土贝母苷甲为葫芦科植物土贝母中含量较大，水溶性、稳定性较好的三萜皂苷类活性成分，对肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤具有广泛的抑制作用。其机制主要与抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭转移、诱导细胞自噬、抑制肿瘤血管生成等途径相关。

目的:采用HPLC法建立土贝母标准汤剂指纹图谱，并采用一测多评法对结构相似的3个有效成分含量进行测定，评价土贝母标准汤剂的质量。方法:采用HPLC法建立15批土贝母标准汤剂指纹图谱，色谱柱为Waters XBridge苯基柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱。以共有峰的相对峰面积为依据，进行聚类分析和主成分分析，并采用与指纹图谱相同的方法建立土贝母标准汤剂土贝母苷甲、乙、丙的一测多评法。结果:土贝母标准汤剂指纹图谱有14个共有峰，其中峰3为 L-色氨酸，峰11为土贝母苷乙，峰12为土贝母苷丙，峰13为土贝母苷甲；聚类分析和主成分分析将15批不同产地的土贝母标准汤剂分为3类；一测多评法通过系统适用性考察，与外标法测定结果无显著差异。 结论:该方法准确、可靠，专属性良好，可有效评价土贝母标准汤剂的质量。

目的:在HPLC法检测乳癖清胶囊中12个成分的基础上,利用灰色关联度分析(GRA)联合熵权TOPSIS法评价其综合质量.方法:采用Shimadzu C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为210、275、230 nm.采用多元统计分析法挖掘影响乳癖清胶囊质量差异的标志性成分,并通过GRA和熵权TOPSIS法对其进行综合质量评价.结果:方法学考察结果符合现行药典要求;多元统计分析结果显示15批样品聚为3类,橙皮苷、芸香柚皮苷、柴胡皂苷d和土贝母苷甲是影响乳癖清胶囊产品质量的主要潜在标志物.GRA和熵权TOPSIS法显示乳癖清胶囊的质量呈现一定批间差异,且2种方法结果基本一致.结论:GRA与熵权TOPSIS融合模型操作便捷、客观全面,可为乳癖清胶囊的品质评价和质量控制提供参考.

目的 探究土贝母苷甲(TBMS1)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系MDA-MB-468的影响,并探求其作用机制.方法 通过MTT实验测定TBMS1对细胞活性的影响并确定给药浓度,通过EDU细胞增殖实验测定TBMS1对细胞增殖能力的影响,通过细胞划痕实验测定TBMS1对细胞迁徙能力的影响,通过Transwell实验测定TBMS1对细胞侵袭能力的影响,通过Western Blot实验测定TBMS1作用于MDA-MB-468细胞的具体作用机制.结果 TBMS1对MDA-MB-468细胞的增殖、迁徙和侵袭能力呈剂量依赖性抑制.而Western Blot及挽救实验结果表明:TBMS1通过抑制AKT/NF-κB信号通路发挥作用.结论 TBMS1作为一种天然药物成分,在TNBC的治疗中显示出潜在的抗肿瘤活性,且具有较低的药物毒性.

目的:探讨中药土贝母主要成分土贝母皂苷甲(TBMS Ⅰ)通过激活Egr1/p21信号通路对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响.方法:体外培养MCF-7细胞,并把细胞分为空白组、TBMS Ⅰ高剂量组(20 μg/ml)、TBMS Ⅰ中剂量组(15 μg/ml)、TBMS Ⅰ低剂量组(10 μg/ml),使用对应浓度的TBMSⅠ干预MCF-7细胞.干预24、48、72 h后,使用CCK-8法检测细胞增殖情况.干预MCF-7细胞48 h后,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡、细胞周期分布情况.采用Western blotting、qRT-PCR检测各组细胞Egr1、p21蛋白及mRNA表达.结果:干预24、48、72 h后,TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组的MCF-7细胞得到抑制,且抑制率呈时间与剂量依赖性.干预48 h后,TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组、TBMS Ⅰ低剂量组MCF-7细胞的凋亡率高于空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组、TBMS Ⅰ低剂量组G0/G1期细胞占比低于空白组,G2/M期细胞高于空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).TBMS Ⅰ高剂量组、TBMS Ⅰ中剂量组、TBMS Ⅰ低剂量组Egr1及p21蛋白、mRNA表达均高于空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:TBMS Ⅰ能够激活乳腺癌细胞MCF-7中Egr1/p21信号通路,诱导Egr1、p21表达,引起MCF-7细胞G2/M期周期阻滞,诱导MCF-7细胞凋亡.

目的 测定16批不同产地土贝母中土贝母苷甲含量,确定土贝母含量高的产区,分析影响含量的因素.方法 采用《中国药典》2015版土贝母药材含量方法测定土贝母苷甲;以土贝母苷甲含量为指标用类平均聚类分析法将产地来源进行分类.结果 不同产地土贝母中苷甲含量在1. 234%~3.174%范围内,符合药典要求;聚类分析可将16个产地分为4类,来自商洛、汉中的一类药材苷甲含量最高.结论 温度和湿度可影响土贝母药材质量.温度、湿度偏高地区的土贝母药材中土贝母苷甲含量更高.

目的 采用HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中9个主要成分的含量.方法 采用Venusil MP C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,温度30℃,进样量10μL.结果 淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙、棕矢车菊素、异泽兰黄素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为8.86 ～ 177.20、2.79 ～ 55.80、10.08 ～201.60、2.47 ～ 49.40、5.56 ～111.20、1.12 ～22.40、4.54 ～90.80、1.98 ～ 39.60、1.86～37.20 mg·L-1,r分别为0.9998、0.9997、0.9999、0.9993、0.9996、0.9999、0.9995、0.9997、0.9998;9种成分的平均加样回收率分别为99.54％、97.84％、100.16％、98.74％、97.79％、98.06％、99.31％、98.50％、97.71％,RSD分别为1.19％、1.40％、0.75％、0.99％、1.66％、1.27％、0.94％、1.13％、1.58％.结论 所用方法操作简便、重复性好、精密度高、稳定性好,可同时测定乳增宁胶囊中9种有效成分的含量.

目的 建立双贝胶囊的质量标准.方法 采用薄层色谱法对双贝胶囊中土贝母、浙贝母、连翘进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对双贝胶囊中土贝母苷甲进行定量分析.结果 薄层色谱鉴别分离效果好,专属性强;土贝母苷甲含量在0.182～0.912 mg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.9997;平均加样回收率99.31％,RSD 0.49％.结论 该方法简单、准确、专属性强、重复性好,可有效控制双贝胶囊的质量.

目的 建立不同产地土贝母药材中皂苷类成分的特征图谱,并测定其中3种主要皂苷的含量,为该药材质量控制提供参考依据.方法 采用Thermo Hypersil GOLD aQ C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,进样量10 μL,柱温30℃,检测波长214nm,建立15批土贝母HPLC特征图谱,并进行相似度评价、主成分分析及聚类分析;采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行等度洗脱测定药材中3种皂苷类成分的含量.结果 建立的15批土贝母特征图谱共标定6个共有峰,相似度为0.845～0.98;主成分分析及聚类分析均将15批药材分为两类,与相似度评价结果一致;得到影响药材质量的3个皂苷成分(土贝母苷甲、乙、丙)并对其进行了含量测定,结果15批药材都符合药典含量限度的要求.结论 本研究所建立的HPLC特征图谱结合含量测定以及相似度评价,主成分分析,聚类分析等评价方法,可以全面、准确和有效地用于土贝母药材的质量评价.

目的 观察土贝母苷甲对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、自噬的影响,并探讨其可能机制.方法 培养MDA-MB-231细胞,分别给予5、10、15、20、25、30μg/mL的土贝母苷甲,采用CCK-8法测算细胞存活率.分别给予MDA-MB-231细胞0、5、10、20μg/mL的土贝母苷甲,采用流式细胞仪测算细胞凋亡率,电子透射显微镜观察凋亡细胞超微结构变化,采用Western blotting法检测各组细胞中的自噬相关蛋白LC3、凋亡相关蛋白RIP1、PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、p-Akt、P62、p-mTOR.将MDA-MB-231细胞分为对照组、自噬抑制剂3-MA组(10 mmol/L 3-MA)、土贝母苷甲组(20μg/mL土贝母苷甲)、土贝母苷甲+3-MA组(10 mmol/L 3-MA+20μg/mL土贝母苷甲),采用Western blotting法检测各组细胞中的LC3、p-Akt蛋白.结果 土贝母苷甲作用后MDA-MB-231细胞存活率下降,作用呈剂量依赖性(P均＜0.01).土贝母苷甲组细胞中自噬体和自噬溶酶体均显著蓄积.对照组及5、10、20μg/mL土贝母苷甲组细胞凋亡率依次增高(P均＜0.05),RIP1、LC3蛋白相对表达量依次增加(P均＜0.01),PI3K、Akt、p-Akt、P62、p-mTOR蛋白相对表达量依次降低(P均＜0.05).土贝母苷甲+3-MA组LC3蛋白表达低于土贝母苷甲组(P＜0.05),3-MA组、土贝母苷甲+3-MA组p-Akt蛋白表达高于土贝母苷甲组(P均＜0.05).结论 土贝母苷甲可抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、促使其凋亡并诱导细胞自噬,土贝母苷甲的自噬诱导作用可能是通过调节PI3k-Akt-mTOR信号通路实现的.