目的:观察异紫堇碱衍生物COM33对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响。方法:以0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L COM33分别处理正常肝细胞LO2和肝癌细胞Huh7 24 h后，采用细胞计数法(CCK-8)检测细胞吸光度( A)值，并在Graphpad prism软件中通过非线性回归分析获得半数抑制浓度(IC 50)。随后采用COM33处理Huh7细胞，以无COM33组设为对照组；细胞克隆实验用于评估COM33对Huh7细胞增殖的影响；10 μmol/L COM33处理Huh7细胞24 h后，在倒置显微镜下观察细胞形态变化，用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染试剂盒检测细胞凋亡情况，免疫印迹实验检测给药前后细胞中Gasdermin D(GSDMD)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9剪切体(cleaved Caspase-9)的表达水平。组间比较采用Student’s t检验。 结果:COM33剂量依赖性地抑制Huh7细胞增殖，且在Huh7细胞中的IC 50值明显低于LO2细胞[(11.99±0.53) μmol/L比(33.33±3.10) μmol/L， t＝11.810， P<0.01]；给药组细胞形成的克隆集落少于对照组[(681±13)个比(387±29)个， t＝15.950， P<0.01]；Huh7细胞经COM33处理后出现皱缩变圆、贴壁不良；给药组Annexin V阳性细胞比例高于对照组[(7.28±0.86)%比(1.37±0.09)%， t＝11.820， P<0.01]；两组细胞GSDMD蛋白表达并无差异，且未检测到GSDMD剪切体；bax蛋白相对表达量给药组高于对照组(1.02±0.04比0.50±0.06， t＝12.250， P<0.01)；cleaved Caspase-9蛋白相对表达量给药组高于对照组(0.39±0.11比0.07±0.03， t＝4.726， P<0.01；0.39±0.11比0.16±0.07， t＝2.942， P<0.05)；bcl-2蛋白相对表达量给药组低于对照组(0.54±0.06比0.82±0.12， t＝3.551， P<0.05)。 结论:COM33对LO2细胞毒性不明显，可有效抑制Huh7细胞增殖，并诱导其凋亡。

安瓿瓶是一种用于盛装药液的小型玻璃容器，容量一般为1～20 mL，常用于各类注射用药液、疫苗等的盛装。医用安瓿瓶涉及到临床工作的方方面面，但在操作过程中，常将打开后的安瓿瓶直接放置于操作台面上，存在许多的缺点和不足，如安瓿瓶容易被打翻、造成环境污染、剩余药品污染、安瓿瓶的尖锐突起易造成医务人员暴露损伤等。为此，江苏省苏北人民医院医务人员设计了一种用于安瓿瓶放置的归置盒并获得了国家实用新型专利，该新型安瓿瓶归置盒结构简单、使用方便，在使用过程中安全卫生，可对已打开的安瓿瓶进行隔挡，减少药液浪费及药物污染，对安瓿瓶形成有效的保护及避免医护人员受到伤害，值得在临床工作中推广使用。

目的:通过体外研究探索肠道菌群代谢产物丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖与凋亡的影响机制。方法:采用人源性肝细胞系HepG2、游离脂肪酸(FFA；油酸与棕榈酸浓度比为2∶1)建立体外脂肪变性肝细胞模型。设置正常对照组、模型组、丁酸钠不同浓度(1、2、5、10、20、50 mmol/L)干预组，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖的抑制作用；设置正常对照组、模型组和丁酸钠5 mmol/L干预(丁酸钠干预)组，采用流式细胞术检测各组凋亡细胞比例；设置正常对照组、模型组和丁酸钠1、2、5、10 mmol/L干预组、空白小干扰RNA(siRNA)干扰组、G蛋白偶联受体(GPR)43干扰组、GPR109a干扰组、 GPR43/ GPR109 a双敲组，采用蛋白质印迹法检测各组转染前后的磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白质水平变化。统计学方法采用单因素方差分析、SNK- q检验和logistic回归分析。 结果:CCK-8检测结果提示丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖的抑制作用有剂量、时间依赖性。流式细胞术检测结果显示，丁酸钠干预组的细胞凋亡比例高于模型组和正常对照组[(3.400±0.100)%比(1.800±0.400)%、(1.067±0.451)%]，差异均有统计学意义( t＝6.721、8.705， P均<0.01)；模型组凋亡细胞比例与正常对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。转染前，模型组的p-AKT、p-mTOR蛋白质水平均高于正常对照组(2.300±0.058比1.000±0.012、2.160±0.125比1.000±0.052)，差异均有统计学意义( t＝22.080、8.575， P均<0.05)；丁酸钠1、2、5、10 mmol/L干预组的p-AKT和p-mTOR蛋白质水平均低于模型组(1.530±0.085、1.407±0.096、1.032±0.035、1.036±0.099比2.300±0.058，1.483±0.073、1.297±0.048、1.067±0.035、0.970±0.072比2.160±0.125)，差异均有统计学意义( t＝7.491、7.997、19.790、11.020，4.683、6.445、8.424、8.245， P均<0.05)。转染后，GPR43干扰组、GPR109a干扰组和 GPR43/ GPR109 a双敲组的p-AKT、p-mTOR蛋白质水平均高于空白siRNA干扰组和丁酸钠5 mmol/L干预组(1.474±0.045、1.471±0.058、2.067±0.120比1.158±0.030和1.139±0.031，1.850±0.082、1.683±0.058、2.160±0.091比1.469±0.037和1.490±0.116)，差异均有统计学意义( tp-AKT＝5.807、4.816、7.322，6.109、5.080、7.463； tp-mTOR＝4.235、3.113、7.044，2.542、1.497、4.562； P均<0.05)。 结论:丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖和凋亡的影响与GPR43/GPR109a-p-AKT-mTOR信号通路有关。

目的:探索辅酶Q10（CoQ10）通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）信号通路，抑制发育高峰期大鼠在七氟醚重复暴露下引发的海马组织铁死亡和其对神经功能的影响。方法:出生后7 d（P7）的Sprague-Dawley大鼠141只，置于麻醉箱中吸入2%七氟醚4 h/d，一共3 d，作为七氟醚重复暴露的动物模型。采用随机数字表法将其中138只大鼠分为6组（每组23只）：空白对照组（A组，30%O 2和70%N 2混合气体4 h/d，共3 d）、重复麻醉组（B组，2%七氟醚4 h/d，共3 d）、空白对照+CoQ10模拟剂预处理组（C组，30%O 2和70%N 2混合气体4 h/d+CoQ10模拟剂预处理，共3 d）、重复麻醉+CoQ10模拟剂预处理组（D组，2%七氟醚4 h/d+CoQ10模拟剂预处理，共3 d）、空白对照+CoQ10抑制剂预处理组（E组，30%O 2和70%N 2混合气体4 h/d+CoQ10抑制剂预处理，共3 d）、重复麻醉+CoQ10抑制剂预处理组（F组，2%七氟醚4 h/d+CoQ10抑制剂预处理，共3 d）；剩余3只归为单次麻醉组（B-1组，2%七氟醚4 h，仅用作血气检测）。每组在实验完成后，首先取3只大鼠左心室取血进行血气分析验证实验动物模型的安全性；除B-1组外，每组取6只大鼠断头取脑，分离海马组织，应用试剂盒采用比色法进行亚铁离子（Fe 2+）和谷胱甘肽（GSH）的检测、酶联免疫吸附测定（ELISA）法进行4-羟基壬烯醛（4-HNE）的检测；每组另取6只大鼠，用免疫印迹法（Western blot）检测GPX4、NADPH蛋白水平。每组剩余8只大鼠长期饲养，在大鼠成长至第4周、第20周时进行Morris水迷宫实验，通过定位航行实验中到达平台的游泳距离和空间探索实验中穿越原平台所在位置次数、原平台所在象限的游泳时间、第一次穿越原平台位置所需的时间验证大鼠成长后的学习记忆能力。 结果:各组大鼠二氧化碳总量（TCO 2）、pH值、动脉血氧分压（PaO 2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO 2）、碳酸氢根（HCO -3）、脉搏血氧饱和度（SpO 2）均在正常范围内，差异无统计学意义（均 P>0.05）。与A组比较，B组海马组织Fe 2+、4-HNE含量较高（均 P<0.05），GSH含量较低（ P<0.05），GPX4、NADPH蛋白水平较低（均 P<0.05），大鼠穿越原平台所在位置次数较少（ P<0.05），原平台所在象限的游泳时间较短（ P<0.05），第1次穿越原平台位置所需的时间较长（ P<0.05）。与B组比较：D组海马组织Fe 2+、4-HNE含量较低（均 P<0.05），GSH含量较高（ P<0.05），GPX4、NADPH蛋白水平较高（均 P<0.05），大鼠穿越原平台所在位置次数较多（ P<0.05），原平台所在象限的游泳时间较长（ P<0.05），第1次穿越原平台位置所需的时间较短（ P<0.05）；F组海马组织Fe 2+、4-HNE含量较高（均 P<0.05），GSH含量较低（ P<0.05），GPX4、NADPH蛋白水平较低（均 P<0.05），大鼠穿越原平台所在位置次数较少（ P<0.05），原平台所在象限的游泳时间较短（ P<0.05），第1次穿越原平台位置所需的时间较长（ P<0.05）。 结论:P7大鼠重复暴露于七氟醚会出现铁死亡及成长后学习记忆能力的下降。CoQ10通过NADPH/GPX4通路可抑制七氟醚重复暴露所导致的铁死亡，具有神经保护作用。

目的 建立和验证1种可用于隐匿性HBV感染(OBI)检测的大体积高灵敏度核酸提取方法,并将其应用于低病毒载量OBI标本的定量检测.方法 参考罗氏核酸检测试剂盒核酸提取方法,建立1种大体积核酸提取方法.将HBV标准品分别配置成10 000 IU/mL、1 000 IU/mL、100 IU/mL、10 IU/mL和1 IU/mL浓度,采用磁珠法从10 mL相应浓度的标准品中提取核酸,采用荧光定量PCR法检测各浓度的CT值,每个浓度梯度进行平行双份检测,以病毒浓度的对数为X轴,2次检测CT值的平均值为Y轴,构建荧光定量标准曲线和回归方程.通过3次重复实验验证该方法的稳定性.应用本方法提取低病毒载量OBI标本核酸并进行荧光定量.结果 3次HBV病毒荧光定量标准曲线扩增效率(E)均在90％～105％,回归方程(R2)均＞0.99.不同浓度标准品CT值的变异系数(CV)分别为0.63％、0.78％、1.52％、1.36％和0.78％.本方法可以提取出病毒载量低至1 IU/mL的OBI标本核酸并进行定量.结论 本方法HBV核酸定量检测系统检测下限可达1 IU/mL,并且具有较强稳定性和灵敏度,可用于低病毒载量OBI的定量检测.

目的 探讨患者无菌部位侵袭性真菌感染(IFI)的菌种分布、药物敏感性、临床特征及预后不良危险因素.方法 收集2019年7月至2023年6月于承德医学院附属医院从血液、胸腔、腹腔等无菌部位培养物分离出的真菌菌株,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)等方法进行鉴定.酵母菌采用ATB Fungus 3酵母样真菌药敏试剂盒检测抗真菌药物敏感性.利用东华医院信息管理系统收集患者的临床和实验室资料,并进行统计分析.结果 175株真菌菌株主要由酵母菌(169/175,96.57％)和丝状真菌(6/175,3.43％)构成,白念珠菌是IFI最常见致病菌(91/175,52.00％).单因素分析显示,入住ICU、中心静脉置管、机械通气、连续性肾脏替代治疗(CRRT)、感染性休克及感染热带念珠菌是患者预后的影响因素(P<0.05).多因素Logistic回归分析发现机械通气与感染热带念珠菌是患者预后不良的独立危险因素.降钙素原(PCT)是IFI患者预后不良的可靠预测指标.药敏结果显示多数光滑念珠菌和热带念珠菌的耐药株出现唑类交叉耐药的现象.结论 临床需重视非白念珠菌,尤其是重视光滑念珠菌和热带念珠菌对唑类药物的耐药率及交叉耐药.

目的 探究加味柴胡当归汤对肝星状细胞纤维化的抑制作用及其通过调控磷脂酰肌醇 3 激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/B细胞淋巴瘤(Bcl)-2信号通路抗肝纤维化的机制.方法 培养永生化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6),设置正常对照组(不作干预)、模型组[血小板衍生生长因子(PDGF)-BB干预],中药组(PDGF-BB+含药血清干预),激动剂+中药组(PDGF-BB+HY-101625+含药血清干预),抑制剂+中药组(PDGF-BB+LY294002+含药血清干预),采取不同干预方式进行实验.使用CCK-8试剂盒和细胞凋亡试剂盒检测细胞增殖活性和凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP组织抑制剂(TIMP)-1 表达水平;进行Western印迹实验分析细胞中 Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达;利用qRT-聚合酶链反应(PCR)法测定细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT mRNA表达.结果 与正常对照组相比,模型组细胞增殖活性、α-SMA、COL-Ⅰ、TIMP-1、Bcl-2 表达及 PI3K、AKT、mTOR 磷酸化水平显著升高,凋亡率、MMP-2、MMP-9、Bax、Caspase-3和Caspase-9表达显著降低(P<0.05).与模型组相比,中药组、激动剂+中药组、抑制剂+中药组细胞增殖活性、Bcl-2、α-SMA、COL-Ⅰ、TIMP-1表达及PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平明显降低,凋亡率、MMP-2、MMP-9、Bax、Caspase-3和Caspase-9表达水平明显升高(P<0.05).结论 加味柴胡当归汤可通过调控PI3K/AKT/Bcl-2 信号通路,抑制肝星状细胞活化,逆转肝纤维化进程.

目的 建立利用毛细管电泳法测定重组人源化免疫球蛋白G (immunoglobulin G,IgG)纯度的方法,并进行优化和验证.方法 采用单因素法,对稀释液、碘乙酰胺浓度(非还原条件)、加热方式、进样电压、进样时间、分离电压、样品盘和卡盒温度进行多水平优化,并利用优化的方法测定IgG2的纯度.以峰面积对样品加样量进行线性回归,确定该方法的线性范围,并对该方法进行精密度、准确度及溶液稳定性验证.结果 最佳电泳条件为:选用超纯水作为稀释液,250 mmol/L碘乙酰胺(非还原条件),70℃干热10 min,进样电压为5 kV,进样时间为30 s,分离电压为15 kV,样品盘和卡盒温度为20℃.在优化的色谱条件下,在还原条件下,IgG2纯度检测的线性范围为50～ 150 μg,相关系数为0.998,重复性的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.14％,中间精密度的RSD为0.24％,且20 ℃放置13h稳定;在非还原条件下,IgG2纯度检测的线性范围为50～150 μg,相关系数为0.999,重复性的RSD为0.36％,中间精密度的RSD为0.16％,且20℃放置13h稳定.结论 该方法线性关系良好,且精密度、准确度、灵敏度较高,测定结果稳定可靠,适用于重组人源化IgG2的纯度分析.

目的 初步探讨外周血活性循环肿瘤细胞(CTC)与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床特征的相关性及其临床意义.方法 选取2017年6月至2018年8月于首都医科大学附属北京安贞医院呼吸与危重症医学科住院且经影像及病理学检查确诊的NSCLC患者51例(观察组),其中腺癌38例,鳞癌13例;并收集同期该科室住院的21例良性肺疾病患者(良性肺疾病组)及该院健康体检者18名(健康对照组).应用含重组病毒的CTC体外检测试剂盒检测各组外周血中活性CTC数量,并分析比较活性CTC表达情况与NSCLC患者临床、病理学特征的关系.结果 观察组44例CTC阳性,良性肺疾病组4例CTC阳性,健康组未检出;该检测方法的敏感度为86.3％ (44/51),特异度为89.7％ (35/39).每6 ml外周血中检测出活性CTC的数量在不同的临床分期(Ⅰ～Ⅱ期比Ⅲ～Ⅳ期)及有无远处转移(M0比M1)组间比较差异有统计学意义[1(0,6)个比3(0,54)个、1(0,2)个比3(1,8)个](Z=-2.041、-2.623,P=0.041、0.009).使用Logistic回归模型分析得出,外周血活性CTC数量的增加与NSCLC患者发生远处转移的风险独立相关(比值比=1.356,95％置信区间1.015 ～1.811,P=0.040);当外周血CTC数量大于3个/6ml时,NSCLC患者发生远处转移的风险增加了近5倍(比值比=5.356,95％置信区间1.341～21.400,P=0.018).结论 外周血活性CTC检测作为一种简便、无创的检测手段,特异度和敏感度均较高,可能提早预测NSCLC患者的远处转移.

目的 评估血清中期因子(MK)水平对甲状腺乳头状癌(PTC)术后患者131I治疗过程中新发转移的预测价值.方法 接受甲状腺全切/次全切术和(或)颈部淋巴结清扫术的PTC患者241例,术后实施个体化131I治疗.在首次131I治疗前(T1)、首次131I治疗后10 ～ 12个月时(T2),采用MK检测试剂盒检测所有患者的血清MK,分别记为MK1、MK2.根据血清MK2水平将患者分成A、B、C组,血清MK2水平≤正常值上限(508.57 pg/mL)者为A组,血清MK2水平＞正常值上限且≤MK1者为B组,血清MK2水平＞MK1＞正常值上限者为C组.根据分组结果,比较各组患者T2时新发转移情况.以A组为对照组,采用Cox回归分析法计算B、C组患者新发转移的风险比(HR)和95％置信区间(CI).结果 241例PTC患者中,55例患者在T2时出现新发转移灶,其中A组11例、B组28例、C组16例,C组患者T2时出现新发转移灶者与A、B组相比,P均＜0.01.Cox回归分析显示,B组患者新发转移的HR为3.374(P＜0.05,95％ CI为1.328～5.047),C组患者新发转移的HR为6.731 (P ＜0.05,95％ CI为3.121～14.800).结论 血清MK水平对PTC术后患者131 I治疗过程中新发转移有一定的预测价值.