猪苓菌核栽培中种苓质量不稳定是影响猪苓菌核品质和产量的关键问题,该文拟对根癌农杆菌介导的猪苓遗传转化体系进行研究,为通过分子育种从而获得优质种苓提供技术保障.采用根癌农杆菌介导法探究抗生素浓度、菌株类型、菌液浓度、受体材料、侵染时间、共培养时间和筛选条件对猪苓遗传转化效率的影响,利用潮霉素抗性标记基因、特异引物PCR以及荧光检测方法筛选并检测转化子.结果表明,根癌农杆菌GV3101菌株可对猪苓菌丝进行遗传转化,菌液浓度A600nm=0.6,受体材料猪苓菌丝,侵染30 min,共培养3 d为最佳侵染条件;9 μg·mL-1潮霉素初筛和13 μg·mL-1潮霉素复筛两步筛选法为最优筛选条件.经潮霉素抗性筛选、特异引物PCR检测和荧光检测分析,结果表明外源基因eGFP已转入猪苓菌丝内整合到基因组中并成功表达,在最优条件下,转化率可达到2.3％,遗传转化周期从大于90 d缩短到小于60 d.该研究建立并优化了根癌农杆菌介导的猪苓菌丝遗传转化体系,为解析猪苓生长发育的分子机制及分子育种奠定基础.

目的:构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体，优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白。方法:在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体，estrogen receptor)，选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498; http：//n2t.net/addgene：49498; RRID：Addgene_49498)，设计引物并扩增得到目的片段ERα-LBD，分别构建蛋白表达载体pET-28a-LBD和pGEX-4T1-LBD，改变诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间对表达条件优化。待细菌裂解并提取蛋白后进行凝胶电泳，可在细菌上清的泳道中观察到明显的紫色蛋白表达条带，即为可溶性ERα-LBD蛋白。结果:pET-28a-LBD重组质粒未能表达重组蛋白ERα-LBD，重组质粒pGEX-4T1-LBD在Rosetta和BL21(DE3)感受态中以1 mmol/L IPTG诱导仅能得到包涵体；以0.2 mmol/L IPTG 16 ℃过夜诱导培养，则可得到可溶性ERα-LBD蛋白。结论:成功构建ERα-LBD表达载体并优化诱导表达条件，获得可溶性ERα-LBD蛋白。

目的:基于多重聚合酶链式反应（PCR）与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）联用的高通量检测技术，构建不同菌种的特征性单核苷酸多态性图谱以建立血流感染病原菌快速、准确、高灵敏的诊断方法。方法:选取血流感染常见的大肠埃希菌等7种病原菌作为检测对象，优化多重PCR条件，采用MALDI-TOF MS检测各目标菌特征峰，建立多重PCR联合质谱检测体系；分别设计普通引物对及中部同序引物对，分析引物二聚体的形成情况；采用模拟的细菌感染血液样本，测定上述建立体系的特异度及灵敏度；收集2020年6—9月解放军总医院检验科疑似菌血症患者血液样本150份，并将上述体系的鉴定结果与临床应用的传统鉴定方法结果使用χ2检验进行比较。结果:本研究设计的中部同序引物对的引物二聚体循环阈值（Ct）值在38以上，比普通引物对延迟出现6~10个循环；建立的联合质谱检测体系可同时检测分为两组的7种细菌，目标菌均可检测到特异的产物峰，除目标菌外的临床菌株只有引物峰，所有图谱无非特异的杂峰；大肠埃希菌的灵敏度可以达到50 CFU/ml，其余各菌的检测限为100 CFU/ml；对150例患者的血液样本进行检测，传统方法鉴定出阳性46例，阳性检出率为30.67%（46/150），包括2例混合感染，联合质谱方法鉴定出阳性48例，阳性检出率为32.0%（48/150），包括3例混合感染；阴性符合率为100%（101/101），核酸质谱敏感度为97.82%（45/46），特异度为97.11%（101/104），一致性检验Kappa=0.938（ P=0.625），2种方法检测一致性良好。 结论:所建立的检测体系不仅能快速、准确地鉴定引起血流感染的7种常见病原菌，有效缩短传统培养鉴定所需时间，还可检测多重细菌混合感染，弥补混合感染漏检可能。该方法也可用于其他病原菌的鉴定。

目的:本研究通过提取常氧及低氧预处理的神经干细胞来源外泌体治疗脊髓损伤小鼠，对比小鼠运动功能、损伤区脊髓微环境和神经炎症的改善情况探讨两者治疗效果差异。方法:收集常氧或低氧条件下培养的神经干细胞的外泌体（NSC-EXOS/NSC-HEXOS），采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和免疫印迹的方法对外泌体进行鉴定；采用改良Allen法构建挫伤型脊髓损伤小鼠模型，将15只造模成功的小鼠随机分为PBS组、EXOS组和HEXOS组，分别予注射PBS、NSC-EXOS和NSC-HEXO治疗，采用BMS和BBB评分评价小鼠运动功能恢复情况，HE染色观察损伤区脊髓微环境变化，ELISA法检测损伤区脊髓组织炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，通过免疫印迹、免疫荧光检测损伤区脊髓组织中iNOS、Arg1的表达观察小胶质细胞产生的变化。结果:NSC-EXOS和NSC-HEXOS均鉴定成功，两者直径范围均为50~150 nm。NSC-EXOS和NSC-HEXOS均促进了SCI小鼠运动功能恢复，NSC-HEXOS治疗后的小鼠BBB及BMS评分最高（ P<0.05）。HE染色结果显示NSC-EXOS和NSC-HEXOS均能改善损伤区脊髓微环境；ELISA结果显示NSC-EXOS和NSC-HEXOS可降低损伤区脊髓组织中炎症因子水平（ P<0.05），NSC-HEXOS治疗后降低幅度最大（ P<0.05）；免疫印迹及免疫荧光染色结果显示NSC-EXOS和NSC-HEXOS可减少损伤区脊髓组织中M1型小胶质细胞数量而增加M2型小胶质细胞数量（ P<0.05），其中NSC-HEXOS治疗组效果最明显（ P<0.05）。 结论:低氧预处理是一种优化神经干细胞来源外泌体对脊髓损伤治疗作用的有效方法。

目的:制备抗B组柯萨奇病毒(Coxsackievirus，CVB)3C蛋白的多克隆抗体。方法:通过聚合酶链式反应从pcDNA3.1(+)-EGFP-3C中扩增编码3C的DNA片段，构建pET28a(+)-3C-6His表达载体，转化至大肠埃希菌(Escherichia coli， E. Coli)BL21(DE3)以表达3C重组蛋白。优化表达条件及菌体蛋白的提取方法，经超声破碎制备菌体总蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)后，用氯化钾进行胶染色，切胶回收相对分子质量为26 000的蛋白，即纯化的3C重组蛋白(3C-6His的相对分子质量为26 000)。用纯化的1 mg 3C重组蛋白加等量弗氏佐剂免疫新西兰大白兔，共免疫5次，每次间隔1周，免疫结束后1周取兔血清，检测抗体的特异性。 结果:在相对分子质量为26 000的位置检测到了3C-6His融合蛋白的表达，成功构建了高效表达带His标签的3C重组蛋白载体。重组3C蛋白原核优化表达条件为37 ℃培养细菌6 h，加0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside，IPTG)进行诱导。经SDS-PAGE分离菌体总蛋白，得到了纯化的3C重组蛋白。获得的兔免疫血清可以结合 E. Coli及HeLa细胞表达的3C蛋白，还能识别感染CVB3或肠道病毒A71的HeLa细胞中表达的3C蛋白。 结论:获得了抗CVB3 3C蛋白酶的多克隆抗体，这一抗体可特异结合肠道病毒的3C蛋白酶，为进一步研究3C蛋白酶在肠道病毒致病机制中的作用奠定了基础。

随着社会发展，整形美容行业从业医师对进修学习，完善和提高自身竞争力的需求不断扩大，能够全面培养综合素质的整形美容外科进修培训凸显重要，以北京黄寺美容技术中心为例，从们多年的培训经验和行业反馈中，总结了一套优化的进修医师培训体系，并分别从以下6个方面：(1)对完成精细的手术操作专业习惯和手感习惯的转变；(2)临床思维习惯和模式的转变；(3)医患之间充分沟通；(4)培养强大的心理承受能力；(5)美学素养培养；(6)人文情趣的培养和增强，完整阐述了综合素养的培训和提高是成为合格、有造诣的整形美容外科医师的必要先决条件。

青海大学位于西部地区，该校研究生教育在招生质量、教育经费、实验条件、技术储备等方面与东部地区有较大差距。青海大学医学院病理生理教研室从教学方式、考核方式、师资队伍等方面着手，建设医学科研型研究生《临床病理生理学》课程。通过融合教师授课与学生自主学习（PBL教学、文献研讨、学生讲座），邀请院外专家讲学，开展形成性评价，优化教师队伍等多项措施，取得一定教学成效，并促进了研究生培养质量的提升。

基于传统临床病理学教学中存在一定条件限制的局限，提出临床、影像、解剖、病理内容“四位一体”混合式数字化教学改革实践。该教学法能够优化教学过程，提高教学效率。该教学方法具体优势体现在：临床、影像、解剖、病理不同模块的数字化材料得到整合，使教学内容更加完善；有助于提高住培医师对病理特征及疾病整体特征的认知，促进其临床病理结合思维能力；混合式数字化教学与多种教学方法相结合，包括临床病理讨论等多种形式，使教学自由度更高，有利于课堂学习及自学。本研究通过对该“四位一体”混合式数字化教学的构建和应用展开讨论分析，以期为临床病理学教学和人才培养提供新思路与方法。

目的:对北京大学口腔医学专业学位研究生的科研态度及行为进行调查分析，为提高科研训练质量提出建议。方法:选取150名北京大学口腔医学专业学位研究生和八年制学生(研究生阶段)作为研究对象开展调查，收集研究生的科研工作类型、对科研训练的态度、对科研条件的评价、与导师的关系以及毕业后的就业方向等内容。结果:共回收有效问卷131份，回收率87.3%。科研工作类型上，70人(53.4%)从事基础研究、30人(22.9%)从事临床研究。对科研训练的态度上，69人(52.7%)认为科研工作与临床工作相互促进。调查对象对科研兴趣、科研能力和科研压力的评分分别为3.13±0.84、3.04±0.84和4.14 ± 0.71；对实验室硬件条件(3.30 ± 0.92)、科研经费(3.54 ± 1.06)、科研氛围(3.89 ± 0.85)和奖惩机制(3.82 ± 0.76)评价较为正面，对学校开设的科研训练课程(2.89 ± 0.88)和科研训练时间(2.79 ± 0.94)评价偏向负面。受访者普遍与导师关系融洽(4.29 ± 0.77)，111名调查对象(84.7%)对本人与导师的导学关系有正确的认识。66名调查对象(50.4%)希望毕业后在医学院从事临床和科研工作，61人(46.6%)希望只从事临床工作。结论:北京大学口腔医学专业学位研究生的科研内容以基础研究为主、科研压力较大。建议结合临床进行科研选题，明确科研工作的意义，优化科研条件，坚持导师的个性化指导，将"三全育人"理念贯彻在专业学位研究生培养的各个方面。

目的:建立转染RNA拯救CVB3的方法，为优化CVB3的分离鉴定和体外培养提供技术参考。方法:比较Qiagen 57704、Qiagen 52904和Trizol三种核酸提取试剂提取CVB3基因组RNA的效率及Lipofectamine 2000和Lipofectamine 3000两种转染试剂转染病毒RNA的效率；探究提取RNA时增加洗脱次数对病毒拯救效率的影响；比较使用HeLa细胞、Vero细胞和HEK293T细胞拯救CVB3的效率。由此确定转染病毒RNA拯救CVB3的最适条件。结果:Qiagen 57704、Qiagen 52904、Tizol试剂盒提取RNA拯救病毒的噬斑数分别为13.33±1.53、150.00±15.00、1.67±0.58，三种方法提取CVB3 RNA拯救病毒RNA的效率差异具有统计学意义( F＝268.920， P<0.001)；Lipofectamine3000、Lipofectamine2000转染病毒RNA形成的噬斑数分别为74.50±3.00、22.00±5.00，差异具有统计学意义( P<0.01)；HEK293T细胞培养病毒拯救CVB3的效率高于HeLa细胞和Vero细胞，三种细胞拯救病毒的拷贝数分别为6.09×10 7±8.00×10 5、5.18×10 3±6.17×10 2、0，差异具有统计学意义( F＝17 383.644， P<0.001)，同时发现提取RNA时通过多次洗脱可以提高病毒拯救的效率。 结论:本研究成功建立了一种优化的转染RNA拯救CVB3的方法，选用Qiagen 52904核酸提取试剂盒、增加洗脱次数、使用Lipofectamine 3000转染试剂、HEK293T细胞转染等方法，可以有效提升病毒的拯救效率。