目的:探讨肾癌索拉非尼耐药相关长链非编码RNA(lncRNA-SRLR)对骨肉瘤U2OS细胞侵袭和转移的机制。方法:应用慢病毒空载对照(LV-NC)和慢病毒lncRNA-SRLR过表达载体(LV-over/SRLR)转染U2OS细胞，并建立细胞稳转株U2OS/NC和U2OS/SRLR。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA-SRLR和赖氨酸羟化酶(PLOD2)mRNA的相对表达量。采用transwell和划痕实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测白细胞介素6(IL-6)的表达情况。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测lncRNA-SRLR细胞定位。采用免疫荧光法检测PLOD2蛋白的表达情况。采用Western blot法检测PLOD2和FAK/STAT3通路相关蛋白的表达情况。结果:qRT-PCR检测结果显示，U2OS/NC和U2OS/SRLR细胞中lncRNA-SRLR mRNA的相对表达量分别为1.00±0.01和3 964.97±0.05，差异有统计学意义( P<0.001)。PLOD2 mRNA在U2OS/SRLR细胞中的表达量为2.77±0.11，明显高于对照U2OS/NC细胞(1.00±0.04， P<0.01)。划痕实验和侵袭实验均显示，U2OS/SRLR细胞的迁移和侵袭能力明显高于U20S/NC细胞( P<0.05)。ELISA法检测结果显示，U2OS/NC和U2OS/SRLR细胞上清液中IL-6的表达水平分别为(125.38±11.22)pg/ml和(119.97±13.43)pg/ml，差异无统计学意义( P>0.05)。免疫荧光检测结果显示，U2OS/SRLR细胞中PLOD2蛋白的表达明显高于U2OS/NC细胞。Western blot法检测结果显示，U2OS/SRLR细胞中PLOD2、p-FAK和p-STAT3等蛋白的相对表达量明显高于U2OS/NC细胞，差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:lncRNA-SRLR可能通过作用于PLOD2，激活FAK/STAT3通路诱导了骨肉瘤U2OS细胞的侵袭和转移。

目的:探讨奥希替尼对过表达赖氨酸羟化酶2(PLOD2)的HCC827细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其PLOD2诱导奥希替尼耐药的作用机制。方法:应用LV－vector和LV－over/PLOD2慢病毒载体转染肺癌HCC827细胞，应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT－PCR)和Western blot法检测PLOD2的表达情况，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测奥希替尼的抗细胞增殖能力，应用细胞划痕实验和Transwell实验检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，应用免疫荧光法检测E－cadherin和vimentin的表达，应用Western blot法检测上皮间质转化(EMT)、FAK－PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果:MTT检测结果显示，过表达PLOD2的HCC827－PLOD2细胞对奥希替尼的敏感性降低，半数抑制浓度>1 000 nmol/L，耐药指数>100。细胞划痕实验结果显示，HCC827－PLOD2细胞迁移的距离为HCC827－vector细胞的(2.13±0.21)倍。Transwell结果显示，HCC827－PLOD2细胞的穿膜细胞数为(212.78±10.43)个，与对照组HCC827－vector细胞[(101.32±12.52)个]比较，差异有统计学意义( P<0.01)。免疫荧光检测结果显示，与HCC827－vector细胞比较，HCC827－PLOD2细胞中E－cadherin的表达下调，vimentin的表达上调；奥希替尼可下调HCC827－vector细胞中vimentin的表达，上调E－cadherin蛋白的表达，但对HCC827－PLOD2细胞中E－cadherin和vimentin的表达无明显调控作用。Western blot结果显示，过表达PLOD2可下调E－cadherin蛋白的表达，上调vimentin蛋白的表达，奥希替尼可抑制HCC827－PLOD2细胞中磷酸化表皮生长因子受体的表达，但对PLOD2、p－FAK、p－AKT、p－ERK和vimentin等蛋白的表达无明显抑制作用，对E－cadherin蛋白的表达亦无上调作用。 结论:PLOD2可能通过促进EMT的表达，激活FAK－PI3K/AKT及MAPK信号通路诱导奥希替尼耐药。

目的:利用核磁共振波谱技术（NMR）检测遗传代谢病患者尿液中代谢产物的种类及含量变化，探讨NMR技术在遗传代谢病诊断中的应用价值。方法:收集2019年3至6月上海交通大学医学院附属新华医院确诊的20例遗传代谢病患者尿液样本，其中包括甲基丙二酸血症（MMA）9例。利用NMR脉冲宽度定量法和气相色谱质谱（GC/MS）半定量法测定遗传代谢病患者尿中代谢物的成分，分析2种方法中异常代谢物的水平。结果:NMR技术可检测MMA、异戊酸血症、戊二酸血症、丙酸血症、3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症、鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症、希特林蛋白缺乏症、Canavan病、酪氨酸血症、赖氨酸尿蛋白不耐受症患者尿中特征性代谢物水平显著升高，平均为参考值区间上限值的8倍，最高可达545倍。相较于GC/MS，NMR技术可检测数量更多的待测物，包括有机酸、氨基酸、糖类等。在9例治疗前MMA患者中，NMR法甲基丙二酸和3-羟基丙酸水平［1 800（180~12 000）和50（0~270）mmol/mol Cr］均明显高于参考值（0~31、0~35）；GC/MS法甲基丙二酸和甲基枸橼酸水平［136.56（43.79~518.67）和4.87（1.52~7.52）］均明显高于参考值（0~4、0~0.7）。结论:NMR和GC/MS技术对有机酸血症的诊断均具有特异性，GC/MS技术检测的主要物质是有机酸，NMR技术可突破这种限制，检测尿液中多种代谢物水平。

机体器官由实质和间质两部分构成.纤维化是指过量的结缔组织形成,实质细胞部分减少,可发生于全身多种组织器官当中,在肺、肝脏和肾脏最为常见,可致脏器结构的破坏及功能减退,严重时甚至可威胁生命.细胞外基质(extracellular matrix,ECM)主要由胶原蛋白、非胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖与氨基聚糖几种成分组成,内含大量的信号分子,参与控制细胞的生长与代谢等活动.胶原蛋白交联是纤维化基质稳定的必要过程,可促进纤维化发展[1].赖氨酰氧化酶家族(lysyl oxidases,LOXs)是通过赖氨酸和羟赖氨酸残基来维持正常结缔组织完整性和成熟性的关键蛋白酶家族,通过介导ECM内胶原蛋白与弹性蛋白的交联,促进其形成与成熟.LOX表达异常时可导致胶原蛋白与弹性蛋白发生过度的交联反应,使其不易被基质降解酶所降解,最终导致纤维化疾病的发生[2].本文针对临床中几种比较常见的纤维化疾病,结合国内外文献对LOXs在特发性肺纤维化、肝纤维化及肾纤维化这几类疾病中的作用以及可能的致病机制和潜在的治疗手段作一综述.

目的 通过研究酿酒酵母中脱氧羟腐胺赖氨酸合酶DHS(Dys1)的结构,揭示羟腐胺赖氨酸化修饰的分子机制,为人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)等高增殖性疾病的治疗提供理论基础和依据.方法 利用大肠埃希菌BL21表达系统,体外构建表达载体并表达Dys1.通过亲和层析、分子筛等方法分离纯化Dys1的蛋白质样品.在6％聚乙二醇(PEG)8000、0.1 mo1/L 羟乙基嘁嗪乙磺酸(Hepes)pH 6.5、8％乙二醇的条件下得到Dys1的锥形晶体.用X射线衍射晶体,用CCP4i、Coot软件解析2.8 ?分辨率下的Dys1三维晶体结构.结果Dys1的整体结构为四聚体,活性口袋和辅因子NAD+结合位点位于每个单体之间,单体的核心部位形成一个罗斯曼折叠,构成活性位点的氨基酸残基具有高度保守性.结论 首次解析了 Dys1的三维结构,发现了辅因子NAD+与酶的结合模式,证实了该酶四聚体的形式和N端的模体是其行使催化功能所必需的.

[目的]探讨结肠癌患者癌组织中赖氨酸羟化酶2(PLOD2)、巨噬细胞表达共刺激分子VSIG4表达及意义.[方法]收集经病理确认的I～Ⅳ期结肠癌患者,应用免疫组化方法检测癌组织及其癌旁组织中的PLOD2、VSIG4表达,分析两者表达的相关性及与患者临床病理特征的关系.随访并探讨PLOD2、VSIG4表达与患者5年总生存率关系.Kaplan-Meier法绘制生存曲线,应用单因素及多因素Cox回归分析影响患者5年总生存率的因素.[结果]结肠癌癌组织及其癌旁组织中PLOD2表达阳性率分别为68.75％(66/96)、25.00％(24/96)(P＜0.05),VSIG4 表达阳性率分别为 56.25％(54/96)、18.75％(18/96)(P＜0.05).Spearman 相关性分析显示,结肠癌癌组织中PLOD2与VSIG4表达呈正相关(r=0.363,P=0.041).PLOD2表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P＜0.05);VSIG4表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P＜0.05).PLOD2阳性表达者5年总生存率为18.03％,阴性表达者为42.67％(x2=6.969,P=0.008);VSIG4阳性表达者5年总生存率为17.85％,阴性表达者为41.42％(x2=9.308,P=0.002).单因素分析结果显示:TNM分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、PLOD2表达、VSIG4表达是影响患者5年总生存率的因素(P均＜0.05);多因素生存分析显示:TNM分期、PLOD2表达是影响患者5年总生存率的独立影响因素(P＜0.05).[结论]结肠癌患者癌组织中PLOD2、VSIG4表达均升高,两者可作为判断病情及预测预后的因素.

蛋白质的翻译后修饰是细胞生命活动的基本形式之一,对蛋白质生物功能的发挥具有极为重要的影响,包括细胞的生长、分化、代谢等生命过程.赖氨酸酰化修饰是重要研究内容之一,其广泛参与细胞分化、细胞代谢等重要生理活动,成为生命科学领域研究热点.随着生物质谱的扫描速度、灵敏度、分辨率的不断提高,近几年来许多新的赖氨酸酰化修饰被研究者鉴定.该文总结了琥珀酰化、巴豆酰化、丙二酰化、戊二酰化、2-羟基异丁酰化、β-羟基丁酰化等新型赖氨酸酰化修饰的发现确证、修饰调控酶、底物鉴定和生理病理功能等方面的最新研究进展.

成纤维细胞生长因子23(FGF23)是一种骨源性激素,它作用于其主要靶器官-肾脏,参与调节磷、钙和钠的重吸收以及活性维生素D(1,25(OH)2D)的合成.在近端肾小管,FGF23通过激活胞外信号调节激酶-1/2(ERK1/2)和血清/糖皮质激素调节激酶-1(SGK1)级联信号传导,使Na+/H+交换调节辅因子(NHERF)-1磷酸化,随后导致钠磷协同转运蛋白(NaPi)-2a内在化和降解,从而抑制磷重吸收;FGF23通过下调1α-羟化酶表达,同时上调24-羟化酶表达,从而抑制1,25(OH)2 D合成.在远端肾小管,FGF23通过激活赖氨酸缺陷型蛋白激酶-4(WNK4),上调上皮钙离子通道TRPV5(瞬时性受体阳离子电位通道亚家族V成员5)和Na+:Cl-协同转运蛋白(NCC)的顶膜表达,从而促进钙和钠的重吸收.临床中发现,由于遗传性和获得性原因导致的血FGF23浓度异常与慢性肾脏病(CKD)及其并发症密切相关.

目的:观察独活寄生汤治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎(KOA)患者血清赖氨酸,β-隐黄素含量变化及其与疼痛的相关性.方法:将73例天津中医药大学第一附属医院确诊的KOA患者随机分为观察组(42例)及对照组(31例),观察组给予独活寄生汤150 mL/次,2次/d口服,对照组给予硫酸氨基葡萄糖胶囊0.5 g/次,3次/d口服,两组患者均治疗4周,以膝关节视觉模拟评分法(visual analogue scalescore,VAS),压痛值评定治疗前后疼痛变化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组患者血清中前列腺素E2(PGE2),P物质(SP),多巴胺(DA),5-羟色胺(5-HT)含量;赖氨酸含量采用全自动氨基酸分析仪进行检测;采用高效液相色谱法检测β-隐黄素血清含量;采用Pearson相关性检验分析赖氨酸,β-隐黄素与VAS评分,压痛值,PGE2,SP,DA,5-HT相关性.结果:与本组治疗前比较,治疗后对照组、观察组患者VAS评分升高,压痛值降低(P＜0.05),治疗后与对照组相比,观察组VAS评分升高,痛值降低(P＜0.05);与本组治疗前相比,治疗后两组患者血清PGE2,SP,DA及5-HT含量均下降,治疗后与对照组相比,观察组患者血清PGE2,SP,DA及5-HT含量明显下降(P＜0.05);对照组治疗前后血清赖氨酸,β-隐黄素含量无明显变化,观察组治疗后较治疗前血清赖氨酸,β-隐黄素含量升高(P＜0.05);两组患者治疗前后血清赖氨酸,β-隐黄素与压痛值呈正相关(P＜0.05),与VAS,PGE2,SP,DA,5-HT均呈负相关(P＜0.05).结论:独活寄生汤治疗肝肾亏虚型KOA可明显缓解疼痛,可能与赖氨酸,β-隐黄素血清含量升高有关.

目的 探讨赖氨酸羟基化酶3(procollagen-lysine,2-oxoglutarate 5-dioxygenase 3,PLOD3)在胶质母细胞瘤中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测61例胶质母细胞瘤及40例正常脑组织中PLOD3蛋白的表达.分析PLOD3在胶质母细胞瘤中的表达与临床病理参数以及预后的关系.结果 胶质母细胞瘤组织中PLOD3表达水平显著高于正常脑组织(均P<0.05);PLOD3的表达在不同性别、不同年龄、不同KPS评分以及不同肿瘤体积的患者中差异无统计学意义(均P>0.05),在肿瘤切除完整与否的患者中差异有统计学意义(P<0.05).PLOD3高表达与低表达的胶质母细胞瘤患者相比具有更短的生存期(P<0.05).结论 PLOD3在胶质母细胞瘤中高表达,并与预后相关,可能参与了胶质母细胞瘤的发生发展.