目的:建立一种宏基因组二代测序（mNGS）DNA流程检测BALF标本的性能确认方法。方法:以Hela细胞代表宿主细胞，向无菌生理盐水中加入不同浓度Hela细胞、7种病原体（肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、白色念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和腺病毒）和干扰物质制备模拟BALF标本，同时收集临床BALF标本，以传统检测方法为参比方法，评价mNGS检测结果，确定mNGS的最低检出限、精密度、抗干扰能力、稳定性和准确度。结果:模拟标本中，肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、白色念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和腺病毒7种病原体的最低检出限分别为150、262、102、67、96、83 CFU/ml和439 拷贝/ml。模拟阳性标本中所有病原体重复检测结果符合率均为100%。抗干扰试验结果显示，人源核酸浓度越高，mNGS检出病原体序列数越少。以大肠埃希菌和宋内志贺菌评价mNGS对近源物种分辨能力，结果显示，当宋内志贺菌浓度为4 000 CFU/ml时，该系统能稳定分辨大肠埃希菌和宋内志贺菌。稳定性试验结果显示，标本进行1、2、3次冻融或在4 ℃、-20 ℃、-80 ℃放置36 h后病原体序列数无明显变化。与传统检测方法相比，17份临床标本的初步准确度为82.4%（14/17）。2021年10月25日至2022年9月14日同济医院同时进行mNGS和传统方法检测的临床BALF标本的持续评估结果显示，mNGS相对细菌培养、真菌培养、分枝杆菌培养、结核分枝杆菌培养和常规PCR技术的准确度分别为67.5%（472/699）、81.5%（570/699）、92.3%（335/363）、96.4%（350/363）和86.8%（132/152）。与常规PCR技术比较，mNGS检测耶氏肺孢子菌、腺病毒、肺炎支原体的准确度分别为89.4%（84/94）、93.3%（56/60）和87.1%（61/70）。结论:通过制备模拟BALF标本以及以传统检测方法为参比方法，可以初步评价mNGS检测BALF标本的性能特征。

目的:评估血液肿瘤患者支气管镜透视下活检及支气管肺泡灌洗术（BAL）在肺部并发症中的诊断价值及安全性。方法:回顾性分析2016年5月至2022年5月68例来自香港大学深圳医院和深圳市第三人民医院血液肿瘤合并肺部病变患者，其中男37例，女31例，中位年龄56岁（年龄范围21~90岁），其中>65岁者20例。诊断性纤维支气管镜实施的体征包括发热、咳嗽、低氧血症、咯血、不明原因的呼吸困难及影像学改变，评估有肺部团块阴影患者进行支气管镜透视下活检，包括内带及外带肺叶团块及高密度影，活检组织进行病理及特殊染色（Grocott染色），BAL获取肺泡灌洗液（BALF）进行微生物涂片/培养及巨细胞病毒、耶氏肺孢子菌及结核分枝杆菌涂片、结核分枝杆菌DNA、结核分枝杆菌培养、真菌培养等，对血液肿瘤患者肺部并发症进行病因学分析，并观察血液肿瘤患者纤维支气管镜相关并发症。结果:全部血液肿瘤患者支气管镜检查后均做BALF检测，进行支气管镜透视下活检46例，明确病原体感染共40例，包括真菌感染12例、细菌感染9例（粪肠球菌、铜绿假单胞菌各2例，金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌、缓症链球菌各1例），病毒感染9例（巨细胞病毒5例、副流感病毒Ⅲ型3例、呼吸道合胞病毒1例），耶氏肺孢子菌肺炎确诊4例，耶氏肺孢子菌可疑与真菌混合感染3例，隐球菌1例，可疑结核分枝杆菌感染2例。28例未找到病原体，包括机化性肺炎6例、与血液肿瘤病史相关6例、其他未查及病原菌16例。全部患者未出现因支气管镜并发症导致的死亡及其他严重并发症。结论:血液肿瘤患者肺部并发症比较常见，应用支气管镜透视下活检安全性良好，早期进行纤维支气管镜检查可提供细菌、真菌、耶氏肺孢子菌及病毒感染等病原学诊断证据，提高诊断率。

报道国内首例慢性播散性副球孢子菌病。患者男，49岁，因皮肤丘疹、结节1年，口腔黏膜丘疹、溃疡2个月入院。皮肤科检查：左足水肿，左足底多发溃疡，表面结痂，左足第3、4趾间及第4、5趾间溃疡，基底呈颗粒状，伴点状出血、渗出；左足背、左足内侧及左膝多发丘疹、结节、斑块，中央溃疡、结痂；左腕部2个丘疹，上唇左侧1个丘疹，表面结痂；牙龈、颊黏膜、唇黏膜及上颚可见红色斑块伴溃疡、点状出血，皮损以左侧为主。浅表淋巴结彩超：双侧颈部及锁骨上窝淋巴结肿大，左侧为著。胸腹部计算机断层扫描图像示：双肺弥漫粟粒样结节影及条索状、云絮状、结节状高密度影，左侧肾上腺明显增粗。口腔、左下肢皮损组织真菌免疫荧光染色，可见酵母细胞。口腔黏膜、左下肢皮损组织病理：肉芽肿性炎，多核巨细胞内外可见酵母细胞，折射双膜，无芽、单芽或多芽；过碘酸希夫染色、六胺银染色阳性。左下肢皮损组织真菌培养：25 ℃、37 ℃沙氏葡萄糖琼脂培养基中培养阳性，均为菌丝相。口腔黏膜及肺泡灌洗液宏基因组学测序：巴西副球孢子菌。诊断：慢性播散性副球孢子菌病。予伊曲康唑胶囊400 mg/d口服，1个月后皮肤、黏膜皮损明显好转，肺部及左侧肾上腺影像学表现亦好转，3个月后伊曲康唑减量至200 mg/d。随访10个月，病情进一步好转。

患者，女，36岁。因“胸闷气喘6 d，干咳2 d”于2021年12月4日入住安徽中医药大学第一附属医院呼吸科。6 d前无明显诱因下患者出现胸闷、呼吸急促，活动后症状加剧，咳嗽伴口干，背部酸痛。2021年12月3日门诊查血常规：红细胞计数（RBC）3.70×10 12/L，白细胞计数（WBC）8.82×10 9/L，中性粒细胞比值（N%）94.7%，淋巴细胞比值（L%）3.70%，血红蛋白（HGB）101 g/L。血生化：肌酐（CREA）133.3 μmol/L，尿酸（UA）493 μmol/L，估算肾小球滤过率46 mL·min -1·1.73 m -2，超敏C反应蛋白（HCRP）29.27 mg/L；血气分析：pH 7.45，二氧化碳分压（PCO 2）35 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），氧分压（PO 2）74 mmHg，血氧饱和度（SaO 2）98.4%；D-二聚体0.74 mg/L；脑钠肽（BNP）5.21 pg/L；胸部CT：两肺广泛磨玻璃密度影，两下肺斑片状实变影（见 图1A）。既往有”慢性肾脏病 3期”病史5个月余，口服醋酸泼尼松片、骨化三醇软胶囊、百令胶囊、阿利沙坦酯，规范治疗中。

目的:对艰难拟梭菌630（Cd630）菌株和致病决定区基因座（PaLoc）敲除突变株（ΔPaLoc）进行转录组测序和分析，获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱，并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力，为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫苗奠定基础。方法:对Cd630菌株和ΔPaLoc敲除突变株进行转录组测序，接着对差异表达基因进行筛选，随后对差异基因进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。最后在非洲绿猴肾细胞（Vero）和人克隆结肠腺癌细胞株（Caco-2）中进行Cd630野生型菌株和ΔPaLoc敲除突变菌株的细胞毒性验证实验。结果:转录组数据表明ΔPaLoc突变株毒素基因 tcdA、 tcdB未转录。 CD630_36010、 CD630_020910、 CD630_02080和 cel等基因分别上调17.92、11.40、8.93和7.55倍；编码高丝氨酸脱氢酶的 hom2基因、孢子形成蛋白基因 CD630_15810、锌结合脱氢酶基因 CD630_23230、1-磷酸半乳糖醇 5-脱氢酶基因 CD630_23240分别下调为野生型的0.06、0.075、0.133和0.183倍。GO和KEGG富集分析结果表明，ΔPaLoc突变株差异转录基因主要富集于密度感应系统、ABC运输系统、双组分系统、磷酸转移酶（PTS）系统、糖代谢通路以及万古霉素耐药相关的通路等。细胞毒力实验结果表明野生型Cd630菌株对Vero细胞和Caco-2细胞具有毒力，ΔPaLoc突变株丧失对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力。 结论:通过对Cd630和ΔPaLoc突变株进行转录测序，表明毒素基因未转录，其他差异性基因可为进一步研究ΔPaLoc突变株生理生化特征提供指引。细胞毒力实验表明，ΔPaLoc突变株丧失了对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力，ΔPaLoc突变株为艰难拟梭菌全菌减毒疫苗的构建奠定了基础。

目的 研究灵芝孢子粉对去卵巢骨质疏松大鼠的治疗作用.方法 随机取39只SD雌性大鼠进行去卵巢手术建立骨质疏松模型,剩余20只进行假手术.饲养16周建模成功后随机从假手术大鼠中取10只设为空白组(C组),随机取30只去势大鼠分为模型组(M组)、灵芝孢子粉低浓度组(BL组,400 mg/kg)和灵芝孢子粉高浓度组(BH组,1 600 mg/kg),每日1次灌胃治疗,持续10周.比较各组大鼠的体重变化、脏器指数、股骨骨密度、骨小梁微观结构变化、骨小梁参数、骨生物力学性能、血清中骨代谢物水平.结果 各组大鼠体重变化差异无统计学意义(P＞0.05),肝、脾和胸腺的脏器指数差异无统计学意义(P＞0.05),与C组相比,M组大鼠的子宫系数显著降低(P＜0.01),而BL组与BH组大鼠的子宫系数显著高于M组(P＜0.05).与M组相比,BL组与BH组大鼠的股骨骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、最大载荷、弯曲强度、弹性模量和血清中雌二醇水平(E2)均显著提升(P＜0.05);而骨小梁分离度(Tb.Sp)、血清中骨钙素(OC)、骨碱性磷酸酶(BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)水平均显著降低(P＜0.01).Micro-CT骨微结构图像显示M组大鼠骨小梁减少而稀疏,而BL组与BH组大鼠骨小梁增多而致密.结论 灵芝孢子粉对去卵巢大鼠的骨质疏松有一定治疗作用,推测其通过改善内分泌功能提升雌激素水平,以此平衡骨吸收与骨形成,从而改善骨质量、提升骨强度、提高骨密度.

为准确测定灵芝孢子粉产品的酸价,阐明影响酸价的关键因素,本试验建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)分析方法测定孢子油中游离脂肪酸的含量.通过优化色谱条件,建立了亚油酸、棕榈酸和油酸的HPLC的定量测定方法.该方法精密度、重复性和稳定性好,可用于灵芝孢子粉、孢子油及其相关产品中亚油酸、棕榈酸和油酸成分的定量测定.与国标化学法测定的结果比较,两种方法的匹配度较好,HPLC-ELSD 法灵敏度高,可以测定不同脂肪酸的含量.通过比较分析发现,贮存时间对破壁灵芝孢子粉脂肪酸影响最大,同时产地和采收时间也影响酸价的大小.对 8 种不同品牌市售灵芝孢子油产品的脂肪酸含量测定,发现脂肪酸含量相差较大,其中含量最高的为(99.81±10.21)mg/g,最低的为(1.90±0.12)mg/g.因此新建立的HPLC-ELSD法可精确定量灵芝孢子粉中游离脂肪酸,为市场上灵芝孢子类产品的质量控制提供科学依据.

昆虫病原真菌是寄生于昆虫而引起昆虫死亡的一类真菌,具有高杀虫效力且对环境的影响较小,常被用作生物杀虫剂来控制害虫,具有重要的应用价值.本文对昆虫病原真菌的分类信息进行了归纳总结,系统阐述了真菌侵染宿主的过程以及在感染过程中对宿主行为的改变及孢子传播的机制.随后梳理了昆虫在面对感染时采取相应抵抗感染的策略,主要包括体壁防御和自身免疫系统的防御以及行为上避免真菌病原体.在此基础上讨论了真菌对昆虫的致病机制以及与昆虫的防御机制二者联系紧密的协同进化关系.最后我们对未来的研究方向进行了展望,强调应该依据传染病传播动力学的基本模型探究昆虫虫口密度与环境中的孢子浓度对传染病暴发的影响,研究真菌传播规律以指导田间应用.

目的 探讨宏基因组下一代测序技术(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)对于粪类圆线虫病(strongyloidiasis)合并其他病原体感染的诊断价值和优势.方法 根据纳入和排除标准,回顾性收集2020年11月至2022年10月就诊于中山大学孙逸仙纪念医院并诊断为粪类圆线虫病的5例患者临床资料.分析患者临床特征,比较5例患者共6份样本通过使用mNGS、液基细胞学镜检方法对粪类圆线虫(Strongyloides stercoralis)的检出率,并与采用粪便直接涂片法对5例患者的粪便查找粪类圆线虫虫卵的检出率进行比较.分析比较6份样本的mNGS与细菌和真菌培养结果的一致性.结果 5例患者中有3例为农民.5例患者均存在基础疾病,主要临床表现为发热、咳嗽,影像特征多为玻璃影、密度影.5例患者血常规检查结果中有4例提示中性粒细胞百分比升高,5例患者嗜酸性粒细胞均未见升高.5例患者的降钙素原均升高.5例患者6份样本中,mNGS对粪类圆线虫的检出率为100％,液基细胞学镜检的检出率为50％.5例患者采用粪便直接涂片法查找粪类圆线虫虫卵的检出率为20％.6份样本中,mNGS均检测到人类疱疹病毒5型,有3份样本检测到耶氏肺孢子菌,3份样本检测到烟曲霉菌,2份样本检测到铜绿假单胞菌.除去mNGS检测到的粪类圆线虫和病毒,将培养结果与mNGS检出的细菌和真菌结果进行比较,有1例样本完全一致,2例样本不一致,3例样本部分一致.结论 mNGS对于粪类圆线虫的检出率可能高于粪便直接涂片法和液基细胞学镜检法.相对于常规细菌和真菌培养,mNGS检测范围广,可能更适合用于粪类圆线虫病合并其他病原体感染的检测,对于混合感染具有明显的诊断优势,可能可以作为粪类圆线虫病的早期诊断方法.

为探讨黄瓜棒孢叶斑病生防细菌HK11-9 的防病能力,通过皿内试验测定HK11-9 对黄瓜棒孢叶斑病菌多主棒孢霉的抑菌活性、通过离体和活体接种试验评价其对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果,进行盆栽试验分析HK11-9 在黄瓜叶部的定殖能力及其对黄瓜叶部防御酶活性的影响,同时,测定HK11-9 的生物学功能并对其进行鉴定.结果显示,HK11-9 显著抑制多主棒孢霉的菌丝生长和孢子萌发;在离体接种和活体接种条件下,HK11-9 均对黄瓜棒孢叶斑病具有明显的防治效果,其防治效果分别达到 62.80%和 67.73%;同时,HK11-9 在黄瓜叶部具有稳定的定殖能力,在黄瓜叶部能保持 104 CFU/g的定殖密度,能够显著提高黄瓜叶部PAL、POD和PPO活性.HK11-9 菌株具有分解蛋白、分解纤维素、分解淀粉和产嗜铁素作用,对多种植物病原真菌具有抑菌活性;并根据形态特征、生理生化特性和 16S rRNA序列同源性分析,将HK11-9 菌株鉴定为多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa).综上所述,生防细菌HK11-9 防治黄瓜棒孢叶斑病具有极大的潜力.