局部黏着斑激酶(FAK)是一种细胞质内的蛋白酪氨酸激酶(PTK)，在多种癌细胞中过度表达和激活，与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关。FAK可以转移到癌细胞的细胞核，调节炎症基因表达，释放趋化因子和细胞因子，改变肿瘤微环境(TME)，促进免疫逃避和免疫治疗抵抗，可以作为肿瘤靶向治疗的潜在靶点。FAK的研究与应用为肿瘤治疗带来了新的曙光。

目的:探讨CXC趋化因子配体11(CXCL11)/CXC趋化因子受体3(CXCR3)生物轴对胆囊癌细胞侵袭迁移的调控作用及其机制。方法:将胆囊癌细胞株GBC-SD与外源性CXCL11共培养处理后，蛋白质印迹法(Western blot)检测局部黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达及磷酸化水平，Transwell实验检测细胞的侵袭迁移能力。采用RNA干扰技术沉默CXCR3基因表达，观察其对CXCL11介导FAK/PI3K/Akt信号通路活化的影响。评估CXCR3基因敲减、FAK抑制剂PF573228对CXCL11诱导胆囊癌细胞侵袭迁移的影响。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:Western blot实验结果表明，CXCL11共培养组磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)的相对表达量(0.849±0.082、0.824±0.084、0.865±0.081)均显著高于空白对照组(0.186±0.034、0.195±0.038、0.191±0.033)，差异有统计学意义( t＝12.917、11.821、13.286， P<0.05)；CXCR3敲减+CXCL11共培养组p-FAK、p-PI3K、p-Akt的相对表达量(0.215±0.048、0.223±0.057、0.217±0.052)均显著低于CXCL11共培养组(0.849±0.082、0.824±0.084、0.865±0.081)，差异有统计学意义( t＝11.578、10.234、11.605， P<0.05)。Transwell实验结果显示，CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著高于空白对照组[(168.2±18.4)个比(70.8±9.1)个， t＝10.635， P<0.05]；CXCR3敲减+CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著低于CXCL11共培养组[(79.6±10.1)个比(168.2±18.4)个， t＝9.445， P<0.05]；PF573228预处理+CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著低于CXCL11共培养组[(86.4±11.8)个比(168.2±18.4)个， t＝8.375， P<0.05]。 结论:CXCL11/CXCR3生物轴通过激活FAK/PI3K/Akt信号通路促进胆囊癌细胞的侵袭迁移能力。

目的 制备局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)抑制剂defactinib的微晶制剂,利用正电子发射型计算机断层显像检测仪(positron emission computed tomography,PET)对免疫缺陷小鼠肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)肿瘤模型进行PET检测,确定defactinib微晶制剂体内抑制HCC细胞摄取葡萄糖的作用,及其抗肿瘤活性.方法 利用球磨法制备defactinib微晶制剂,利用光学显微镜观察晶型特征.在不同HCC细胞系中检测FAK的蛋白表达水平,选取FAK最高表达的HCC细胞系接种于BalB/c免疫缺陷小鼠(裸鼠)皮下,形成皮下肿瘤.在皮下肿瘤中注射defactinib微晶制剂,在固定时间点收集动物血液或肿瘤组织标本,通过检测标本中defactinib的分布确定defactinib微晶制剂的缓释特性.在此基础上,使用defactinib微晶制剂在皮下肿瘤组织中进行注射.在固定时间点进行PET检测:动物行尾静脉注射300 μCi(11.1 MBq)的核素探针18 F-FDG,约50 min后进行PET检测,使用盖革计数器检测动物皮下肿瘤组织与血液的放射性强度比值,进行定量分析.结果 在所选细胞系中,MHCC97-H细胞中FAK的表达水平显著高于其他细胞系.defactinib微晶制剂具有缓释特性,能够长效抑制MHCC97-H皮下肿瘤组织对18F-FDG的摄取,单次给予defactinib微晶制剂就能够实现.结论 本实验成功制备了FAK抑制剂defactinib的微晶制剂,建立了利用PET检测defactinib微晶制剂活性的方法.

目的 基于转录组测序技术筛选甲状腺微小乳头状癌(papillary thyroid microcarcinoma,PTMC)淋巴结转移相关的差异表达基因,生物信息学进一步分析探讨具有调控作用的分子通路并寻找功能性靶向基因.方法 应用转录组测序技术对9例惰性和7例局部淋巴结转移的PTMC进行差异表达基因的筛查,并对差异基因进一步行生物信息学在线分析.结果 共筛选出1805个差异基因.经GO数据库分析,差异基因主要聚类在细胞黏附、细胞凋亡、细胞增殖、细胞分裂的调控、MAPK级联等集合中(P＜0.05);经KEGG数据库分析,局部黏着斑通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药通路、PI3K-Akt信号通路、p53信号通路以及癌症途径通路差异基因富集的显著程度高(P＜0.05),是应关注的关键通路;其中功能性下调基因PTEN差异表达明显,富集程度较高,处于信号通路的核心调控位置,是与PTMC淋巴结转移相关的重要基因(P＜0.05).结论 惰性及伴随淋巴结转移的PTMC在基因表达的整体模式上存在明显差异,而PTEN基因是需要重点关注的与PTMC淋巴结转移相关的潜在功能性靶向基因.

目的 设计合成2,4-二取代-5-(三氟甲基)吡啶类局部黏着斑激酶(FAK)抑制剂,并对其酶抑制活性进行评价.方法 以3-氰基-2-氟吡啶为起始原料,经过取代、还原、环合、酯化和偶联反应得到目标化合物Z1～Z8.采用HTRF技术测试目标化合物对FAK的体外酶抑制活性,以MTT法检测细胞增殖抑制活性.结果 与结论合成了8个2,4-二取代-5-(三氟甲基)吡啶类化合物,目标化合物的结构经1H-NMR和MS谱确证;初步体外酶活性测试和MTT法检测细胞增殖抑制活性结果表明,8个化合物均有良好的酶抑制活性和细胞增殖抑制活性,其中化合物z6的体外酶抑制活性和细胞增殖抑制活性较强[FAK:IC50 =6.6 nmol·L-1,U87-MG:IC50=(6.66±0.19) μmol·L-1,A549:IC50=(7.68±3.41) μmol·L-1],具有进一步研究价值.

局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体细胞内酪氨酸激酶,其同时具有激酶依赖和非激酶依赖的支架功能,在肿瘤的发生发展及转移侵袭中均起到重要作用,被认为是抗肿瘤药物研发的重要靶点.然而,传统的小分子抑制剂只能抑制其激酶活性,难以靶向非激酶依赖的支架功能.因此,迫切需要新颖的策略来研究FAK靶点,为FAK靶点的成药性及其相关药物的研发奠定基础.蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimera,PROTAC)技术是一种新兴的药物研发策略,其能招募E3泛素连接酶,特异性泛素化靶蛋白并通过蛋白酶体系统靶向降解目的 蛋白.PROTAC的独特作用机制能靶向降解FAK蛋白,从而消除FAK的支架功能,极大吸引了科研人员的兴趣.本文简述了FAK蛋白、信号通路及小分子抑制剂,系统综述了基于PROTAC技术靶向降解FAK蛋白的最新研究进展,最后总结并展望了基于PROTAC技术靶向FAK蛋白的发展前景.

目的 从已知化合物中挖掘出新型的对局部黏着斑激酶(FAK)具有较强作用的化合物,并结合体外的药理活性检测作为初筛方法,以期得到选择性更高、效果更好的FAK小分子抑制剂.方法 首先采用Auto-dock vina从SPECS数据库进行FAK小分子抑制剂的计算机虚拟筛选再通过RDKit操作环境进行类药五原则筛选后,采用Ward方法对化合物进行分层聚类,然后选出6类得分最高的化合物进行FAK抑制活性检测和进一步的实验验证.结果 计算机辅助药物虚拟筛选得到的6个代表化合物在MDA-MB-231-FAKwT细胞上均具有一定的FAK激酶抑制活性,其中以CY308的活性最优,IC50为6μmol/L.利用表面等离子共振(SPR)技术证实了活性化合物CY308与FAK有较强的结合,并采用分子对接对其结合位点进行了预测.

目的 探索骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对子宫内膜癌Ishikawa细胞转录水平的影响.方法 用Lenti-EGFP慢病毒感染Ishikawa细胞,分别将表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的Ishikawa细胞单独培养、与BMSCs接触共培养;通过流式细胞术分离Ishikawa细胞,并进行转录组测序分析筛选差异表达的mRNA和miRNA,通过miRWalk预测差异miRNA靶基因,对两者的交集基因进行GO、KEGG、蛋白网络互作分析;采用qRT-PCR和Western blot验证测序结果的准确性.结果 标记EGFP的Ishikawa细胞与BMSCs共培养后,分离出的Ishikawa-EGFP阳性细胞占33.6％,阴性细胞占10.5％.测序后共筛选出5 928个差异表达mRNA和111个差异表达miRNA.蛋白网络互作分析显示交集基因表达的蛋白之间相互作用,核心节点包括CDKN1A、JAK1、COL1A1、VCAN等.miRNA-mRNA网络图显示CDKN1A与hsa-let-7e-5p存在潜在靶向关系.GO分析和KEGG分析结果显示,其交集基因参与细胞外基质结构、细胞黏附分子结合等,并主要富集在PI3K-Akt、黏着斑、MAPK、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路.qRT-PCR和Western blot结果显示,共培养后Ishikawa-EGFP细胞中CDKN1A表达上调,hsa-let-7e-5p表达下调.结论 BMSCs可能通过细胞间的相互作用调节肿瘤局部微环境并促进子宫内膜癌的发生发展.

目的 探讨乌司他丁(UTI)对脑出血(ICH)大鼠局部黏着斑激酶(FAK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路及神经元凋亡的影响.方法 建立ICH大鼠模型,使用随机数字表法将造模成功的大鼠随机分为模型组(尾静脉注射0.9％氯化钠溶液)、抑制剂组(FAK抑制剂PF562271,50 mg/kg灌胃)、UTI组(尾静脉注射10万U/kg UTI)、UTI+抑制剂组(FAK抑制剂PF562271,50 mg/kg灌胃同时尾静脉注射10万U/kg UTI),每组20只,另设20只为假手术组(尾静脉注射0.9％氯化钠溶液)作为对照,所有处理均每天1次,连续7 d.干湿比重法测定各组大鼠脑组织含水率;酶联免疫吸附(ELISA)法各组大鼠血清中炎性因子含量;原位末端标记(TUNEL)法检测各组大鼠海马组织神经元凋亡;免疫组织化学分析法检测大鼠海马组织抗凋亡因子B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和促凋亡因子Bcl相关X(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)表达;尼氏染色法检测各组大鼠海马组织中神经元存活情况;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测大鼠海马组织中FAK蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠脑组织含水率(84.51±7.42)％、炎性因子含量、神经元凋亡指数(44.51±3.77)％以及促凋亡因子Bax(3.05±0.41)、caspase-3(3.27±0.46)表达和ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子Bcl-2(1.23±0.21)表达以及FAK(0.29±0.07)蛋白表达水平降低(P<0.05).与模型组相比,UTI组大鼠脑组织含水率(71.43±6.11)％、炎性因子含量、神经元凋亡指数(15.34±0.76)％以及促凋亡因子Bax(2.03±0.15)、caspcase-3(2.27±0.61)表达和ERK1/2磷酸化水平降低,神经元存活数目、抑凋亡因子Bcl-2(2.67±0.27)表达以及FAK(0.58±0.09)蛋白表达升高(P<0.05);抑制剂组大鼠脑组织含水率(92.83±7.56)％、炎性因子含量、神经元凋亡指数(51.99±5.65)％以及促凋亡因子Bax(3.73±0.37)、caspcase-3(3.99±0.26)表达和ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子Bcl-2(0.73±0.06)表达以及FAK(0.12±0.02)蛋白表达水平降低(P<0.05).与UTI组相比,UTI+抑制剂组大鼠脑组织含水率(84.16±6.76)％、炎性因子含量、神经元凋亡指数(43.22±4.07)％以及促凋亡因子Bax(2.98±0.35)、caspcase-3(3.26±0.31)表达和ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子Bcl-2(1.27±0.12)表达以及FAK(0.28±0.03)蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 UTI可通过促进FAK蛋白表达,抑制ERK磷酸化,进而抑制ICH大鼠神经元凋亡.

目的:观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞(PMN-MDSCs)迁移侵袭的影响.方法:制备含生药量0.63 g·mL-1的半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型,采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法筛选半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的最佳干预浓度及时间,用于后续实验,分为空白组、模型组、FAK抑制剂组及半夏泻心汤组(26％、18％、10％半夏泻心汤含药肠吸收液),采用细胞划痕实验和Transwell实验检测PMN-MDSCs的迁移和侵袭能力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤微环境中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)细胞因子表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PMN-MDSCs通路相关蛋白局部黏着斑激酶(FAK)、磷酸化(p)-FAK、蛋白酪氨酸激酶(Src)、磷酸化(p)-Src蛋白表达水平.结果:与24 h比较,作用48h5％、50％、75％、100％半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高(P＜0.05,P＜0.01),与作用48h比较,培养72 h 50％半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h(P＜0.01),5％、100％半夏泻心汤含药肠吸收液略高于48 h(P＜0.05,P＜0.01),其余浓度抑制率差异无统计学意义,且48 h半数抑制浓度(IC50)为18.09％,说明18％半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间;与空白组比较,模型组PMN-MDSCs迁移距离显著增大(P＜0.01),迁移及侵袭数量显著增多(P＜0.01);与模型组比较,FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组PMN-MDSCs的迁移距离均显著减小(P＜0.01),迁移及侵袭数量显著减少(P＜0.01),以26％含药肠吸收液组最为显著(P＜0.01);与空白组比较,模型组PMN-MDSCs通路相关蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src表达显著升高(P＜0.01),VEGF、MMP-9细胞因子表达均显著上升(P＜0.01).与模型组比较,FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组(26％、18％、10％)PMN-MDSCs FAK、p-FAK、Src蛋白表达降低(P＜0.01),FAK抑制剂组、半夏泻心汤含药肠吸收液组(18％)p-Src蛋白表达显著降低(P＜0.01),VEGF、MMP-9细胞因子表达显著降低(P＜0.01).结论:半夏泻心汤含药肠吸收液通过下调胃癌微环境PMN-MDSCs FAK信号通路蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src的表达,抑制PMN-MDSCs迁移侵袭.