表皮生长因子受体（EGFR）基因作为重要的肿瘤驱动基因，在非小细胞肺癌（NSCLC）的发生、发展中发挥着重要作用。奥希替尼作为最新一代的EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）药物，不仅在EGFR敏感突变的患者中取得了显著的效果，在EGFR罕见突变患者中的疗效也令人鼓舞。与以往的EGFR-TKI药物相比，奥希替尼血脑屏障的穿透力强，可以有效防止肺癌脑转移的发生，同时在第一、二代靶向药物出现耐药后，奥希替尼在后续治疗过程中依然有效。文章就EGFR突变的特点、奥希替尼的作用机制及其治疗NSCLC EGFR突变的最新研究进行综述。

表皮生长因子受体(EGFR)突变是引发非小细胞肺癌(NSCLC)的重要驱动因素。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)是治疗肺癌领域的重要发现，EGFR-TKIs在晚期EGFR突变阳性NSCLC患者中的疗效优于标准化疗。NSCLC患者通常同时服用EGFR-TKIs与其他药物，尤其是有合并症的NSCLC患者，因此，增加了EGFR-TKIs药物相互作用的风险。EGFR-TKIs中常见的药物相互作用机制为细胞色素酶P450(CYP)、药物转运体(如P-糖蛋白和乳腺癌耐药蛋白)以及抑酸药物(质子泵抑制剂和H 2受体拮抗剂)的调节。CYP和药物转运体的抑制剂或诱导剂能通过减缓或加快EGFR-TKIs的代谢过程，来升高或降低EGFR-TKIs在体内的暴露量，从而影响EGFR-TKIs的安全性和有效性。EGFR-TKIs与抑酸药物的合用和相互作用可能降低EGFR-TKIs在体内的溶解度、生物利用度和药效。文章概括并论述了吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼和奥希替尼药物相互作用的机制，以及中国与全球指南、体内外研究和临床研究对EGFR-TKIs药物相互作用在临床上的管理办法的推荐，为EGFR-TKIs类药物合并用药的临床管理提供依据。

目的:建立非小细胞肺癌(NSCLC)第三代EGFR-TKI奥希替尼(Osimertinib)耐药细胞系并初步探讨其耐药机制。方法:以人NSCLC细胞系H1975为研究对象，利用低浓度奥希替尼持续诱导筛选继发耐药细胞系。MTS法检测细胞奥希替尼药物敏感性。活细胞工作站检测细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡。利用蛋白质谱检测数据构建亲代与耐药细胞的差异表达基因谱并通过qRT-PCR和Wester blot验证耐药相关基因。结果:成功获得奥希替尼继发耐药H1975/OSI细胞。与亲代细胞相比，H1975/OSI细胞的耐药指数增加了27.25倍( P<0.01)，细胞增殖能力降低但凋亡抗性增加( P＝0.01)且未产生EGFR-TKI耐药常见相关基因的突变。同时建立起H1975与H1975/OSI细胞蛋白质差异表达谱，发现耐药细胞上调蛋白307个，下调蛋白295个，其中在H1975/OSI细胞中表达增加的成纤维细胞特异蛋白(FSP1)被干扰后，干扰细胞对奥希替尼的敏感性增加(IC50值下降3.51倍， P＝0.02)。在亲代H1975细胞中过表达FSP1，奥希替尼对细胞的IC50值增加了3.75倍( P<0.01)。 结论:成功建立人NSCLC奥希替尼耐药细胞系H1975/OSI；成功构建H1975与H1975/OSI蛋白质差异表达谱；FSP1蛋白可能通过增加H1975/OSI的凋亡抗性介导奥希替尼耐药。

目的:探讨奥希替尼对过表达赖氨酸羟化酶2(PLOD2)的HCC827细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其PLOD2诱导奥希替尼耐药的作用机制。方法:应用LV－vector和LV－over/PLOD2慢病毒载体转染肺癌HCC827细胞，应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT－PCR)和Western blot法检测PLOD2的表达情况，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测奥希替尼的抗细胞增殖能力，应用细胞划痕实验和Transwell实验检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，应用免疫荧光法检测E－cadherin和vimentin的表达，应用Western blot法检测上皮间质转化(EMT)、FAK－PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果:MTT检测结果显示，过表达PLOD2的HCC827－PLOD2细胞对奥希替尼的敏感性降低，半数抑制浓度>1 000 nmol/L，耐药指数>100。细胞划痕实验结果显示，HCC827－PLOD2细胞迁移的距离为HCC827－vector细胞的(2.13±0.21)倍。Transwell结果显示，HCC827－PLOD2细胞的穿膜细胞数为(212.78±10.43)个，与对照组HCC827－vector细胞[(101.32±12.52)个]比较，差异有统计学意义( P<0.01)。免疫荧光检测结果显示，与HCC827－vector细胞比较，HCC827－PLOD2细胞中E－cadherin的表达下调，vimentin的表达上调；奥希替尼可下调HCC827－vector细胞中vimentin的表达，上调E－cadherin蛋白的表达，但对HCC827－PLOD2细胞中E－cadherin和vimentin的表达无明显调控作用。Western blot结果显示，过表达PLOD2可下调E－cadherin蛋白的表达，上调vimentin蛋白的表达，奥希替尼可抑制HCC827－PLOD2细胞中磷酸化表皮生长因子受体的表达，但对PLOD2、p－FAK、p－AKT、p－ERK和vimentin等蛋白的表达无明显抑制作用，对E－cadherin蛋白的表达亦无上调作用。 结论:PLOD2可能通过促进EMT的表达，激活FAK－PI3K/AKT及MAPK信号通路诱导奥希替尼耐药。

目的:对肺腺癌细胞形成的肺癌类器官结构与相关标志物进行表征，探讨对其表皮生长因子受体(EGFR)靶向药物敏感性。方法:对常用肺腺癌细胞系A549(EGFR野生型)和H1975(EGFR T790M/L858R)进行肿瘤类器官培养，观测肺癌类器官的形成、形态和增殖；通过HE染色，对形成的肺癌类器官进行微组织结构表征，采用免疫组织化学检测肺癌相关标志物甲状腺转录因子-1(TTF-1)、细胞角蛋白(CK7)、增殖指数(Ki-67)的表达情况并与传统二维培养情况对比；同时采用免疫荧光法检测A549和H1975类器官N-钙黏蛋白(N-cadherin)空间分布和表达情况；对A549和H1975形成的肺癌类器官进行一代与三代靶向药吉非替尼和奥希替尼的药敏试验，通过3D-glo法对ATP进行定量分析，以药物作用剂量为横坐标，细胞活力值为纵坐标，用GraphPad Prism9对数据进行非线性拟合曲线分析，评估药物敏感性。组间比较选取两个独立样本的Student’s t test检验，多组数据间比较选取方差分析。 结果:肺腺癌细胞A549和H1975分别在7 d和5 d形成平均直径50 μm的类器官球体结构；HE染色显示微结构，二维肺癌细胞与其形成的类器官标志物表达不尽相同；经靶向药物处理后，A549类器官对吉非替尼及奥希替尼都不敏感，而H1975肺癌类器官对吉非替尼呈现耐药对奥希替尼呈现敏感。吉非替尼组A549类器官半数抑制浓度(IC 50)高于H1975类器官，差异有统计学意义(1.08 μmol/L比0.50 μmol/L， t＝9.90， P<0.05)。奥希替尼组A549类器官IC 50高于H1975类器官，差异有统计学意义(1.04 μmol/L比0.01 μmol/L， t＝26.78， P<0.05)。 结论:表皮生长因子受体(T790M/L858R)突变的肺腺癌细胞H1975形成的肺腺癌类器官较野生型A549形成的肺腺癌类器官对三代TKI药物奥希替尼具有高敏感性。

奥希替尼作为第三代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI），在携带EGFR突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的靶向治疗中取得了显著的临床效益，但其耐药不可避免。为了应对奥希替尼的药物抵抗，新一代靶向药物的研发及相应的治疗策略也在发展中，并有部分已进入临床试验。文章主要对奥希替尼的耐药机制及其耐药后治疗策略的研究进展进行综述。

目的:分析Rab26在奥希替尼耐药细胞中的表达及调控肺癌耐药细胞对奥希替尼敏感性的作用和机制。方法:采用浓度梯度递增法诱导H1975细胞为奥希替尼耐药细胞株(H1975OR)。根据Western blot和qPCR检测H1975、H1975OR中Rab26与核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2) mRNA及蛋白表达水平。对Rab26进行过表达慢病毒感染H1975OR细胞(Rab26 OE组)后给予1 μM奥希替尼处理48 h，通过CCK-8和TUNEL判断细胞活力和凋亡情况，用流式细胞术检测细胞ROS水平。用Western blot检测H1975和H1975OR中Nrf2蛋白经10 mM MG132处理8 h后的表达水平。对Nrf2进行siRNA转染H1975OR细胞后给予1 μM奥希替尼处理48 h，通过CCK-8判断细胞活力，利用流式细胞术检测细胞ROS水平。结果:H1975OR中Rab26 mRNA和蛋白表达低于H1975细胞(P<0.05)，H1975OR中Nrf2蛋白表达高于H1975细胞(P<0.05)，H1975OR组和H1975组之间的mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。奥希替尼干预后Rab26 OE组的细胞活力低于Vector组，ROS水平和凋亡水平较Vector组升高(P<0.05)。Rab26 OE组中Nrf2蛋白表达水平较Vector组降低，两组间Nrf2 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。经MG132处理，Nrf2蛋白水平在Vector组和Rab26 OE组中升高(P>0.05)。敲低Nrf2，奥希替尼干预增加H1975OR细胞中ROS水平，抑制其细胞活力。结论:Rab26可负性调控Nrf2蛋白表达，促进奥希替尼诱导的ROS的过度产生，促进细胞凋亡，增强肺癌耐药细胞对奥希替尼的敏感性。

目的:根据转录组测序技术分析介导肺癌奥希替尼耐药的信号通路，发现潜在干预靶点。方法:体外构建肺癌奥希替尼一线/二线治疗模式下配对的敏感/耐药细胞株，采用高通量测序技术检测耐药前后细胞转录本表达量并使用R-package CORNAS筛选差异表达基因，借助Venny在线工具分析两组配对细胞株差异表达基因的交集，运用DAVID Bioinformatics Resources数据库分别对两种耐药模式下共有差异基因和特有差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)信号通路和基因本体(gene ontology, GO)功能富集分析。采用STRING 12.0数据库分析关键通路富集基因相互作用关系及靶点分子，借助chiplot在线工具绘制分子相互作用网络图。结果:两组配对细胞株共有差异表达基因显著富集在Cell Cycle通路，一线治疗耐药特有差异基因富集在Cell Cycle和Ribosome biogenesis in eukaryotes通路，二线治疗耐药特有差异基因富集在MAPK signaling通路；GO富集分析发现共有差异表达基因参与cell division，分子功能是ATP binding，一、二线治疗耐药特有差异表达基因分别参与了rRNA processing和inflammatory response生物过程，主要分子功能分别是RNA binding和Protein binding；共筛选出5种关键靶点分子，包括CCNB1(共有)、CDC25A和NOP56(一线耐药特有)、JUN和MYC(二线耐药特有)。结论:奥希替尼一线或二线治疗模式下共同及特有的潜在获得性耐药机制，为克服奥希替尼耐药提供潜在的治疗靶点。

病例报告1 临床资料患者,男,63 岁,吸烟指数 400. 2018 年 12 月 28日因"体检发现CEA升高"于广州市第一人民医院就诊.结合影像学检查、穿刺活检病理、免疫组化(图 1A～C)确诊为:右肺下叶肺腺癌,伴肝、右肾上腺转移,cT1cN2M1c,Ⅳ期.

奥希替尼是一种第三代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制药(EGFR-TKI),对EGFR-TKI-致敏和EGFR-T790M耐药性突变具有选择性.有证据表明,联合化疗可能会扩大EGFR-TKI治疗的益处.本研究为一项国际开放Ⅲ期临床试验,研究者按照1∶1的比例随机分配患有EGFR突变(外显子19缺失或L858R突变)的晚期非小细胞癌症(NSCLC)患者,既往均未接受过晚期疾病治疗.奥希替尼化疗组和奥希替尼单药组分别接受奥希替尼(80 mg,qd)+化疗[培美曲塞500 mg·m-2加顺铂(75 mg·m-2)或卡铂(药理学指导剂量)]或接受奥希替尼单药治疗(80 mg,qd).主要治疗终点是研究者评估的无进展生存期.还评估了缓解率和安全性.