目的:建立检测唾液酸化胎球蛋白A（Sia-fetuin A）的凝集素-酶联免疫吸附试验方法（lectin-ELISA），探讨其在原发性肝细胞癌（HCC）中的诊断价值。方法:收集2017至2020年于上海东方肝胆外科医院就诊的HCC患者300例，疾病对照160例（包括肝硬化亚组36例、慢性乙型肝炎亚组124例），另同期收集健康体检者100名作为健康对照。根据接骨木凝集素（SNA）可与糖链末端α-2，6-半乳糖的唾液酸结合原理构建lectin-ELISA方法，检测各组血清Sia-fetuin A水平，以450 nm处吸光度值表示。采用logistic回归方法建立多指标联合检测模型，采用受试者工作特征曲线（ROC）评估单项指标及联合检测模型诊断HCC效能。结果:建立了检测血清Sia-fetuin A的lectin-ELISA实验方法，其线性回归系数为0.978 5，精密度评估及干扰实验均符合临床检测要求。采用该方法检测各组血清Sia-fetuin A水平，HCC组、疾病对照组和健康对照组分别为1.362±0.310、1.199±0.370、1.086±0.420，3组之间依次降低。Sia-fetuin A、AFP和二者联合检测模型鉴别诊断HCC的曲线下面积分别为0.790、0.809和0.860，诊断模型敏感度79.3%（238/300），特异度95.0%（247/260）。HCC组300例患者中138例（46%）患者血清AFP为阴性（<20 μg/L），其血清Sia-fetuin A水平为1.364±0.305。将疾病对照组与健康对照组合并为非患癌组，其血清Sia-fetuin A水平为1.146±0.381。AFP阴性HCC患者血清Sia-fetuin A水平高于非患癌患者（ t=6.134， P<0.001）。Sia-fetuin A与联合诊断模型诊断AFP阴性HCC的曲线下面积分别为0.776、0.919，联合诊断模型敏感度93.4%（129/138），特异度77.3%（201/260）。 结论:血清Sia-fetuin A及其联合检测模型可为AFP阴性HCC患者提供新的辅助诊断指标。

目的:探讨血清C型凝集素样受体-2(C-type lectin-like receptor 2, CLEC-2)联合胰岛素抵抗对急性缺血性卒中(acute ischemic stroke, AIS)患者静脉溶栓后转归的预测价值。方法:回顾性连续纳入2019年10月至2021年3月在南通大学第二附属医院神经内科接受阿替普酶静脉溶栓治疗的AIS患者。根据发病后90 d时改良Rankin量表评分分为转归良好组(0~2分)和转归不良组(>2分)。利用稳态模型评估-胰岛素抵抗(homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR)评估胰岛素抵抗情况。应用Person相关性分析确定CLEC-2与HOMA-IR的相关性。应用多变量 logistic回归分析确定血清CELC-2、HOMA-IR与静脉溶栓后转归的相关性。应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线确定血清CLEC-2联合HOMA-IR对静脉溶栓后转归不良的预测价值。 结果:共纳入100例患者，男性56例(56.0%)，年龄(70.6±10.86)岁(范围49~83岁)，基线美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale, NIHSS)评分(10.00±6.36)分。74例(74.0%)转归良好，26例(26.0%)转归不良。Person相关性分析显示，血清CLEC-2与HOMA-IR存在显著正相关联系( r＝0.523； P<0.001)。多变量 logistic回归分析显示，校正混杂因素(C反应蛋白、基线NIHSS评分、发病至静脉溶栓时间)后，血清CLEC-2最高四分位数组[与最低四分位数组相比：优势比(odds ratio, OR)4.836，95%置信区间(confidence interval, CI)1.105~21.169； P＝0.036]和HOMA-IR最高四分位数组(与第1~3四分位数组相比： OR 15，95% CI 2.647~30.722； P＝0.002)是AIS患者静脉溶栓后转归不良的独立危险因素。ROC曲线分析显示，血清CLEC-2联合HOMA-IR预测转归不良的曲线下面积为0.785(95% CI 0.688~0.883； P<0.001)，最佳截断值为0.72，敏感性和特异性分别为76.0%和95.0%。 结论:CLEC-2联合胰岛素抵抗对AIS患者静脉溶栓后转归不良具有一定的预测价值。

患者女，45岁，20年前行剖宫产术，3年前因左卵巢囊肿行左卵巢囊肿剥除术，否认吸烟、饮酒史，否认放射性物质接触史，否认家族遗传性疾病，13岁初潮，平素月经规律。本次首发症状为右下腹痛和右下肢进行性疼痛。增强CT示右卵巢可见不均匀强化肿块，大小3.5 cm×1.5 cm，腹腔、盆腔内见多个轻度强化肿物。颈部超声示甲状腺结节。行全子宫＋双附件＋大网膜切除术＋盆腹腔肿瘤切除术。病理报告提示：恶性卵巢甲状腺肿(malignant struma ovarii, MSO)，滤泡型，伴子宫、腹膜、肠系膜和网膜转移；免疫组织化学结果：细胞角蛋白19(＋)、半乳糖凝集素3(galectin－3；＋)、人骨髓内皮细胞标志物－1(human bone marrow endothelial cell marker－1, HBME－1；＋)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin, Tg；＋)、甲状腺转录因子－1(thyroid transcription factor－1, TTF－1；＋)、甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase, TPO；部分＋)、细胞增殖核抗原Ki－67指数(约1%～2%)、高相对分子质量细胞角蛋白34βE12(－)、CD56(－)、突触素(synapsin, Syn；－)、嗜铬素A(chromogranin, CgA；－)。后患者接受6周期化疗(卡铂500 mg＋紫杉醇240 mg)。化疗期间血清Tg水平持续缓慢上升(从204.3 μg/L升至281.0 μg/L)，癌胚抗原、肿瘤糖类抗原－125变化不明显。6周期化疗后复查CT示：腹盆腔多发肿物，结合病史考虑为残留的肿瘤转移灶，最大径较前变化不明显。化疗结束后行甲状腺结节细针穿刺活组织检查，病理证实为分化型甲状腺癌(differentiated thyroid cancer, DTC)。后行甲状腺切除术和中央区淋巴结清扫术。术后病理示：右叶DTC(典型乳头状癌)，左叶结节性甲状腺肿，中央区淋巴结未查见癌(0/3)，pT1N0M0，Ⅰ期。术后患者服用左旋甲状腺素(每日100 μg)行促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)抑制治疗。后行2次 131I治疗，每次剂量为7 400 MBq，治疗间隔6个月。首次 131I治疗后全身显像(post－therapy whole－body scan, Rx－WBS)及SPECT/CT显像示：残余甲状腺(图1A)；腹盆腔多发残留MSO转移灶伴 131I摄取(图1A～1C)。第2次Rx－WBS及SPECT/CT显像示：清除手术后残留的甲状腺组织(简称清甲)成功(图1D)；腹盆腔多发残留MSO转移灶伴 131I摄取，摄取值及摄取灶数目均明显小于第1次显像，多数转移灶最大径缩小，部分病灶完全缓解(图1D～1F)。此外，抑制性Tg水平从第1次 131I治疗前的110.0 μg/L降至第2次 131I治疗后的1.3 μg/L。经过2轮 131I治疗后，解剖学和血清学均取得了明显缓解，没有监测到明显不良反应。目前该患者在TSH抑制下积极随诊监测。对DTC病灶和MSO病灶分别进行二代测序，以下基因突变均为阴性：B－Raf原癌基因丝/苏氨酸蛋白激酶(B－Raf proto－oncogene, serine/threonine kinase, BRAF) V600E基因、端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)启动子、转染重排(rearranged during transfection, RET)、Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog, KRAS)、神经母细胞瘤RAS病毒致癌基因同源物(neuroblastoma RAS viral oncogene homolog, NRAS)、肿瘤蛋白53(tumor protein 53, TP53)、磷脂酰肌醇－4，5－双磷酸3－激酶催化亚基α(phosphatidylinositol－4，5－bisphosphate 3－kinase catalytic subunit alpha, PIK3CA)。

血小板是来源于巨噬细胞的无核片段，广泛分布于人体血液循环中，其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用 [1]。近年来的研究表明，血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用 [2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体的识别、影响内皮屏障功能和改变血管通透性、释放储存的炎症因子、与白细胞相互作用并进行信号传导以及通过表面受体进行免疫调节 [3,4]。近年来，针对血小板表面受体调节免疫信号的研究取得了明显进展，相关受体包括Toll样受体（TLR）、血小板糖蛋白Ⅵ（GPⅥ）、血小板Fc受体FcγRⅡA、钙离子依赖型凝集素样受体-2（CLEC-2）、血小板内皮黏附分子-1（PECAM-1）、癌胚抗原相关黏附分子-1（CEACAM-1）和髓样细胞触发受体样转录因子-1（TLT-1）等 [5]。其中血小板表面受体FcγRⅡA是一种对单体免疫球蛋白（Ig）G具有低亲和力而对含IgG免疫复合物具有高亲和力的受体，无论是IgG单体还是免疫复合物中的IgG都通过Fc片段与FcγRⅡA结合。此外，FcγRⅡA也广泛分布在于巨噬细胞、中性粒细胞、部分树突细胞及其他细胞 [6]，在血小板介导的各类免疫反应中发挥着重要作用。

恶性肿瘤严重威胁着人类健康,是全球人类死亡的主要原因之一.为了进一步提高对于恶性肿瘤的治疗效果,延长患者生存时间,明确恶性肿瘤的发病机制以及寻找新的诊断和治疗靶点变得尤为重要.研究发现,恶性肿瘤的发生发展是肿瘤细胞与肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)相互作用的结果.多能蛋白聚糖(versican)是一种硫酸软骨素蛋白聚糖,属于外源凝集素蛋白聚糖家族,由VCAN基因编码,是细胞外基质的主要成分,在胚胎发育和炎症反应过程中均发挥重要作用.作为TME的重要组成部分,versican在肾细胞癌、肝细胞癌、胃癌等多种肿瘤组织中异常表达,且与患者的临床病理特征及预后密切相关,是肿瘤早期诊断和预后评估的潜在生物标志物.进一步的研究显示,versican可通过促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移,抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤血管生成和抑制抗肿瘤免疫反应等多种方式促进肿瘤的发展.该文就versican在恶性肿瘤中的表达及生物学作用的研究现状进行综述,旨在为肿瘤的后续研究及临床诊治提供参考依据.

C-型凝集素(C-type lectin,CTL)是存在动、植物及微生物中一类Ca2+依赖性的糖蛋白,能够识别和结合病原微生物表面的多糖物质,在机体免疫防御中起重要作用.为了解淡水育珠贝池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)CTL的分子特征及潜在作用,结合转录组高通量测序和末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)从池蝶蚌中鉴定了一条与其他物种CTL同源的cDNA序列,命名为HsCTL.该序列全长为1716 bp,包括5′ 端非编码区92 bp,3′端非编码区898 bp,开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,预测蛋白质相对分子量为28 ku.其氨基酸序列存在一个由23个氨基酸残基组成的信号肽和一个糖配体识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD),CRD结构域中仅包含1个QPD(Gln-Pro-Asp)基序.序列同源性及进化分析表明,HsCTL与斑节对虾(Penaeus monodon)CTL同源性最高,达36％,而与目前GenBank公开的其他贝类CTLs的同源性为9.7％ ～18.1％.构建的系统进化树显示,HsCTL与斑节对虾和中国明对虾(Fenneropenaeus chinensiss)的同系物聚为一支,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)perlucin和九孔鲍(Haliotis diversicolor)CTL聚为相邻支.通过实时荧光定量RT-PCR检测发现,HsCTL的mRNA广泛分布于池蝶蚌各个组织,其中在血细胞表达量最高,外套膜和肝胰腺次之.且进一步发现,注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,HsCTL的mRNA表达量在血细胞和肝胰腺组织中显著增加.以上结果表明,HsCTL在池蝶蚌抵抗病原微生物的免疫防御反应中可能起到重要作用,结果为进一步研究HsCTL参与池蝶蚌先天免疫的分子机制打下基础.

背景:C型凝集素结构域家族4成员D(CLEC4D)在系统性真菌感染中可诱导Th17细胞分化,调控IL-17A表达,目前国内外尚未见其在肠道免疫中是否发挥作用的报道.目的:探讨CLEC4D、CARD9在炎症性肠病(IBD)患者结肠组织中的表达情况及其临床意义.方法:收集2016年10月—2018年6月郑州大学第二附属医院收治的IBD患者48例,其中溃疡性结肠炎(UC)患者36例,克罗恩病(CD)患者12例,以30例结肠癌旁正常组织作为对照.采用免疫组化法检测结肠组织中CLEC4D和CARD9表达,并分析其与临床特征的相关性.结果:UC组、CD组结肠组织中CLEC4D和CARD9表达均显著高于对照组(P<0.05),而UC组与CD组之间无明显差异(P>0.05).UC组CLEC4D、CARD9表达与Mayo评分、Baron分级呈正相关(P<0.05),CD组CLEC4D、CARD9表达与CDAI评分呈正相关(P<0.05),与SES-CD评分无明显相关性(P>0.05);IBD患者CLEC4D、CARD9表达与CRP呈正相关(P<0.05),而与ESR无明显相关性(P>0.05).结论:CLEC4D、CARD9在IBD患者中的表达升高,且与患者病情密切相关,CLEC4D可能通过CARD9相关途径参与IBD的肠道免疫.

目的 研究孕早期CLEC2D/CD161分子相互作用对蜕膜自然杀伤细胞(decidual natural killer cell,dNK)免疫杀伤功能的调节作用,并探讨其与复发性流产发病的关联. 方法2018年10月至2019年5月,孕6～10周的正常妊娠(n=16)及复发性流产(n=6)蜕膜组织取自北京大学第三医院妇产科.通过免疫荧光确定CLEC2D及CD161分子在早孕蜕膜中的分布.从早孕蜕膜中分离培养dNK,对dNK与JEG-3分别用CD161抗体阻断(blocking CD161,B-CD161)及CLEC2D小干扰RNA(siCLEC2D)敲降处理.经过共培养后,用细胞杀伤实验检测dNK的杀伤性.组间数据比较采用t检验. 结果 (1)CLEC2D主要分布于表达于绒毛外滋养层细胞(extravillous trophoblast,EVT)中,CD161主要表达于dNK中.并且CD161阳性的dNK和CLEC2D阳性的EVT在蜕膜中相邻分布,存在发生相互作用的空间位置条件.(2)B-CD161组效靶比40∶1、20∶1、10∶1及5∶1的靶细胞裂解率分别为(59.12±4.56)%、(25.96±5.44)%、(13.60±8.94)%和(12.53±8.94)%,其对照组IgG组对应效靶比靶细胞裂解率为(20.01±1.96)%、(8.51±1.32)%、(3.24±0.75)%和(3.82%±1.92)%.效靶比40∶1和20∶1时,裂解率均高于相应对照组(t=13.922,P＜0.01;t=5.403,P＜0.05);而10∶1和5∶1时,2组差异无统计学意义.siCLEC2D组效靶比40∶1、20∶1、10∶1和5∶1的靶细胞裂解率分别为(43.37±2.01)%、(32.99±2.08)%、(23.47±1.36)%和(11.48±0.37)%,其阴性对照组对应效靶比的靶细胞裂解率分别为(15.54±1.46)%、(13.84±1.68)%、(9.94±3.01)%和(5.50±0.99)%,2组之间各效靶比的裂解率差异均有统计学意义(t值分别为19.402、12.400、7.093和9.842,P值均＜0.01).siCLEC2D组dNK杀伤性相关因子颗粒酶B的表达较阴性对照组升高.(3)复发性流产和正常妊娠蜕膜组织中CLEC2D的表达并无明显差异.复发性流产病例dNK中CD161的阳性率低于正常妊娠组.复发性流产dNK的杀伤性水平高于正常dNK. 结论 在早孕期蜕膜中,EVT可通过CLEC2D与dNK上的CD161相互作用,抑制dNK的杀伤性,实现免疫耐受.蜕膜CD161表达下降导致dNK杀伤能力增强,这可能是复发性流产的免疫排斥病因之一.

高等脊椎动物的蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(SH2 domain-containing protein-tyrosine phosphatase-2)由ptpn11基因编码,催化酪氨酸残基去磷酸化,与其他能催化酪氨酸磷酸化的蛋白酪氨酸激酶共同调节机体内多种信号通路的信号传导.以往研究表明,SHP2在高等脊椎动物T细胞和B细胞的激活与信号转导过程中起着重要作用.为了研究无颌类脊椎动物日本七鳃鳗(Lampetra japonica)中与SHP2同源的分子——Lja-SHP2在免疫应答反应中的作用,本研究通过PCR扩增获取其Lja-SHP2开放阅读框序列,并构建到原核表达载体pET-32a中,成功在大肠杆菌中实现重组蛋白表达并制备了其兔源多克隆抗体.用混合菌免疫刺激日本七鳃鳗后,通过实时荧光定量PCR和免疫印迹方法检测了Lja-SHP2在日本七鳃鳗免疫相关组织中mRNA和蛋白水平表达谱.结果显示,混合菌免疫刺激后,Lja-SHP2 mRNA和蛋白表达在外周血白细胞和髓样小体中无显著变化,而在鳃组织中显著性上调(P<0.05),说明Lja-SHP2在混合菌刺激后主要参与了鳃组织的免疫应答反应.为了进一步探究Lja-SHP2与淋巴细胞亚群免疫应答反应的相关性,本研究分别使用B细胞有丝分裂原脂多糖(lipopolysa-ccharide,LPS)和T细胞的有丝分裂原植物凝集素(phytohemagglutinin,PHA)免疫刺激日本七鳃鳗.经LPS免疫刺激后,与对照组相比,白细胞中Lja-SHP2蛋白表达显著上调,鳃组织和髓样小体没有显著性差异表达;但经PHA免疫刺激后,与对照组相比,白细胞、鳃组织和髓样小体3种组织中Lja-SHP2均有上调,尤其在白细胞中上调最为显著,大约是对照组的2.5倍,说明Lja-SHP2参与了日本七鳃鳗由PHA介导的免疫应答反应.由于PHA能刺激日本七鳃鳗鳃组织中VLRA+淋巴细胞的活化,这表明Lja-SHP2可能参与了PHA介导的VLRA+淋巴细胞亚群的免疫应答反应.上述研究结果为进一步探索Lja-SHP2在七鳃鳗免疫应答过程中的功能奠定了基础,也为揭示SHP2分子家族的系统发生及探索高等脊椎动物适应性免疫系统的早期发生及其进化历程提供一定的线索.

目的:探讨C型凝集素域家族4,成员M (C-type lectin domain family 4,member M,CLEC4M)在正常肝、肝硬化、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其配对癌旁肝组织中的表达及其临床意义.方法:利用肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)等数据库,筛选各个肝癌数据库中在HCC组织中表达明显下调的基因.利用GEO数据库分析正常肝、肝硬化及HCC组织中CLEC4M mRNA的表达水平.采用实时定量PCR检测83对HCC组织及其配对癌旁肝组织中CLEC4M mRNA的表达水平.利用肝细胞癌癌基因图谱数据库(Integrative Molecular Analysis of Hepatocellular Carcinoma,HCCDB)分析CLEC4M mRNA在多种肿瘤中的表达情况.分别采用免疫组织化学法检测236对HCC及其配对癌旁肝组织、10例正常肝组织和12例肝硬化组织中CLEC4M蛋白的表达水平;蛋白质印迹法检测8对HCC及其配对癌旁肝组织中CLEC4M蛋白的表达水平;再用Kaplan-Meier法分析癌旁肝组织中CLEC4M表达与患者总生存期之间的关系.结果:对GEO和TCGA数据库的检索结果以及对83对临床样品的检测结果显示,HCC组织中CLEC4M mRNA的表达水平明显低于癌旁肝组织(P值均＜ 0.000 1).对GEO数据库的检索结果显示,CLEC4M mRNA在正常肝、肝硬化及HCC组织中的表达呈逐渐下降的趋势(P＜0.05).免疫组织化学法检测结果显示,236例HCC组织中仅6例为CLEC4M蛋白高表达,而配对癌旁肝组织中有157例为CLEC4M高表达.Kaplan-Meier生存期分析显示,癌旁肝组织中CLEC4M高表达患者的总生存期较CLEC4M低表达者明显延长(P＜0.000 1).结论:HCC组织中CLEC4M低表达,而癌旁肝组织中CLEC4M高表达提示患者预后较好.