基孔肯雅病毒(Chikungunya virus，CHIKV)隶属披膜病毒科的甲型病毒属，可通过埃及伊蚊和白蚊伊蚊传播，主要引起以高热、皮疹、多发性关节炎/多关节痛为主要临床症状的基孔肯雅热(Chikungunya fever，CHIKF)，是全球关注的重要公共卫生威胁。目前仍无针对基孔肯雅病毒的疫苗和有效的抗病毒药物。本篇综述简要概述基孔肯雅病毒的基因组与流行病学特征、主要抗原的免疫应答特点及疫苗的最新研发进展。

目的:了解云南省蝙蝠体表寄生蛛蝇中肯科伊病毒(Kaeng Khoi virus，KKV)的感染情况。方法:2014年在保山市和2017年在瑞丽市采集蝙蝠体表寄生蛛蝇标本并进行鉴定，应用细胞组织培养法进行病毒分离，对阳性分离物进行序列扩增测序，对病毒全基因序列进行同源性和系统进化分析。结果:用蛛蝇标本研磨上清液接种BHK-21细胞，从瑞丽市和保山市蛛蝇标本分离到3株阳性分离物(WDBC1704、WDBC1710和BSBC1406)，均能使BHK-21细胞出现圆缩、脱落的细胞病变。经RT-PCR和高通量测序扩增后，获得3株阳性分离物的全基因组序列。系统进化分析显示3株阳性分离物的S、M、L基因均与泰国分离的KKV原型株PSC-19在同一进化支。本次分离的3株KKV与云南省既往分离株WDBC1403亲缘关系最近，其中BSBC1406株又形成一个独立的小分支。序列对比显示3株分离株之间在M基因上存在较大差异，BSBC1406与其他2株相似度仅为78.0%~78.1%，开放阅读框区中Gc蛋白的氨基酸相似度均为85.3%。结论:从云南蝙蝠寄生蛛蝇中新分离的3株KKV与原型株有较大差异，特别是BSBC1406株与其他分离株存在一定差异，可能已发生了变异，应加强云南省媒介昆虫携带KKV的监测及其与人类疾病关系的研究。

目的:分析天津市1例输入性基孔肯亚病毒（CHIKV）的全基因组序列特征与进化，为CHIKV的监测与防控提供科学依据。方法:收集2019年11月4日于天津市第二人民医院采集的血清标本200 μl提取核酸，设计叠瓦式引物扩增CHIKV基因组全长，然后利用Illumina Miniseq平台进行高通量测序。结果:本研究的CHIKV属于ECSA基因型印度洋分支，与大部分中国分离株一致，相似性为92.72%~99.86%，在国际上与巴基斯坦分离株亲缘关系最近（99.74%）。天津CHIKV在关键位点E1-D284E和E2-I211T处有两处突变，与ECSA基因型一致。此外，天津CHIKV还具备两个关键毒力位点E2-12T和E2-82G，以及nsP3-R524Opal终止子突变。结论:天津CHIKV具备较强毒力，且具备在白纹伊蚊中传播的能力，提示应继续加强对CHIKV的监测。

目的 了解浙江省台州市2017-2022年实施新版病媒生物监测方案以来蚊虫种类、密度、季节消长及病毒携带状况,为媒介蚊虫防制及蚊媒传染病的预测预警提供科学依据.方法 在台州市9个县(市、区)设置监测点,每年4-11月分别采用诱蚊灯法和布雷图指数(BI)法开展成蚊和幼蚊生态学监测,2022年6-8月在路桥区采集成蚊并应用荧光定量PCR法检测登革病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、基孔肯亚病毒、黄热病毒和辛德毕斯病毒6种病毒.数据采用SPSS 20.0软件进行统计分析.结果 2017-2022年,台州市共布放诱蚊灯4800台夜,捕获雌蚊109 160只,平均蚊密度为22.74只/(灯·夜),其中三带喙库蚊76 799只,占70.35％,其次为淡色/致倦库蚊20 724只(18.98％).6-9月为成蚊活动高峰期.不同生境平均蚊密度以牲畜棚(养殖场)最高,为92.91只/(灯·夜).牲畜棚(养殖场)以三带喙库蚊为优势种,占83.08％,居民区等其他生境均以淡色/致倦库蚊为优势种(构成比均＞60％),不同生境蚊种构成比差异有统计学意义(x2=60 286.496,P＜0.001).幼蚊监测共调查居民户94 523户,平均BI值为16.94,4-11月平均BI值均＞5.阳性积水以闲置容器(碗、瓶、缸、罐)为主,占54.88％,轮胎/废旧轮胎伊蚊孳生率最高为37.37％.共检测淡色/致倦库蚊雌蚊1 050只,白纹伊蚊雌蚊1 140只,病毒检测结果均为阴性.结论 台州市居民区优势蚊种为淡色/致倦库蚊,牲畜棚(养殖场)蚊密度较高、优势蚊种为三带喙库蚊,4-11月均有登革热传播风险,需加强环境治理为主的综合性蚊虫防制措施,防止输入性或本地蚊媒传染病传播流行.

为调查云南省蝙蝠体表寄生虫蛛蝇中病原体的携带情况.采集蝙蝠体表蛛蝇标本,用细胞培养法分离病毒,对阳性分离物进行分子生物学鉴定,用RT-PCR(Reverse transcription PCR)、TCID50 (Tissue culture infective dose)、免疫荧光等实验对病毒的特性进行研究.2012年从勐腊县的棕果蝠(Rousettus leschenaulti)体表采集蛛蝇183只,利用节肢动物线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)的通用引物用PCR方法鉴定为蛛蝇科的Eucam psi poda sundaica.从这些蛛蝇中分离到1株阳性分离物MLBC1215,能引起金黄地鼠肾细胞(Golden hamster kidney cell,BHK 21)和非洲绿猴肾细胞(African green monkey kidney cell,VeroE6)出现圆缩、脱落的细胞病变(Cytopathic effect,CPE).用RT-PCR方法扩增序列,测序结果显示MLBC1215病毒株为三节段RNA病毒,各基因组编码区序列长度分别为S基因为975核苷酸,M基因为4 568核苷酸,L基因为6 866核苷酸,3个基因节段核苷酸序列所形成的进化树拓扑构图相似,MLBC1215病毒株的S、M和L基因均与1970年泰国分离的肯科伊病毒(Kaeng Khoi orthobunyavirus,KKV)(PSC-19)处于同一进化分支.MLBC1215株的S、M、L片段与泰国PSC 19株的核苷酸的同源性分别为97.9％、94.4％和95.3％;氨基酸的同源性分别为98.7％、96.5％和98.4％.MLBC1215株在BHK-21细胞生长到60h达到最高滴度,TCID50为104.8/0.1ml,随后病毒滴度逐渐下降,至144h TCID50为10 3.6/0.1ml.MLBC1215株对小白鼠的主要器官均能引起病理改变,从而导致小白鼠发病死亡.采集的33份人血清中有9份IgG抗体与MLBC1215株有反应,检测结果为阳性,抗体滴度为4份1∶20,4份1∶40,1份1∶80.本次研究证实云南省腊勐县蝙蝠体表吸血昆虫蛛蝇携带布尼亚病毒目KKV.

目的 掌握中山地区蚊类的种群结构、季节消长及携带虫媒病毒情况,为蚊虫防治提供技术支持和决策依据.方法 2016年10月-2017年10月,采用人工小时法采集蚊类样本,进行形态学鉴定,无法通过形态学鉴定的蚊类,利用DNA条形码技术进行分子鉴定.提取蚊类RNA,利用荧光RT-PCR和普通RT-PCR方法检测登革病毒、基孔肯雅病毒、乙脑病毒、寨卡病毒及其他黄病毒属病毒.收集监测点附近不同水体中各龄期幼虫及蛹,用于种类调查,不计入季节消长和虫媒病毒检测.结果 共采集成蚊2076只,收集各龄期幼虫及蛹484只,经形态学鉴定隶属于3亚科6属13种.白纹伊蚊及致倦库蚊为优势蚊种,分别占总数的61.13％和34.06％.成蚊密度高峰期为6月,1月最低.未检出虫媒病毒.结论 初步掌握了中山地区蚊类的种群结构、季节消长及携带虫媒病毒情况.应对中山地区蚊类及其携带虫媒病毒情况进行持续调查.

基孔肯雅病毒(CHIKV)是一种披膜病毒科甲病毒属病毒,主要传播媒介为伊蚊,无特异性的治疗方法和疫苗.我国人群对CHIKV普遍易感,近年来屡有输入性病例报道,是一种潜在严重威胁我国南方地区公共安全的虫媒病毒.当前CHIKV感染实验室诊断主要包括病毒分离、核酸检测和抗体检测等,本文就基孔肯亚病毒实验室诊断研究进展作一综述.

目的 建立苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,为埃博拉病毒分型检测提供技术储备.方法 比较15株埃博拉病毒基因序列的保守性和特异性,设计3对引物和探针用于苏丹型埃博拉病毒核酸检测.使用不同浓度的苏丹型埃博拉病毒RNA对照进行检测,确定最佳的引物探针组合、引物探针用量和Mg2+用量,建立苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR方法.对建立的方法进行灵敏度、特异性和精密度分析,并用于广东口岸非洲入境发热人员血清样本的筛查.结果 经筛选,设计的引物、探针Ebv-S-2F/Ebv-S-2R/Ebv-S-2P对1.6×102～1.6×105拷贝/ml的阳性对照检出率为100.0％,是最佳的引物探针组合.优化后的实时荧光PCR体系引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L.灵敏度为80拷贝/ml,重复性好,特异性强,对扎伊尔型、科特迪瓦型、本迪布焦型和莱斯顿型埃博拉病毒阳性对照,马尔堡病毒阳性对照、登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒等检测结果均为阴性.结论 建立的苏丹型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别.

目的 建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型.方法 比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博拉病毒特异性引物和探针用于核酸检测,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR分别使用FAM、VIC、Texas red、FAM、VIC荧光基团标记探针.分2管对5种埃博拉病毒进行多重实时荧光PCR检测,其中管1检测EBOZ、EBOS和EBOC,管2检测EBOB和EBOR.使用不同浓度的埃博拉病毒阳性对照质粒进行检测,确定最佳的引物、探针用量和Mg2+用量,建立5种埃博拉病毒分型检测的多重实时荧光PCR方法.同时,对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析.结果 优化的多重实时荧光PCR方法 的引物和探针终浓度分别为160 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L.建立的方法灵敏度为103拷贝/ml,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR实时荧光PCR检测10次的CV值分别为0.16％、0.25％、0.24％、0.22％、0.28％.埃博拉病毒多重实时荧光PCR对马尔堡病毒阳性对照,登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒等阳性毒株检测结果为阴性.结论 建立的5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别.

为掌握三沙市永兴岛蚊虫种类构成、密度分布和季节消长情况, 为病媒生物控制提供科学依据, 2016年4月至2017年3月, 采用诱蚊灯和人工叮咬法对永兴岛生活办公区、餐饮区、码头作业区和民工居住区4类监测点开展成蚊监测, 将监测到的成蚊种属鉴定后进行病原体检测.结果共捕获成蚊2 030只,经鉴定隶属3属5种, 优势种为致倦库蚊, 其次为白纹伊蚊、三带喙库蚊、骚扰阿蚊和褐尾库蚊.不同监测点蚊类构成比存在差异, 生活办公区致倦库蚊构成比最高, 民工居住区三带喙库蚊构成比最高.成蚊密度在5、 6月份和8、 9月份各有1个高峰, 12月份蚊虫密度最低 (5.58只/人·小时).风险评估显示蚊类叮咬、骚扰风险为极高风险, 发生流行性乙型脑炎、黄热病、基孔肯雅热、寨卡病毒病、登革热及重症登革热为中等风险.