目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的:探讨微小RNA（miR）-216a-5p在妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘中的表达及其对滋养层HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响及可能机制。方法:收集2018年10月至2019年10月烟台市烟台山医院的28例GDM孕妇（GDM组）和28例正常孕妇（对照组）胎盘组织，将体外培养HTR-8/SVneo细胞分为空白组（正常培养）、模拟物（mimics）-NC组（转染mimics-NC）和miR-216a-5p mimics组（转染miR-216a-5p mimics），采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织和各组HTR-8/SVneo细胞中miR-216a-5p表达水平，Transwell实验检测各组HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移，免疫印迹法（Western blot）检测各组HTR-8/SVneo细胞中E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指E盒结合蛋白-1（ZEB1）和N-钙黏附分子（N-cadherin）蛋白表达，双荧光素酶报告基因实验检测miR-216a-5p和ZEB1的靶向关系。结果:与对照组比较，miR-216a-5p在GDM组胎盘组织中表达明显升高（2.86±0.35 vs 0.96±0.07, P<0.05）；与mimics-NC组比较，miR-216a-5p mimics组细胞中miR-216a-5p和E-cadherin蛋白表达水平明显升高[（1.01±0.08）vs（22.48±3.26），（0.25±0.03）vs（0.68±0.05）]，而细胞侵袭、迁移能力和细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达水平明显降低[（106.83±9.35）vs（59.16±5.28），（205.48±18.25）vs（87.32±6.50），（0.65±0.05）vs（0.35±0.02），（0.55±0.04）vs（0.32±0.03），（0.50±0.03）vs（0.36±0.02）]（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-216a-5p可与ZEB1靶向结合。 结论:miR-216a-5p在GDM患者胎盘组织中表达上调，可能通过靶向调控ZEB1表达抑制滋养层HTR-8/SVneo细胞转移。

目的:评估缺氧缺血(HI)自我复苏的新生SD大鼠模型外周血微小RNA(miRNA)指标。方法:3只孕鼠所产幼鼠按窝别分为3组，A组为空白对照组，B组为HI组，C组备用。采用高通量深度测序方法比较对照组和HI组新生4日龄SD大鼠外周血中miRNA的表达谱。应用生物信息学分析研究这些差异表达的miRNA。采用基因本体论(GO)和京都基因与基因组学百科全书(KEGG)分析方法预测相关的细胞信号通路和功能。通过miRBD预测miRNA及与缺氧缺血性脑病(HIBD)相关的靶基因。应用HE染色观察脑组织病理变化。结果:经外周血深度测序后可得到成熟miRNA序列为1 049种。A组miRNA种类为525种；HI组miRNA种类为524种；其中A组有27种miRNA与HI组存在差异，且2组间miRNA种类呈高度相关。HI新生大鼠外周血中有38个miRNA表达异常，并存在显著差异表达(2 -ΔΔCt值>2.5， P< 0.05),其中21个miRNA显著过表达，17个显著低表达。KEGG通路富集分析和GO分析显示这些差异的miRNA与谷氨酸能突触通路、髓鞘脂类代谢、神经活性配体-受体相互作用和血管上皮生长因子(VEGF)信号通路与缺氧/缺血诱导的脑损伤有关，并且过度活化。2组间幼鼠脑组织未见皮质及胼胝体下白质病变、脑室扩大、灰质神经元排列紊乱和明显凋亡。 结论:HI自然复苏模型大鼠外周血中miRNA差异表达提示，miRNA对缺氧缺血有积极的应答。存在高度显著差异的miR-200家族、miR-471家族、miR-429、miR-216和miR-871，与神经系统损伤分子生物学机制有关，有望成为HIBD或HI新的生物学诊断指标，对HI新的治疗靶点的研究探索是有益的。

目的:探讨微小RNA（miR）-216a及其靶基因SerpinB5在组织水平的表达差异，及miR-216a通过调控SerpinB5表达对不同肝癌细胞增殖的影响。方法:通过生物信息学预测并选定调控SerpinB5的miR-216a，实时聚合酶链反应验证两者在肝癌与正常组织中的表达情况；利用脂质体分别转染miR-216a模拟物和抑制剂、si-SerpinB5和pcDNA3.1-SerpinB5至HepG2和MHCC97H（简称97H）细胞中，实时聚合酶链反应和Wester-Blot检测转染前后的miR-216a和SerpinB5的表达情况，CCK8检测两者对肝癌细胞增殖的影响。结果:miR-216a在人肝癌组织的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.01）；SerpinB5在人肝癌组织的表达低于癌旁组织，差异有统计学意义（ P<0.01）。在HepG2与97H中，miR-216a抑制剂与过表达SerpinB5组miR-216a表达下调，与相应对照组相比差异有统计学意义（ P<0.01）。miR-216a抑制剂与pcDNA3.1-SerpinB5组细胞增殖均低于相应对照组，差异均有统计学意义（ P<0.01）。 结论:SerpinB5高表达能抑制肝癌细胞的增殖提示其可能具有抑癌基因作用；miR-216a可能通过负调控SerpinB5表达影响肝癌细胞增殖。

目的:探讨替吉奥联合奥沙利铂对晚期胃癌患者生存周期及血清甲胎蛋白（AFP）、糖类抗原242（CA242）的作用。方法:选取2016年10月至2019年10月合肥市第三人民医院收治的100例晚期胃癌患者，按随机数字表法分为两组，各50例。对照组采用亚叶酸钙+氟尿嘧啶+奥沙利铂治疗，观察组采用替吉奥联合奥沙利铂治疗。比较两组缓解率、疾病控制率、中位无进展生存期（PFS）、中位总生存期（OS）、不良反应发生情况；比较两组治疗前后血清肿瘤标志物AFP、CA242、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）、糖类抗原19-9（CA19-9）水平；比较两组治疗前后促肿瘤生长指标血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）水平；比较两组治疗前后微小RNA（miR）216a、miR95、miR4286水平。结果:观察组缓解率为42.0%（21/50），高于对照组的22.0%（11/50），差异有统计学意义（ P<0.05）。观察组治疗后AFP、CA242、CEA、CA125、CA19-9均低于对照组[（15.04 ± 3.65）μg/L比（20.65 ± 4.17）μg/L、（20.88 ± 6.37）kU/L比（35.46 ± 7.33）kU/L、（8.65 ± 2.13）μg/L比（15.39 ± 3.25）μg/L、（26.15 ± 8.49）kU/L比（34.16 ± 7.50）kU/L、（22.29 ± 5.80）kU/L比（38.81 ± 6.79）kU/L]，差异均有统计学意义（ P<0.05）。观察组治疗后VEGF、MMP-2、MMP-9、IGF-1、PECAM-1低于对照组；观察组治疗后miR216a高于对照组，miR95、miR4286低于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组中位PFS为3.0个月，中位OS为6.6个月，观察组中位PFS为3.3个月，中位OS为7.0个月，差异均无统计学意义（ P>0.05）。观察组骨髓抑制、皮肤损害发生率低于对照组[6.0%（3/50）比24.0%（12/50）、4.0%（2/50）比18.0% （9/50）]，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期胃癌，能提高抗癌效果，促进病情缓解，安全性高，其机制可能与抑制促肿瘤生长指标、调控miR有关。

目的:探讨微小RNA(miR)-216a、miR-324-5p、miR-29a在急性胰腺炎（AP）患者外周血中表达的意义及与胰腺炎并发肝损伤的相关性。方法:采用病例对照研究设计，选取2017年6月至2019年5月商丘市第一人民医院收治的130例AP患者，分为轻症AP组（MAP组）和中重症AP组（SAP组），肝损伤组54例（MAP 20例、SAP 34例）与非肝损伤组76例（均为MAP）；另选取40名健康志愿者为健康组。比较MAP组、SAP组、健康组以及肝损伤组与非肝损伤组外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a表达水平，并分析其与临床指标相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血各miRNA水平对AP并发肝损伤的预测价值。结果:MAP组、SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于健康组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）；SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于MAP组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）。Balthazar CT评分、急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ）评分、C反应蛋白水平、住院时间与外周血miR-216a、miR-29a水平均呈正相关（均 P<0.05），与miR-324-5p水平呈负相关（均 P<0.05）。肝损伤组外周血miR-216a、miR-29a水平高于非肝损伤组，且在肝损伤组中SAP患者高于MAP患者（均 P<0.05）；肝损伤组外周血miR-324-5p水平低于非肝损伤组，且肝损伤组中SAP患者低于MAP患者（均 P<0.05）。外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a预测AP并发肝损伤的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.694、0.750、0.814。 结论:miR-216a、miR-29a水平在AP患者外周血中表达增高，miR-324-5p水平降低，与Balthazar CT评分、APACHEⅡ评分、C反应蛋白水平、住院时间关系密切，且对AP并发肝损伤有一定预测价值，其中miR-29a预测价值最高。

目的:探讨微小RNA-216a(miR-216a)在AP并发肺损伤患者中的表达水平及其对内皮细胞通透性的影响。方法:收集2015年12月至2016年3月间海军军医大学第一附属医院消化内科收治的40例AP患者，根据患者是否并发急性肺损伤(ALI)，分为AP伴ALI组(AP-ALI组，13例)和AP不伴ALI组(AP组，27例)。以8名健康志愿者为对照组。抽血分离血浆并抽提RNA，采用RT-PCR法检测3组血浆miR-216a水平。使用外泌体抽提试剂盒提取血浆中的外泌体，并通过电镜观察进行外泌体鉴定。抽提外泌体RNA，检测外泌体中miR-216a的水平。将AP-ALI组患者血浆外泌体分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC，AP-ALI-HUVEC组)、转染anti-miR-216a的HUVEC(AP-ALI-anti-miR-216a HUVEC组)共培养24 h，以未做任何处理的HUVEC作为对照组，用Millicell ERS-2上皮伏特欧姆计测量3组跨内皮细胞电阻，以表示其通透性。结果:AP-ALI组血浆miR-216a水平为14.45±1.64，显著高于AP组的11.08±1.60和对照组的5.37±1.54，差异有统计学意义( P值均<0.01)。电镜下可见血浆外泌体呈杯状膜泡样，大小50～90 nm。AP-ALI组血浆外泌体miR-216a水平为14.03±1.58，显著高于AP组的10.86±1.31和对照组的5.01±0.79，差异有统计学意义( P值均<0.01)。以对照组HUVEC细胞的电阻值为1，AP-ALI-HUVEC组跨内皮细胞的电阻比值显著低于AP-ALI-anti-miR-216a HUVEC组(0.74±0.04比1.02±0.08)，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-216a水平在AP并发ALI患者血浆外泌体中显著增加。miR-216a可增加HUVEC细胞的通透性，可能与AP时肺损伤的发生相关。

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系.方法 纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组.分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血 4～6 mL.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测 3 组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标.分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值.结果 (1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000).NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000).3 组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000).NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000).DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000).(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000).2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2 水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000).且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027).Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000).且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045).(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000).(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000).(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素.结论 T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值.

目的 探讨胃癌患者血清miR-216b和miR-132水平表达与临床预后的关系.方法 选取2018年1月～2020年2月在佳木斯市中心医院就诊的87例胃癌患者作为胃癌组,选择同期87例健康体检者作为对照组.实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清中 miR-216b 和 miR-132 表达水平,分析胃癌患者血清 miR-216b和miR-132表达水平与临床病理特征的关系.根据胃癌患者随访期间的生存或死亡情况,将胃癌患者分为预后良好组(生存,n=51)和预后不良组(死亡,n=36),用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-216b和miR-132表达水平对胃癌患者预后的预测价值;COX回归分析影响胃癌患者预后的因素.结果 与对照组比较,胃癌组血清中 miR-216b(0.69±0.20 vs 1.02±0.24)和 miR-132(0.73±0.19 vs 1.01±0.22)表达水平降低,差异具有统计学意义(t=9.853,8.984,均P＜0.001).分化程度为低分化、TNM分期为Ⅲ±Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移的胃癌患者血清miR-216b,miR-132表达水平低于分化程度为中、高分化、TNM分期为Ⅰ±Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移的胃癌患者,差异具有统计学意义(t=6.266,3.412,2.890,2.723;4.999,3.734,4.180,5.502,均P＜0.05).与预后良好组比较,预后不良组胃癌患者血清中miR-216b(0.56±0.16 vs 0.78±0.23)和miR-132(0.60±0.11 vs 0.82±0.25)表达水平降低,差异具有统计学意义(t=4.952,4.946,均 P＜0.001).血清 miR-216b,miR-132及二者联合预测胃癌患者预后的曲线下面积(area under the cure,AUC)分别为0.797(95％CI:0.706～0.889),0.832(95％CI:0.745～0.918)和 0.900(95％CI:0.836～0.964);敏感度和特异度分别为 83.3％,68.6％;97.2％,62.7％和79.4％,72.5％;当血清miR-216b,miR-132预测胃癌患者预后不良的截断值分别为0.66,0.76时,预测的敏感度较高.COX回归分析显示,miR-216b低表达、miR-132低表达、分化程度为低分化、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移是胃癌患者预后不良的危险因素(均P＜0.05).结论 miR-216b和miR-132在胃癌患者血清中呈低表达,二者可作为预测胃癌患者预后的有效生物标志物.

目的 研究川崎病(KD)患儿外周血长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5、微小RNA(miR)-132的差异表达及临床意义.方法 选择2016年1月至2020年12月在苏州市中西医结合医院儿科确诊的62例KD患儿作为KD组,另选取同期进行健康体检的80例健康儿童作为对照组.采用荧光定量聚合酶链式反应检测两组受试者外周血LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、LncRNA SNHG5、miR-132、miR-92的表达水平,采用超声心动图评估KD患儿的冠状动脉病变(CAL)情况并分为CAL组和无CAL(NCAL)组;采用Pearson检验分析LncRNA SNHG5与miR-132的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ln-cRNA SNHG5及miR-132对KD及KD合并CAL的诊断价值.结果 KD组外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于对照组,miR-132的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、miR-92表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);KD组外周血中LncRNA SNHG5与miR-132的表达水平呈负相关(r=-0.527,P<0.001);KD组中CAL组患儿外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于NCAL组,miR-132的表达水平低于NCAL组,差异有统计学意义(P<0.05).经ROC曲线分析,LncRNA SNHG5及miR-132的表达水平对KD(截断值分别为1.205、0.871,灵敏度分别为86.25%、75.00%,特异度分别为88.71%、85.48%)及KD合并CAL(截断值分别为1.138、0.643,灵敏度分别为63.46%、67.31%,特异度分别为80.00%、80.00%)均具有诊断价值.结论 KD患儿外周血中LncRNA SNHG5表达增加、miR-132表达降低,两者可作为诊断KD及KD合并CAL的标志物.