目的 探讨安五脂素对氧化应激介导的神经元自噬和凋亡的干预作用.方法 选用鼠性海马神经元细胞,用2.5 mmol·L-1谷氨酸(Glu)制备氧化应激细胞模型.将细胞分为正常组(正常培养)、模型组(2.5 mmol·L-1 Glu)和低、中、高剂量实验组(2.5、5、10 μmol·L-1安五脂素处理)、抑制药组(2.5 mmol·L1 Glu+10 μmol·L-1 安五脂素+10 μmol·L-1 LY294002).用流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3B)、泛素结合蛋白(p62)、细胞周期蛋白p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平.结果 正常组、模型组和低、中、高剂量实验组的凋亡率分别为(4.58±1.25)％、(8.75±0.55)％、(6.30±1.71)％、(5.97±2.27)％和(5.49±1.71)％.模型组与正常组比较,在统计学上差异有统计学意义(P＜0.01);低、中、高剂量实验组与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.01).正常组、模型组和低、中、高剂量实验组及抑制药组LC3B蛋白水平分别为0.28±0.02、0.74±0.02、1.02±0.04、0.70±0.03、0.26±0.02和 0.21±0.01;p62 蛋白水平分别为 0.49±0.08、0.33±0.03、0.50±0.07、0.59±0.01、0.64±0.13 和0.65±0.06;p21 蛋白水平分别为0.87±0.02、1.18±0.03、0.98±0.03、0.88±0.03、0.72±0.06 和 0.81±0.02;Bcl-2/Bax 蛋白水平分别为 1.74±0.23、1.11±0.10、1.38±0.05、1.66±0.26、1.58±0.29 和 1.53±0.09.上述指标,模型组与正常组比较,高剂量实验组与模型组比较,抑制药组与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 安五脂素可通过调控细胞自噬和凋亡过程,减轻谷氨酸所诱导的海马神经元损伤,有明显的神经保护作用.

目的 建立瑶药小钻特征图谱及其主要成分安五脂素含量测定方法,并评价安五脂素抗炎活性.方法 采用高效液相色谱法,以乙腈-0.5%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立小钻药材的特征图谱和进行相似度评价,并测定小钻中安五脂素含量.以脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞为炎症细胞模型,考察安五脂素对细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6水平的影响.结果 10批小钻样品的特征图谱相似度为0.901～0.994;标定了9个共有峰,指认了3个成分,分别为长南五味子素E、南五味子内酯A、安五脂素;安五脂素的含量为(0.72±0.05)～(1.21±0.03)mg/g(n=3).0.125～0.5 μg/mL的安五脂素可显著降低炎症模型细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P＜0.05或P＜0.01).结论 建立了小钻药材HPLC特征图谱及其安五脂素含量测定方法;安五脂素可能是小钻药材发挥抗炎作用的有效成分.

目的:建立南五味子指纹图谱方法,为南五味子质量评价提供依据.方法:以五味子酯甲、五味子甲素、安五脂素作为南五味子测定的指标性成分,建立 11 批南五味子药材指纹图谱.结果:建立了高分离度与高色谱峰纯度的南五味子指纹图谱方法,11 批南五味子样品指纹图谱的相似度均>0.970.结合试验前期的含量测定,确定样品为符合药典规定的正品南五味子(华中五味子).结论:该研究建立的南五味子指纹图谱方法,在南五味子的品种鉴定及质量评价中具有相当高的品种识别率与质量判断力,可以快速判断出南五味子质量与品种真伪,进一步完善了南五味子质量评价方法.

目的:建立复方胃痛胶囊指纹图谱和多成分含量测定方法.方法:基于HPLC法建立复方胃痛胶囊指纹图谱,并对样品中丹皮酚、吴茱萸碱、马兜铃酸A、吴茱萸次碱、安五脂素 5 个成分的含量进行测定.应用相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘判别分析法进行化学计量学研究.结果:建立了复方胃痛胶囊的HPLC指纹图谱,并标定 14 个共有峰.通过对照品对比,指认了 5 个成分,并发现吴茱萸碱和吴茱萸次碱在批次间的含量差异较大.15 批样品与对照图谱的相似度为 0.828～0.995.聚类分析和主成分分析均将 15 批样品分为 2 类,偏最小二乘判别分析确定吴茱萸碱和吴茱萸次碱等 6 个质量差异标志物.结论:所建立的复方胃痛胶囊指纹图谱和成分含量测定方法稳定、可靠,可为提升该制剂的质量标准提供参考.

目的 观察五味子安五脂素对肠缺血再灌注(II/R)损伤大鼠肺组织氧化及炎症指标的影响.方法 将32 只SD大鼠随机均分成 4 组:假手术(Sham)组,肠缺血再灌注(II/R)组,假手术+安五脂素(Sham+Anwu)组和II/R +安五脂素(II/R+Anwu)组,连续给药 14 d,1 次/d.假手术及 II/R完成后,取肺组织.苏木素-伊红(HE)染色观察各组肺组织形态学变化;检测肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的活性或含量及白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量.结果 病理学观察显示,II/R组肺组织损伤显著,而II/R+Anwu组肺组织损伤显著改善(P<0.05);II/R组肺组织中SOD、CAT与GSH活性较Sham组显著降低,MDA、TNF-α、IL-6 与IL-1β含量较Sham组相比显著升高(P<0.05);II/R+Anwu组肺组织SOD、CAT及GSH活性较II/R组显著升高,MDA、TNF-α、IL-6及IL-1β含量较II/R组显著降低(P<0.05).结论 安五脂素能够改善II/R大鼠肺组织损伤.该作用与其在肺组织中发挥抗氧化及抗炎作用有关.

根据中药质量标志物(Q-marker)的理念,采用超高效液相色谱法(UPLC)建立指纹图谱和多指标定量的方法,结合网络药理学研究,筛选南五味子保肝功效的潜在质量标志物.采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件对 15 批不同产地的南五味子指纹图谱进行相似度分析,相似度在 0.981～0.998.确定了 18 个共有成分,由聚类分析和主成分分析确定了 3个差异性成分;构建"成分-靶点-通路"网络图,预测南五味子保肝的核心成分,筛选出 14 个与南五味子治疗药源性肝损伤(drug-induced liver injury,DILI)作用相关的核心成分,通过作用于AKT1、CCND1、CYP1A1、CYP3A4、MAPK1、MAPK3、NOS2、NQO1、PTGS2 等靶点,调控脂质和动脉粥样硬化、乙型肝炎、白细胞介素-17、肿瘤坏死因子等信号通路发挥保肝作用.结合成分的可测性、特有性、有效性,预测五味子酯甲、安五脂素和五味子甲素是南五味子治疗DILI的质量标志物.15 批样品中五味子酯甲、安五脂素和五味子甲素的质量分数分别为 0.20%～0.57%、0.13%～0.33%、0.42%～0.70%.综上,该研究综合利用指纹图谱、网络药理学、含量测定等多技术的融合策略,科学合理地推测了南五味子治疗DILI的质量标志物,可为提升南五味子的质量评价标准、探索南五味子治疗DILI的作用机制提供依据.

目的 探讨安五脂素改善大鼠肝纤维化的效果及作用机制.方法 将50只SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱片组(0.1 mg/kg),安五脂素高、低剂量组(2.8、0.7 mg/kg),每组10只.除正常组外,其余各组大鼠均腹腔注射50%CCl4橄榄油混合溶液复制肝纤维化大鼠模型.造模结束后,各组大鼠从第9周开始灌胃相应药物或蒸馏水,每日1次,连续给药4周.实验期间观察大鼠一般情况;计算大鼠肝指数;采用比色法检测大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;采用HE染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理形态学和肝纤维化情况;采用Western blot法检测肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路及凋亡相关蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠饮食量下降,被毛稀疏、蓬乱,反应迟钝,体重增长速率减慢或体重降低;肝指数显著上升(P＜0.01);大鼠血清中ALT、AST、MDA含量均显著升高,SOD含量显著降低(P＜0.01);HE染色及Masson染色均观察到大鼠肝组织中有大量纤维增生,胶原容积分数显著升高(P＜0.01);大鼠肝组织中PI3K、Akt、磷酸化Akt、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平均显著下降,Bcl-2相关X蛋白表达水平显著升高(P＜0.01).与模型组比较,安五脂素高、低剂量组及秋水仙碱片组上述指标均显著逆转(P＜0.01或P＜0.05).结论 安五脂素可能是通过激活PI3K/Akt信号通路降低肝纤维化氧化应激反应、抑制肝细胞凋亡,发挥抗肝纤维化的作用.

肉豆蔻Myristicae Semen是常用药食同源中药,具有温中行气、涩肠止泻的功效,主要包括木脂素类、挥发油类和多酚类等化学成分,具有调节消化系统、抗癌、抗炎镇痛、抗菌、抗氧化等药理作用.通过对肉豆蔻化学成分、药理作用、毒性和临床应用进行综述,根据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)理念,从植物亲缘、采收时期和炮制方法、药效、药性、配伍、化学成分可测性等方面对肉豆蔻的Q-Marker进行预测分析,初步预测去氢二异丁香酚、肉豆蔻醚、安五脂素、甲氧基丁香酚、榄香素、丁香酚和α-蒎烯等为其可能的Q-Marker,为肉豆蔻质量评价和药品研发提供参考.

目的 建立HPLC-DAD法快速筛查五味子颗粒(糖浆)中南五味子代替五味子.方法 以安五脂素为指标性成分,该药物甲醇提取液的分析采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-水(60∶40);检测波长280 nm.结果 安五脂素在232 ～2 900 ng范围内线性关系良好(r=1),颗粒、糖浆中其平均加样回收率分别为97.4％、98.7％,RSD分别为1.51％、1.13％.14个企业的175批样品(124批颗粒,51批糖浆)均未掺加南五味子.结论 该方法简便、快速、可行,可确保五味子系列制剂的投料准确性.

目的:建立闪蒸-气相色谱/质谱法(FE-GC/MS)同时测定四神丸中补骨脂素、异补骨脂素、五味子甲素、去氢二异丁香酚、五味子乙素、五味子醇甲、吴茱萸碱和吴茱萸次碱8个有效成分的含量.方法:将四神丸粉末样品置于裂解器中,在300℃下闪蒸后采用GC或GC/MS分析,色谱柱为UA-5(30 m×0.25mm×0.25 μm),载气为氦气,程序升温(初始温度50℃,以10℃·min-1升至200℃,再以5℃·min-1升至300℃,10 min),进样口温度300℃,FID(300℃)或质谱检测器(EI离子源,无溶剂延迟,扫描范围m/z50～600).结果:8个有效成分达到完全分离,重复性良好,RSD小于6.2％.8个成分在20～10 000 ng范围内线性关系良好,r＞0.992,样品加标回收率为92.6％～107.5％.对7批四神丸样品进行了定量分析,并与HPLC法所得结果进行比较,通过五味子醇甲的含量变化及对安五脂素的质谱定性,可鉴别五味子的疑似掺杂.结论:该方法前处理简单,检测灵敏度高,准确可靠,可用于四神丸的质量控制.