目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的:探讨微小RNA（miR）-216a-5p在妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘中的表达及其对滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响及可能机制。方法:收集2018年10月至2019年10月烟台市烟台山医院的28例GDM孕妇（GDM组）和28例正常孕妇（对照组）胎盘组织，将体外培养HTR-8/SVneo细胞分为空白组（正常培养）、模拟物（mimics）-NC组（转染mimics-NC）和miR-216a-5p mimics组（转染miR-216a-5p mimics），采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织和各组HTR-8/SVneo细胞中miR-216a-5p表达水平，Transwell实验检测各组HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移，免疫印迹法（Western blot）检测各组HTR-8/SVneo细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指E盒结合蛋白-1（ZEB1）和N-钙黏附分子（N-cadherin）蛋白表达，双荧光素酶报告基因实验检测miR-216a-5p和ZEB1的靶向关系。结果:与对照组比较，miR-216a-5p在GDM组胎盘组织中表达明显升高（2.86±0.35 vs 0.96±0.07, P<0.05）；与mimics-NC组比较，miR-216a-5p mimics组细胞中miR-216a-5p和E-cadherin蛋白表达水平明显升高[（1.01±0.08）vs（22.48±3.26），（0.25±0.03）vs（0.68±0.05）]，而细胞侵袭、迁移能力和细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达水平明显降低[（106.83±9.35）vs（59.16±5.28），（205.48±18.25）vs（87.32±6.50），（0.65±0.05）vs（0.35±0.02），（0.55±0.04）vs（0.32±0.03），（0.50±0.03）vs（0.36±0.02）]（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-216a-5p可与ZEB1靶向结合。 结论:miR-216a-5p在GDM患者胎盘组织中表达上调，可能通过靶向调控ZEB1表达抑制滋养层HTR-8/SVneo细胞转移。

目的:探讨微小RNA（miR）-216a及其靶基因SerpinB5在组织水平的表达差异，及miR-216a通过调控SerpinB5表达对不同肝癌细胞增殖的影响。方法:通过生物信息学预测并选定调控SerpinB5的miR-216a，实时聚合酶链反应验证两者在肝癌与正常组织中的表达情况；利用脂质体分别转染miR-216a模拟物和抑制剂、si-SerpinB5和pcDNA3.1-SerpinB5至HepG2和MHCC97H（简称97H）细胞中，实时聚合酶链反应和Wester-Blot检测转染前后的miR-216a和SerpinB5的表达情况，CCK8检测两者对肝癌细胞增殖的影响。结果:miR-216a在人肝癌组织的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.01）；SerpinB5在人肝癌组织的表达低于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.01）。在HepG2与97H中，miR-216a抑制剂与过表达SerpinB5组miR-216a表达下调，与相应对照组相比差异有统计学意义（ P<0.01）。miR-216a抑制剂与pcDNA3.1-SerpinB5组细胞增殖均低于相应对照组，差异均有统计学意义（ P<0.01）。 结论:SerpinB5高表达能抑制肝癌细胞的增殖提示其可能具有抑癌基因作用；miR-216a可能通过负调控SerpinB5表达影响肝癌细胞增殖。

目的:探讨微小RNA(miR)-216a、miR-324-5p、miR-29a在急性胰腺炎（AP）患者外周血中表达的意义及与胰腺炎并发肝损伤的相关性。方法:采用病例对照研究设计，选取2017年6月至2019年5月商丘市第一人民医院收治的130例AP患者，分为轻症AP组（MAP组）和中重症AP组（SAP组），肝损伤组54例（MAP 20例、SAP 34例）与非肝损伤组76例（均为MAP）；另选取40名健康志愿者为健康组。比较MAP组、SAP组、健康组以及肝损伤组与非肝损伤组外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a表达水平，并分析其与临床指标相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血各miRNA水平对AP并发肝损伤的预测价值。结果:MAP组、SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于健康组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）；SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于MAP组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）。Balthazar CT评分、急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ）评分、C反应蛋白水平、住院时间与外周血miR-216a、miR-29a水平均呈正相关（均 P<0.05），与miR-324-5p水平呈负相关（均 P<0.05）。肝损伤组外周血miR-216a、miR-29a水平高于非肝损伤组，且在肝损伤组中SAP患者高于MAP患者（均 P<0.05）；肝损伤组外周血miR-324-5p水平低于非肝损伤组，且肝损伤组中SAP患者低于MAP患者（均 P<0.05）。外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a预测AP并发肝损伤的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.694、0.750、0.814。 结论:miR-216a、miR-29a水平在AP患者外周血中表达增高，miR-324-5p水平降低，与Balthazar CT评分、APACHEⅡ评分、C反应蛋白水平、住院时间关系密切，且对AP并发肝损伤有一定预测价值，其中miR-29a预测价值最高。

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系.方法 纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组.分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血 4～6 mL.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测 3 组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标.分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值.结果 (1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000).NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000).3 组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000).NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000).DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000).(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000).2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2 水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000).且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027).Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000).且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045).(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000).(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000).(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素.结论 T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值.

目的 研究川崎病(KD)患儿外周血长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5、微小RNA(miR)-132的差异表达及临床意义.方法 选择2016年1月至2020年12月在苏州市中西医结合医院儿科确诊的62例KD患儿作为KD组,另选取同期进行健康体检的80例健康儿童作为对照组.采用荧光定量聚合酶链式反应检测两组受试者外周血LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、LncRNA SNHG5、miR-132、miR-92的表达水平,采用超声心动图评估KD患儿的冠状动脉病变(CAL)情况并分为CAL组和无CAL(NCAL)组;采用Pearson检验分析LncRNA SNHG5与miR-132的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ln-cRNA SNHG5及miR-132对KD及KD合并CAL的诊断价值.结果 KD组外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于对照组,miR-132的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、miR-92表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);KD组外周血中LncRNA SNHG5与miR-132的表达水平呈负相关(r=-0.527,P<0.001);KD组中CAL组患儿外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于NCAL组,miR-132的表达水平低于NCAL组,差异有统计学意义(P<0.05).经ROC曲线分析,LncRNA SNHG5及miR-132的表达水平对KD(截断值分别为1.205、0.871,灵敏度分别为86.25%、75.00%,特异度分别为88.71%、85.48%)及KD合并CAL(截断值分别为1.138、0.643,灵敏度分别为63.46%、67.31%,特异度分别为80.00%、80.00%)均具有诊断价值.结论 KD患儿外周血中LncRNA SNHG5表达增加、miR-132表达降低,两者可作为诊断KD及KD合并CAL的标志物.

目的 探讨微小RNA-1180( miR-1180)对肝癌细胞侵袭迁移和转化生长因子β( TGF-β)信号通路的影响.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肝上皮细胞LO2和肝癌细胞( MHCC97-H、Huh7、SMMC-7721)的miR-1180水平;常规培养SMMC-7721细胞并采用脂质体介导转染miR-1180抑制物(Inhibitor组)或阴性对照(NC组)并以不行任何处理的细胞为对照组;分别采用MTT比色法、划痕实验和Transwell实验检测miR-1180水平、划痕愈合率和穿膜细胞数,通过生物信息学和双荧光素酶报告基因系统验证miR-1180与分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)的靶向调控关系;QPCR和Western blotting检测SFRP1、TGF-β1、基质金属蛋白酶( MMP)-3和MMP-9水平.结果 与LO2细胞相比,肝癌细胞的miR-1180水平均升高(P＜0. 05).与对照组和NC组相比,Inhibitor组的miR-1180水平及转染48、72 h的增殖活力均降低(P＜0. 05). Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(19. 264± 4. 619)%和(133. 863± 16. 216)个,低于NC组的(67. 579± 7. 734)%和( 316. 906± 25. 753)个及对照组的( 65. 237 ± 5. 621)%和( 326. 815± 28. 946)个,差异有统计学意义( P＜0. 05). Inhibitor 组的 TGF-β1、MMP-3和MMP-9水平均低于对照组和NC组(P＜0. 05),而SFRP1水平高于对照组和NC组(P＜0. 05),而SFRP1水平高于对照组和NC组.对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P＞0. 05). MiR-1180模拟物可降低携带野生型SFRP1 3’端非翻译区载体转染细胞的相对荧光强度(P＜0. 05).结论 肝癌细胞中miR-1180高表达,该miRNA可能通过靶向SFRP1来激活TGF-β信号通路,在促进肝癌迁移和侵袭过程中发挥作用,可作为肝癌的一个新且有前景的治疗靶点.

目的:探讨微小RNA-216a-5p (miR-216a-5p)靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白(WASL)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制.方法:收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物(miR-216a-5p)、模拟物阴性对照(miR-con)、沉默对照(si-con)、沉默WASL的小干扰RNA (si-WASL)、抑制物阴性对照(anti-miR-con)、miR-216a-5p抑制物(anti-miR-216a-5p)、miR-216a-5p及空载质粒(pcDNA)和miR-216a-5p及WASL过表达质粒(pcDNA-WASL)分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组.采用逆转录实时荧光定量PCR (Real-time RT-qPCR)和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平.采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数.采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因.结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低(P＜0.05),WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),两者呈负相关关系(r=-0.317,P＜0.01).与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平(P＜0.01)和细胞增殖活性均明显降低(P＜0.05),迁移和侵袭细胞数明显降低(P＜0.05).双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因.与miR-216a-5p+ pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点.

大量证据表明microRNA(miRNA)通过靶向调控靶基因的表达从而在肿瘤侵袭与转移中发挥重要作用.然而关于microRNA-216b-5p(miR-216b-5p)通过靶向嗜乳脂蛋白第3亚家族膜蛋白A2(butyrophilin subfamily 3 member A2,BTN3A2)促进胶质瘤侵袭与转移的机制尚不明确.本研究通过GSE15824与GSE4290差异表达分析筛选出同时在2个芯片中表达上调的BTN3A2(P＜0.05).生存曲线结果显示,高表达BTN3A2病人总生存期明显下降(P＜0.001).表达量分析结果显示,BTN3A2表达随WHO分级升高而升高(P＜0.05),同时1p/19q未联合缺失与IDH突变型病人BTN3A2表达升高(P＜0.001).基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)结果显示,BTN3A2与众多癌症相关通路有关(P＜0.05);Western印迹结果显示,BTN3A2在7例胶质瘤组织和胶质瘤细胞系U87、U251和LN-229中表达上调,过表达miR-216b-5p(miR-216b-5p mimics)后BTN3A2蛋白表达水平降低;Transwell结果显示,转染BTN3A2干扰质粒(si-BTN3A2)和miR-216b-5p mimics后可以抑制LN-229细胞体外迁移与侵袭能力(P＜0.05);在线预测网站证实,miR-216b-5p为BTN3A2潜在靶基因;生存曲线结果显示,与低表达miR-216b-5p病人相比,高表达病人生存率明显上调(P = 0.025);荧光定量RT-PCR结果显示,miR-216b-5p在胶质瘤U87、U251和LN-229细胞中表达下降(P＜0.05);双荧光素酶结果显示,BTN3A2存在与miR-216b-5p的结合靶点(P＜0.05);综上所述,BTN3A2可能通过结合miR-216b-5p促进胶质瘤细胞LN-229的迁移以及侵袭.

目曲 探讨微小RNA-216a(miR-216a)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡及自噬的影响.方法 体外利用1、5、10、25及50 mg/L ox-LDL诱导HUVEC,采用实时荧光定量PCR检测miR-216a表达.在50 mg/L ox-LDL诱导的HUVEC中转染miR-216a拮抗剂(实验组)和拮抗剂阴性对照(对照组),并设计不给予任何处理的空白组.采用噻唑蓝比色法、Hoechst 33342染色及蛋白质印迹法检测细胞增殖、凋亡及自噬能力.结果 随ox-LDL浓度增加,ox-LDL诱导的miR-216a表达呈剂量与时间依耐性上调(P＜0.05).实验组HUVEC中miR-216a表达较空白组和对照组明显降低(0.32±0.07 vs 1.00±0.16、1.04±0.21,P＜0.05).实验组HUVEC转染1、2及3d吸光度值较空白组和对照组明显升高(P＜0.05).实验组HUVEC单个视野中凋亡细胞数较空白组和对照组明显减少(P＜0.05).实验组HUVEC中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达较空白组和对照组明显降低,Bcl-2、微管相关蛋白1轻链3B和自噬相关基因5表达较空白组和对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-216a在体外ox-LDL诱导的HUVEC中表达上调,干扰miR-216a促进HUVEC增殖和自噬,并抑制凋亡,提示miR-216a可能是ox-LDL相关血管内皮细胞损伤的潜在治疗靶点.