目的:探讨miR-324-3p-PDRG1轴对血管瘤生物学行为的影响。方法:选取新乡医学院第一附属医院收治的20例血管瘤组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和肿瘤组织miR-324-3p和PDRG1的表达水平。采用荧光定量PCR分析人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人血管瘤内皮细胞HemECs和HDEC中miR-324-3p表达水平。将人血管瘤内皮细胞HemECs分为miRNA对照组和miR-324-3p组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞的增殖能力；流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析两组细胞的凋亡水平；采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞的迁移和侵袭能力，采用双荧光素酶报告基因技术分析miR-324-3p靶基因，采用蛋白质免疫印迹细胞靶基因的表达水平。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:血管癌组织中miR-324-3p表达水平(0.98±0.08)明显低于癌旁组织表达水平(0.51±0.12)，差异有统计学意义( t＝14.410， P<0.05)。癌旁组织中PDRG1蛋白表达水平(0.98±0.16)明显低于血管瘤组织(1.81±0.24)，差异有统计学意义( t＝12.820， P<0.05)。人正常血管内皮细胞miR-324-3p表达水平(1.05±0.10)明显低于人血管瘤内皮细胞HemECs和HDEC (0.52±0.09、0.69±0.09)，差异有统计学意义( t＝9.768、6.662， P<0.05)。miRNA对照组细胞吸光度值和克隆形成率[(2.02±0.09)、(71.84±8.61)%]高于miR-324-3p组细胞[(1.44±0.11)、(44.31±6.38)%]，差异有统计学意义( t＝9.910、6.295， P<0.05)。miR-324-3p对细胞凋亡的影响：miRNA对照组细胞凋亡比例和TUENL阳性率[(3.44±1.07)%、(3.38±0.55)%]高于miR-324-3p组细胞[(19.48±2.62)%、(13.79±2.53)%]，差异有统计学意义( t＝13.840、9.831， P<0.05)。miRNA对照组细胞迁移和侵袭数量[(112.33±14.62)、(86.17±8.18)个]高于miR-324-3p组细胞[(79.83±7.57)、(44.67±10.73)个]，差异有统计学意义( t＝4.834、7.534， P<0.05)。PDRG1是miR-324-3p的靶基因。miRNA对照组细胞PDRG1蛋白表达水平(1.25±0.18)明显高于miR-324-3p组(0.74±0.21)，差异有统计学意义( t＝5.741， P<0.05)。 结论:miR-324-3p在血管癌组织中呈低表达，促进肿瘤细胞的增殖和迁移侵袭，通过调控PDRG1蛋白实现的。

目的:探讨微小RNA(miR)-216a、miR-324-5p、miR-29a在急性胰腺炎（AP）患者外周血中表达的意义及与胰腺炎并发肝损伤的相关性。方法:采用病例对照研究设计，选取2017年6月至2019年5月商丘市第一人民医院收治的130例AP患者，分为轻症AP组（MAP组）和中重症AP组（SAP组），肝损伤组54例（MAP 20例、SAP 34例）与非肝损伤组76例（均为MAP）；另选取40名健康志愿者为健康组。比较MAP组、SAP组、健康组以及肝损伤组与非肝损伤组外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a表达水平，并分析其与临床指标相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血各miRNA水平对AP并发肝损伤的预测价值。结果:MAP组、SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于健康组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）；SAP组外周血miR-216a、miR-29a水平均高于MAP组，miR-324-5p水平低于健康组（均 P<0.01）。Balthazar CT评分、急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ）评分、C反应蛋白水平、住院时间与外周血miR-216a、miR-29a水平均呈正相关（均 P<0.05），与miR-324-5p水平呈负相关（均 P<0.05）。肝损伤组外周血miR-216a、miR-29a水平高于非肝损伤组，且在肝损伤组中SAP患者高于MAP患者（均 P<0.05）；肝损伤组外周血miR-324-5p水平低于非肝损伤组，且肝损伤组中SAP患者低于MAP患者（均 P<0.05）。外周血miR-216a、miR-324-5p、miR-29a预测AP并发肝损伤的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.694、0.750、0.814。 结论:miR-216a、miR-29a水平在AP患者外周血中表达增高，miR-324-5p水平降低，与Balthazar CT评分、APACHEⅡ评分、C反应蛋白水平、住院时间关系密切，且对AP并发肝损伤有一定预测价值，其中miR-29a预测价值最高。

目的:检测桥本甲状腺炎患者(Hashimoto′s thyroiditis，HT)甲状腺功能正常组、HT合并亚临床甲状腺功能减退(SCH)组以及对照组外泌体微小RNAs(microRNAs，miRNAs)，探讨HT病程中不同甲状腺状态下的miRNA差异表达谱及其相应的生物学功能。方法:选取HT甲状腺功能正常者、HT合并SCH患者及健康志愿者各3人，提取外周血浆外泌体进行miRNA高通量测序，统计分析3组间差异表达miRNA，并进行靶基因预测、基因本体功能(GO)及京都基因与基因组百科全书通路(KEGG pathway)分析。结果:得到75条差异表达miRNA( log2FC>1且 Q- value≤0.001)，数据挖掘后获得hsa-miR-324-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-532-3p等10条核心miRNA。GO分析表明，差异miRNA的靶基因主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程等生物学过程，具备结合、催化活性、转录调节活性等分子功能。KEGG分析得到的通路主要为环磷酸腺苷(cAMP)信号通路、人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor，ErbB)信号通路、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)信号通路等。 结论:HT患者血浆外泌体miRNA较健康人存在差异表达，其在甲状腺功能正常与SCH两种不同状态中也存在差异表达。hsa-miR-324-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-423-5p及hsa-miR-532-3p等miRNA可能通过cAMP、ErbB及HIF-1等信号通路在HT病程进展中发挥一定的作用。

目的:检测分析微小RNA(miR)-324-5p在胰腺癌中的表达情况及临床意义，并探究其对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响及潜在分子机制。方法:实时定量PCR方法检测34对2018年10月至2019年9月在北京大学第一医院手术切除的胰腺癌和癌旁组织中miR-324-5p表达水平，结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析其与胰腺癌临床病理特征及预后的相关性。实时定量PCR方法检测miR-324-5p在胰腺癌细胞系中表达情况，在PANC-1细胞中转染miR-324-5p mimic后通过细胞增殖实验(CCK8)、细胞迁移实验(Transwell)和划痕实验检测miR-324-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响，蛋白质电泳检测相关蛋白表达变化并结合miRNA在线靶点预测分析工具和基因功能分析，寻找miR-324-5p直接调控的下游靶基因。结果:TCGA数据库资料显示miR-324-5p在胰腺癌中的表达水平显著低于正常胰腺组织，且低表达miR-324-5p的胰腺癌患者预后更差；34对胰腺癌及癌旁组织检测结果证实miR-324-5p在胰腺癌中的表达水平(11.7±2.0)低于癌旁胰腺组织(70.9±14.4)，低表达miR-324-5p的患者神经侵犯率(82.1%，23/28)高于高表达患者(33.3%，2/6)，差异具有统计学意义( P<0.05)。胰腺癌细胞系中miR-324-5p表达水平降低，上调PANC-1细胞中miR-324-5p表达后细胞增殖能力显著下降，细胞垂直迁移数量(30.11±5.2)个和水平运动能力(174.6±27.0)μm也较对照组(63.6±4.2)个和(458.3±22.3)μm降低，差异有统计学意义(均 P<0.05)。在线靶点预测工具和基因功能分析结果发现4个与肿瘤转移或EMT调控相关的基因(KLF3、MGAT3、PBX1、ZNRF2)可能是miR-324-5p直接调控的下游靶基因。 结论:胰腺癌中miR-324-5p具有抑癌作用，其低表达与肿瘤神经侵犯、预后差相关。胰腺癌细胞中miR-324-5p可能直接调控KLF3、MGAT3、PBX1、ZNRF2等基因表达，进而抑制细胞增殖、迁移能力。

目的 探讨铁蓄积小鼠骨量下降与微小RNA(miRNA,miR)差异性表达的关系.方法 12周龄雄性ICR小鼠(n=12)随机分为两组:铁蓄积组(FAC组)及对照组(Con组),分别腹腔注射枸橼酸铁胺(FAC)及等量生理盐水,干预8周后检测血清铁蛋白,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测小鼠股骨骨量,并分析相关骨结构参数.小鼠全血分离白细胞提取RNA,进行TaqmanmiRNA芯片检测表达谱差异,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测验证差异miRNA.利用Targetscan及miRDB数据库预测差异miRNA的下游靶基因,并对预测的下游靶基因进行生物信息学分析,包括细胞成分、生物过程、分子功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析.结果 FAC组干预8周后,血清铁蛋白[(218.2 ±29.5) μg/L]相较于对照组[(30.6±9.9)μg/L]明显升高(P =0.000).股骨三维重建示铁蓄积小鼠骨质结构破坏,骨量、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨体积分数(BV/TV)显著下降(P=0.001、0.005、0.021),而骨小梁间隙(Tb.Sp)升高(P=0.000).miRNA芯片结果:初步筛选出20个miRNA表达上调:mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-324-3p、mmu-miR-133a-5p、mmu-miR-214-5p、mmu-miR-22-3p、mmu-miR-34a-5p、mmu-miR-31-5p、mmu-miR-143-5p、mmu-miR-423-3p、mmu-miR-223、mmu-miR-155、mmu-miR-106a、mmu-miR-2861、mmu-miR-148a、mmu-miR-96、mmu-miR-449a-5p、mmu-miR-423-Sp、mmu-miR-204-5p、mmu-miR-211、mmu-miR-23b及7个miRNA表达下调:mmu-miR-1 8a-3p、mmu-miR-223-3p、mmu-miR-199a-5p、mmu-miR-196a-5p、mmu-miR-30c-5p、mmu-miR-15b、mmu-miR-130b.其中mmu-miR-423-5p表达差异最为显著,q-PCR验证结果显示miR-423-5p的表达趋势与测序结果一致.Targetscan和miRDB预测并筛选miR-423-5p下游靶基因共91个.生物信息学分析表明miR-423-5p的靶基因在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、Rap1、Ras及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上出现聚集.结论 铁蓄积导致的骨量下降可能与miR-423-5p差异性表达相关.

目的 探讨miR-324-5p在结肠癌组织中的表达水平及对结肠癌细胞系HCT116和SW620迁移和侵袭能力的影响,以及其靶基因的确定和功能性研究.方法 实时荧光定量PCR检测miR-324-5p在结肠癌组织中的表达.细胞迁移侵袭实验检测HCT116和SW620细胞的转移活性.生物信息学预测、荧光报告载体实验以及实时荧光定量PCR和Western blot验证miR 324-5p下游靶基因.结果 miR-324-5p在结肠癌组织中表达降低.miR-324 5p可以抑制结肠癌细胞系HCT116和SW620迁移和侵袭能力.ABL2是miR-324-5p直接作用的靶基因,过表达miR-324-5p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制ABL2基因的表达.抑制ABL2后,SW620和HCT116细胞的迁移和侵袭能力减弱.结论 ABL2是miR-324-5p的直接靶基因,miR-324-5p通过抑制ABL2的表达而抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭.

目的:通过检测微小RNA-324-5p(miR-324-5p)在动脉粥样硬化(AS)患者血清中的表达水平,分析miR-324-5p在临床中的诊断和预后评估价值.方法:通过实时荧光定量PCR技术检测AS患者与健康对照人群血清中miR-324-5p的表达水平;采用Spearman相关系数分析miR-324-5p的表达与颈动脉内膜-中膜厚度(CIMT)的相关性;通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估miR-324-5p在AS中的诊断价值;通过Kaplan-Meier生存曲线、单因素和多因素Cox回归分析检测miR-324-5p在AS中的预后评估价值.结果:AS患者血清中miR-324-5p的表达水平较健康对照人群显著下降(P<0.001),且miR-324-5p在CIMT值较低的患者中表达,两者为负相关性(r=-0.804 3,P<0.001).ROC曲线下面积为0.874,具有较高的敏感性(80％)和特异性(87.1％),证明miR-324-5p在AS患者中具有较高的诊断准确性.同时发现miR-324-5p可以作为AS的独立预后因子(HR=3.318,95％CI=1.219～9.031,P=0.019),低表达miR-324-5p患者发生心血管事件的概率较高(log-rank P=0.002).结论:低表达miR-324-5p可以作为AS诊断的一种潜在标志物,并且与AS的不良预后相关.

目的 探讨微小RNA-324-5p(miR-324-5p)靶向调控胱天蛋白酶募集域蛋白(CARD)9对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 采用雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建急性胰腺炎模型.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与Western印迹技术分别检测miR-324-5p、CARD9 mRNA及蛋白表达.应用脂质体转染技术分别将miR-NC、miR-324-5p mimic、si-NC、si-CARD9转染入AP腺泡AR42J细胞,噻唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测AR42J细胞增殖及凋亡.双荧光素酶报告实验验证CARD9与miR-324-5p的作用关系.Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、Bcl-2、Bax、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3蛋白表达.结果 雨蛙肽素处理后AR42J细胞中miR-324-5p表达水平显著低于对照组,而CARD9 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);分别转染miR-324-5p mimic、si-CARD9后,由雨蛙肽素诱导的AR42J细胞凋亡明显受到抑制,而细胞增殖能力明显增强,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达上调,p21、p27、Bax、酶切caspase-3蛋白表达下调(均P<0.05);CARD9是miR-324-5p的靶基因;CARD9过表达逆转了miR-324-5p过表达对雨蛙肽诱导的胰腺炎腺泡细胞AR42J增殖和凋亡的作用.结论 miR-324-5p可通过抑制CARD9表达进而促进AR42J细胞增殖,抑制细胞凋亡.

目的 通过生物信息学方法研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和结节性硬化复合物蛋白2(TSC2)基因在胰腺癌中的表达情况,并探讨分析其与预后的关系.方法 利用来自癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库的胰腺癌患者数据进行Kaplan-Meier分析,进而深层次探讨DAPK1和TSC2基因表达水平与患者总生存期或无进展生存期(PFS)的关系,同时,对影响预后的因素进行Cox多因素分析,以及分析胰腺癌中DAPK1和TSC2基因启动子的甲基化水平.此外,通过双荧光素酶报告基因检测系统,验证靶向DAPK1的微小RNA(miR),并应用定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法验证在胰腺癌细胞中miR-324-5p负调控DAPK1的表达.结果 多因素分析显示,肿瘤分级(P=0.005)、R0切除(P＜0.001)及TSC2表达情况(P=0.005)是影响胰腺癌患者PFS的独立危险因素;肿瘤部位(P=0.006)、病理类型(P=0.002)及分子靶向治疗(P＜0.001)是影响胰腺癌患者总生存期的独立危险因素.DAPK1基因低表达且TSC2基因高表达的胰腺癌患者具有更好的总生存期(P=0.024).DAPK1和TSC2甲基化水平与相应的mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.69、-0.37,均P＜0.05).体外实验结果证实,过表达的miR-324-5p显著抑制了胰腺癌PaCa-2和PANC-1细胞DAPK1 mRNA和蛋白的表达[mRNA:(0.37±0.02)比(1.00±0.02)、(0.53±0.01)比(1.00±0.06);蛋白:(0.54±0.06)比(1.04±0.12)、(0.63±0.11)比(1.01±0.11)](均P＜0.05).结论 DAPK1基因联合TSC2基因的表达情况可以预测胰腺癌患者的预后;在胰腺癌组织中,DAPK1和TSC2启动子的低甲基化水平是DAPK1和TSC2高表达的重要因素;miR-324-5p负调控DAPK1的表达,有望成为胰腺癌靶向治疗的新靶点.

目的:探讨微小RNA-324-5p(miR-324-5p)对各组HBZY-1细胞增殖的影响及其机制.方法:采用MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR检测HBZY-1细胞内miR-324-5p、Syk、Ras、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2以及c-fos的表达水平,免疫荧光检测HBZY-1细胞中Syk/Ras/c-fos信号轴相关表达蛋白及对其进行亚细胞定位.结果:与LPS组相比,转染miR-324-5p-inhibitor后,miR-324-5p的表达水平显著下降,促进HBZY-1细胞增殖,Syk、Ras、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2以及c-fos的表达水平均显著升高,Syk/Ras/c-fos信号轴被激活.p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2以及c-fos主要在细胞质中表达.结论:miR-324-5p-inhibitor可通过激活Syk/Ras/c-fos信号轴促进HBZY-1细胞的增殖,表明miR-324-5p可能参与了慢性肾小球肾炎(CGN)中肾小球系膜细胞(GMC)增殖过程,初步探讨了CGN的发病机制.