分支，属于A2型版纳病毒。结论:沧源县蠓携带有版纳病毒并可能作为传播媒介引起疾病流行，需加强监测及防控。

目的:分析河北省D8基因型麻疹病毒输入性疫情流行及基因型特征。方法:对麻疹监测病例的流行特征进行分析，对采集的急性期咽拭子标本进行荧光定量RT-PCR鉴定、病毒分离培养及核苷酸序列测定和分析。结果:监测到输入性D8基因型麻疹病例36例，主要集中在邯郸市的8个县（区），其中成安县确诊病例数最多，占报告病例数的58.33%（21/36），所有病例均出现了发热和出疹症状，2岁以下病例及无免疫史病例分别占全部发病数的55.55%（20/36）和86.11%（31/36），发生肺炎的儿童数占患病儿童总数的44.12%（15/34）。经基因亲缘性关系分析，输入性D8基因型与D8基因型WHO参考株（D8-Manchester.UNK/30.94）的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~98.6%和97.3%，与我国本土基因型H1基因型参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为92.8%~93.1%和93.3%。结论:D8基因型麻疹病毒输入性疫情已造成河北省内的本土传播，需要进一步加强麻疹病毒的分子流行病学监测，及早发现和处置疫情，提高适龄儿童麻疹类疫苗的覆盖率和及时接种率，避免院内交叉感染。

目的 了解四川省绵阳市流感样病例(ILI)的病毒流行情况及乙型流感病毒(FluB)的基因进化特征.方法 收集2021-2022年绵阳市ILI咽拭子,采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术进行16种病原体筛查.FluB阳性样本接种犬肾细胞进行病毒分离培养.扩增分离株的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因并测序分析遗传进化、同源性及氨基酸位点变异.结果 共采集ILI样本332份,检出195份病毒感染阳性样本,检出率为58.73％(195/332),其中FluB阳性114份,检出率为34.34％(114/332),其次为人冠状病毒HKU 1(7.53％)、鼻病毒(6.93％)和呼吸道合胞病毒(6.63％).114份FluB阳性样本中成功分离并测序40株毒株,HA和NA基因序列分析显示,40株分离株均属于B/Victoria谱系,位于V1A.3a.1和V1A.3a.2进化分支.2个分支的病毒出现基因重组现象.HA和NA基因与参考疫苗株Washington/02/2019相比,同源性分别为99.22％～99.81％和98.64％～99.77％.与疫苗株相比,40株毒株的HA与NA基因存在多个氨基酸变异位点,但未发现耐药位点.结论 2021-2022年绵阳市ILI的样本中可以检出多种病毒.其中FluB是主要病原体,以V1A.3a.1和V1A.3a.2为优势流行株,HA和NA蛋白氨基酸多处位点发生突变.需加强该地区呼吸道病毒感染的持续监测.

新冠疫苗异源加强接种可以解决疫苗单一使用时保护效力降低的问题.灭活新冠疫苗联合重组腺病毒载体新冠疫苗(Ad5-nCoV)的序贯接种模式和Ad5-nCoV肌肉注射给药或雾化吸入式给药两种途径已被批准用于临床.本研究在小鼠模型中,系统对比分析了不同接种策略下小鼠体内抗原特异性T细胞、记忆B细胞(MBC)、抗体水平、抗体功能、黏膜免疫应答等关键指标以揭示作用机制.将接种组分为"磷酸盐缓冲液(PBS)对照组"(3×PBS组)、"2针灭活新冠疫苗+1针灭活新冠疫苗"同源加强接种组(3×INA组)、"2针灭活新冠疫苗+1针Ad5-nCoV肌肉注射组"[2×INA+Ad5(im)组]和"2针灭活新冠疫苗+1针 Ad5-nCoV滴鼻给药组"[2×INA+Ad5(in)组].结果显示:2×INA+Ad5(im)组与 2×INA+ Ad5(in)组异源接种诱导的抗体、Spike特异性T细胞、Spike+MBCs水平均显著高于 3×INA组同源接种,Ad5-nCoV在肌肉注射途径下诱导的Spike特异性T细胞、Spike+MBCs水平显著高于滴鼻给药途径.Ad5-nCoV滴鼻加强接种不仅明显诱导血清和支气管灌洗液免疫球蛋白A产生,同时诱导更多中性粒细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞向肺组织中募集.本研究系统对比分析了Ad5-nCoV经不同给药途径异源加强接种后诱导的疫苗特异性免疫应答差异,为包括新冠疫苗在内的多种抗感染疫苗提供了预防接种策略指导.

目的·制备甲型流感病毒H1N1亚型血凝素(hemagglutinin,HA)mRNA疫苗,并探讨不同加强免疫策略的免疫保护作用.方法·以荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)为报告基因,构建Fluc mRNA-脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)疫苗,通过小鼠活体成像实验鉴定Fluc mRNA-LNP疫苗肌内注射后在体内的表达情况.进一步构建H1N1亚型(A/Michigan/45/2015)HA(M15-HA)的 mRNA-LNP疫苗,将20、10、5 和 1 μg M15-HA mRNA-LNP疫苗通过肌内注射分别免疫不同剂量组小鼠2次(间隔3周),酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠第2次免疫2周和4周后血清抗体滴度,血凝抑制试验检测功能性抗体水平.第2次免疫后40d,采用1μgmRNA疫苗或10 μg HA蛋白亚单位疫苗对1 μg剂量免疫组小鼠进行加强免疫,接种2周和4周后用ELISA和血凝抑制试验分别检测特异性抗体及功能性抗体水平.结果·活体成像实验结果显示,小鼠接种Fluc mRNA-LNP疫苗1 d后即能在小鼠体内检测到荧光素酶活性.制备获得的M15-HA mRNA-LNP疫苗2次免疫小鼠2周和4周后,所有剂量组小鼠的特异性抗体水平均较免疫前显著上升(均P=0.000);血凝抑制试验结果显示,20 μg和10 μg剂量组的功能性抗体水平均较PBS对照组显著升高(均P＜0.05).对1 μg低剂量组小鼠进行HA蛋白或M15-HA mRNA-LNP的加强免疫后,均诱导产生了更高水平的特异性抗体和功能性抗体,并能维持较长时间;2种不同加强免疫策略之间差异无统计学意义.结论·成功制备M15-HA mRNA-LNP疫苗,显示出良好的免疫原性和抗体中和活性;低剂量mRNA疫苗免疫2次后,同源mRNA疫苗和异源蛋白疫苗加强免疫均可以诱导更强的免疫反应.

目的 分析福建省2005-2017年流行性腮腺炎(腮腺炎)的流行病学及病原学特征.方法 通过中国疾病预防控制传染病报告信息管理系统,收集2005-2017年福建省腮腺炎报告病例,主动搜索、访谈收集腮腺炎疫苗接种信息,对新发病例采集咽拭子标本进行腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)细胞培养、基因定型及基因序列分析.结果 2005-2017年福建省累计报告腮腺炎病例83 959例,年平均发病率为17.6/10万,2007年后发病率总体呈先上升后下降趋势,到2017年为监测以来的历史新低(7.5/10万);发病时间呈明显的季节性双峰特征,但第1个发病高峰(4-7月)有减弱趋势,而第2个发病高峰(10月至次年1月)有增强趋势;发病人群以学生、托幼儿童、散居儿童为主(占总病例数89.2％,5 814/6 517),其中5～9岁年龄组年平均发病数达2 527例(占总病例数38.8％);发病无明显的地域性特征.病原学监测表明福建省存在MuV G基因型病毒株的流行.序列分析发现2015年MuV G基因型病毒株在核苷酸上的突变导致了SH基因编码区6个氨基酸位点变异,进一步加大了与A型疫苗株在核苷酸及氨基酸上的同源性差异.结论 2005-2017年福建省腮腺炎发病逐年下降,预防工作需重点关注中小学生,MuV G基因型病毒株在福建省存在传播链,且在SH基因编码区发现部分氨基酸变异.需加强福建省腮腺炎流行病学及病原学监测工作.

目的 了解2015年1月南京市某小学一起流感暴发疫情致病流感病毒HA1基因的序列特征和变异特点,分析现有的流感疫苗株对人体的保护情况. 方法 对此次疫情采集的咽拭子标本采用荧光定量PCR对所提核酸进行甲型/乙型流感病毒的检测,阳性核酸进一步分型检测.阳性咽拭子使用MDCK细胞进行病毒分离,阳性病毒培养液提取核酸,RT-PCR扩增HA1基因片段并测序.序列分析使用MEGA 5.2软件邻接法构建系统进化树. 结果 经荧光定量PCR鉴定,采集的10例病例咽拭子中,5例为B型Yamagata系流感病毒阳性.所分离的毒株间HA1的核苷酸同源性为100％;与2015年度国内外疫苗推荐株高度同源,序列相似性达99.5％以上.与国内外疫苗株相比多个位点发生了氨基酸突变,其中,D196N和R141G位于抗原决定簇;196位增加了一个糖基化位点. 结论 此次疫情流行的B型Yamagata系流感流行株与同年度国内外疫苗株HA1基因同源性高,疫苗有很好的保护作用,建议在校学生主动接种预防;HA1区域的氨基酸变异涉及抗原决定簇,需加强监测.