土贝母苷甲为葫芦科植物土贝母中含量较大，水溶性、稳定性较好的三萜皂苷类活性成分，对肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤具有广泛的抑制作用。其机制主要与抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭转移、诱导细胞自噬、抑制肿瘤血管生成等途径相关。

目的:在HPLC法检测乳癖清胶囊中12个成分的基础上,利用灰色关联度分析(GRA)联合熵权TOPSIS法评价其综合质量.方法:采用Shimadzu C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为210、275、230 nm.采用多元统计分析法挖掘影响乳癖清胶囊质量差异的标志性成分,并通过GRA和熵权TOPSIS法对其进行综合质量评价.结果:方法学考察结果符合现行药典要求;多元统计分析结果显示15批样品聚为3类,橙皮苷、芸香柚皮苷、柴胡皂苷d和土贝母苷甲是影响乳癖清胶囊产品质量的主要潜在标志物.GRA和熵权TOPSIS法显示乳癖清胶囊的质量呈现一定批间差异,且2种方法结果基本一致.结论:GRA与熵权TOPSIS融合模型操作便捷、客观全面,可为乳癖清胶囊的品质评价和质量控制提供参考.

目的:探讨中药土贝母主要成分土贝母皂苷甲(TBMS Ⅰ)通过激活Egr1/p21信号通路对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响.方法:体外培养MCF-7细胞,并把细胞分为空白组、TBMS Ⅰ高剂量组(20 μg/ml)、TBMS Ⅰ中剂量组(15 μg/ml)、TBMS Ⅰ低剂量组(10 μg/ml),使用对应浓度的TBMSⅠ干预MCF-7细胞.干预24、48、72 h后,使用CCK-8法检测细胞增殖情况.干预MCF-7细胞48 h后,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡、细胞周期分布情况.采用Western blotting、qRT-PCR检测各组细胞Egr1、p21蛋白及mRNA表达.结果:干预24、48、72 h后,TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组的MCF-7细胞得到抑制,且抑制率呈时间与剂量依赖性.干预48 h后,TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组、TBMS Ⅰ低剂量组MCF-7细胞的凋亡率高于空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组、TBMS Ⅰ低剂量组G0/G1期细胞占比低于空白组,G2/M期细胞高于空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组、TBMS Ⅰ低剂量组Egr1及p21蛋白、mRNA表达均高于空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:TBMS Ⅰ能够激活乳腺癌细胞MCF-7中Egr1/p21信号通路,诱导Egr1、p21表达,引起MCF-7细胞G2/M期周期阻滞,诱导MCF-7细胞凋亡.

目的 采用HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中9个主要成分的含量.方法 采用Venusil MP C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,温度30℃,进样量10μL.结果 淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙、棕矢车菊素、异泽兰黄素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为8.86 ～ 177.20、2.79 ～ 55.80、10.08 ～201.60、2.47 ～ 49.40、5.56 ～111.20、1.12 ～22.40、4.54 ～90.80、1.98 ～ 39.60、1.86～37.20 mg·L-1,r分别为0.9998、0.9997、0.9999、0.9993、0.9996、0.9999、0.9995、0.9997、0.9998;9种成分的平均加样回收率分别为99.54％、97.84％、100.16％、98.74％、97.79％、98.06％、99.31％、98.50％、97.71％,RSD分别为1.19％、1.40％、0.75％、0.99％、1.66％、1.27％、0.94％、1.13％、1.58％.结论 所用方法操作简便、重复性好、精密度高、稳定性好,可同时测定乳增宁胶囊中9种有效成分的含量.

目的 建立不同产地土贝母药材中皂苷类成分的特征图谱,并测定其中3种主要皂苷的含量,为该药材质量控制提供参考依据.方法 采用Thermo Hypersil GOLD aQ C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,进样量10 μL,柱温30℃,检测波长214nm,建立15批土贝母HPLC特征图谱,并进行相似度评价、主成分分析及聚类分析;采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行等度洗脱测定药材中3种皂苷类成分的含量.结果 建立的15批土贝母特征图谱共标定6个共有峰,相似度为0.845～0.98;主成分分析及聚类分析均将15批药材分为两类,与相似度评价结果一致;得到影响药材质量的3个皂苷成分(土贝母苷甲、乙、丙)并对其进行了含量测定,结果15批药材都符合药典含量限度的要求.结论 本研究所建立的HPLC特征图谱结合含量测定以及相似度评价,主成分分析,聚类分析等评价方法,可以全面、准确和有效地用于土贝母药材的质量评价.

土贝母苷甲(Tubeimoside 1,TBMS1),简称苷甲,是一种独特的,由贝号苷元和4种单糖(葡萄糖、鼠李糖、木糖和阿拉伯糖)组成的五环三萜皂苷.以前的研究证实,苷甲具有抗人免疫缺陷病毒的活性.本文研究苷甲对单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)1型和2型增殖和基因组复制的影响.从土贝母块茎中提取、分离苷甲(在本实验中使用的纯度大于95％),以空斑法测定病毒滴度,通过观察致细胞病变效应和空班形成抑制试验来检测苷甲的抗病毒活性,用实时定量PCR技术检测苷甲对HSV-1和HSV-2基因组复制的影响.结果 显示,苷甲显著抑制HSV-1和HSV-2毒株的增殖,显著抑制HSV-1和HSV-2的UL27、UL52和UL54三个基因的拷贝数,且其抑制作用呈明显量效依赖关系.无毒高浓度(0.39μg/mL ～ 0.78μg/mL)的苷甲对阿昔洛韦(acyclovir,ACV)耐药毒株HSV-1/106的增殖也显示抑制活性.本研究结果揭示苷甲具有显著抑制HSV-1和HSV-2增殖及基因组复制的活性,无毒高浓度苷甲对HSV-1/106耐药毒株的增殖也显示抑制活性.

目的 制备土贝母皂苷甲长循环脂质体(tubeimosideA long-circulating liposomes,TA-LC-Lipo),并进行体外性质考察.方法 乙醇注入法制备TA-LC-Lipo;采用HPLC测定包封率及体外释放率;通过Marlvern激光粒径分析仪测定粒径和Zeta电位;肉眼观察法和紫外分光光度法评价其溶血作用.结果 确定处方为大豆磷脂浓度10 mg·mL-1、药脂比1:10、大豆磷脂:胆固醇=4:1、DSPE-PEG 2000的摩尔含量为5％.制备得到的TA-LC-Lipo的平均粒径、PDI、电位、包封率分别为123.0 nm,0.134,-1.20 mV,86.2％.结论 制得的TA-LC-Lipo粒度分布均匀,包封率较高,有较好的缓释作用,并能有效改善土贝母皂苷甲的溶血现象.

建立土贝母药材UPLC指纹图谱,并采用一测多评法(QAMS)测定其中3种皂苷类成分的含量,为土贝母药材质量评价提供依据.采用Waters Cortecs T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温30℃,进样量1μL,建立土贝母药材UPLC指纹图谱,并采用相似度计算、聚类分析和主成分分析法对指纹图谱进行评价.以土贝母苷甲为内参物,测定土贝母苷乙、土贝母苷丙的相对校正因子,利用相对校正因子计算含量,建立一测多评法,并将一测多评的计算结果与外标法(ESM)测定结果进行比较,从而确定一测多评的准确性及可行性.结果 显示,19批土贝母药材指纹图谱有4个共有峰,相似度在0.754～1.000,聚类分析及主成分分析将19批药材分为3类,与相似度评价结果一致;采用一测多评法计算的19批土贝母药材土贝母苷乙、土贝母苷丙的含量与外标法测定的实际含量的相对偏差均小于5.0％,说明2种方法无明显差异.因此,UPLC指纹图谱结合一测多评法可以有效用于土贝母药材的质量评价.

为了探究土贝母皂苷甲(TBMSⅠ)对A549/DDP细胞系耐药性及其对凋亡相关基因表达的影响,本研究使用了CCK-8法检测顺铂和土贝母皂苷甲单独处理A549/DDP细胞的IC50,并计算土贝母皂苷甲作用于A549/DDP细胞的无毒浓度.结果 显示,土贝母皂苷甲无毒浓度与顺铂联用后得耐药逆转倍数约为2倍;流式细胞术结果表明,细胞凋亡集中于晚期凋亡,且随着联用药物浓度提高,晚期凋亡细胞数量增多;q-PCR结果表明,药物联用组的凋亡相关基因Bax、Bcl-2、p53和Caspase-3的mRNA相对表达量均高于药物单独作用组.土贝母皂苷甲对A549/DDP细胞系具有逆转其耐药性的作用,其机制可能与p53及其相关通路的凋亡基因有关.本研究为临床抗癌药物的联合使用提供了更多理论和试验依据.