目的:筛选血浆外泌体微小核糖核苷酸(microRNA)作为肝细胞癌(HCC)的诊断标志物，并分析候选miRNA在HCC进展中可能发挥的作用。方法:2018年10月至2019年2月收集12例于广州市第一人民医院初诊为"HCC"的患者及12例健康志愿者血浆样本，利用超速离心法收集血浆外泌体，经动态光散射法及蛋白质免疫印迹法鉴定后，提取RNA进行测序。通过定量聚合酶链反应(qPCR)验证候选外泌体miRNA差异表达量，使用 t检验分析各miRNA表达量差异。通过生物信息学方法预测候选miRNA的靶基因及可能调控的通路，分析其在HCC进展过程中发挥的作用，组间比较采用 t检验。 结果:以差异表达倍数2倍以上(Fold change>2.0或<0.5，且 P<0.05)作为标准，分别比较HCC患者术前、术后及健康志愿者血浆外泌体miRNA的差异表达结果，结合两次结果，筛选表达同时上/下调miRNA共12个。其中，表达上调6个(miR-2115-3p、miR-214-3p、miR-511-5p、miR-1299、miR-10a-5p、miR-375-3p)，表达下调6个(miR-219a-2-3p、miR-127-3p、miR-9-5p、miR-383-5p、miR-212-5p、miR-1248)。qPCR验证候选miRNA在HCC患者及健康志愿者血浆外泌体中的表达差异，HCC组miR-1248表达低于健康志愿者组(9.046 ΔCt比7.597 ΔCt， t＝2.849， P<0.05)。 结论:血浆外泌体miR-1248有作为HCC的诊断标志物的潜力。血浆外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC进展。

目的 检测分析非小细胞肺癌(NSCLC)病人血清微小RNA(miR)-455和miR-383的表达水平,并探讨其临床诊断价值.方法 选取我院2020年3月～2023年1月收治的98例NSCLC病人为NSCLC组,同期收治的98例肺部良性疾病病人为肺良性病变组,同期98例体检健康志愿者为健康组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血清miR-455和miR-383的表达水平.Pearson分析NSCLC病人血清miR-455表达水平与miR-383水平的相关性;多元Logistic回归分析及ROC曲线分析NSCLC发生的影响因素及诊断价值.结果 健康组、肺良性病变组、NSCLC组血清miR-455、miR-383表达水平依次降低.Pearson分析显示,NSCLC病人血清miR-455表达水平与miR-383水平呈正相关(r=0.582,P＜0.05).Logistic分析发现,miR-455、miR-383低表达是影响NSCLC发生的危险因素(P＜0.05).ROC曲线分析显示,miR-455和miR-383联合诊断NSCLC的AUC显著大于miR-455单独诊断的AUC(Z=3.604,P=0.000)及miR-383单独诊断的AUC(Z=2.594,P=0.010).结论 NSCLC病人血清miR-455、miR-383相对表达水平明显下调,二者联合检测对NSCLC具有较高的诊断价值.

目的:基于肿瘤因子、炎症状态探究紫杉醇白蛋白辅助铂类化疗治疗复发转移性宫颈癌的疗效及安全性.方法:选取2020年1月至2023年1月本院100例复发转移性宫颈癌患者,采用电脑随机数字表法随机分为两组,其中对照组50例,采用紫杉醇辅助奈达铂方案治疗,研究组50例,采用紫杉醇白蛋白辅助奈达铂方案治疗.比较两组近期疗效、肿瘤因子、炎症因子、复发转移相关指标、生存质量、功能状态、不良反应.结果:研究组总缓解率(72.00％)高于对照组(48.00％)(P＜0.05);研究组治疗1个周期、3个周期后血清细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、糖链抗原724(CA724)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平低于对照组,血清微小RNA-367(miR-367)、微小RNA-383(miR-383)水平、肿瘤患者生活质量评分(QOL)、卡氏功能状态评分(KPS)评分高于对照组(P＜0.05);研究组治疗期间恶心/呕吐、腹泻、疲倦、白细胞减少、过敏反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但总不良反应发生率(12.00％)低于对照组(32.00％)(P＜0.05).结论:紫杉醇白蛋白辅助奈达铂在复发转移性宫颈癌治疗中疗效可靠,能进一步下调肿瘤因子水平,缓解炎症状态,且安全性较高.

目的 探讨急性重型颅脑创伤患者血清白细胞介素-1α和1β(IL-1α和IL-1β)表达变化以及外周血单个核细胞微小RNA(miRNA)相对表达量,并探讨其分子机制.方法 采用生物学信息软件TargetScan Release 7.1分析调控IL-1α和IL-1β基因的miRNA;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-1α和IL-1β表达变化,逆转录-聚合酶链反应检测外周血单个核细胞miRNA相对表达量;双荧光素酶报告基因载体验证基因之间相互作用.结果 IL-1α是miRNA-24-3p调控的靶基因,1L-1β是miRNA-383-3p调控的靶基因.急性重型颅脑创伤患者血清IL-1α[(4.09±2.32) ng/L对(0.56±0.02) ng/L;t 124.369,P=0.030]和IL-1β[(3.99±1.73) ng/L对(0.89±0.03) ng/L;t=163.123,P=0.010]水平高于正常对照者.急性重型颅脑创伤患者外周血miRNA-24-3p和miRNA-383-3p相对表达量为23％和17％,IL-1α和IL-1β基因相对表达量为390％和420％.双荧光检测显示,各处理组细胞IL-1α基因(F=40 154.000,P=0.000)和IL-1β基因(F=4015.000,P=0.003)表达量差异有统计学意义,其中miRNA-24-3p组细胞IL-1α基因表达量低于空白对照组(P=0.000)、miRNA-24-3p抑制剂组(P=0.023)、阴性对照组(P=0.023)和阴性抑制剂组(P=0.023),miRNA-383-3p组细胞IL-1β基因表达量低于空白对照组(P=0.000)、miRNA-383-3p抑制剂组(P=0.000)、阴性对照组(P=0.000)和阴性抑制剂组(P=0.000);经过转染克隆IL-1 α-mut-3'UTR和IL-1 β-mut-3'UTR质粒后,各处理组细胞IL-1α基因(F=72.400,P=0.001)和IL-1β基因(F=37.000,P=0.000)表达量差异有统计学意义,但miRNA-24-3p组细胞IL-1α基因表达量与空白对照组、miRNA-24-3p抑制剂组、阴性对照组和阴性抑制剂组差异无统计学意义(均P＞ 0.05),miRNA-383-3p组细胞IL-1β基因表达量与空白对照组、miRNA-383-3p抑制剂组、阴性对照组和阴性抑制剂组差异无统计学意义(均P＞0,05).结论 急性重型颅脑创伤患者血清IL-1α和IL-1β水平高于正常对照者,其作用机制可能是IL-1α基因受miRNA-24-3p负性调控、IL-1β基因受miRNA-383-3p的负性调控.

目的 分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清外泌体中差异表达microRNAs(miRNAs),并进一步分析血清外泌体中差异表达miRNAs的功能.方法 PCOS患者30例为实验组,因单纯输卵管因素不孕患者30例为对照组.分别于月经周期第2～4天抽取两组外周血,提取、纯化血清外泌体,高通量测序定性、定量检测外泌体miR-NAs,分析两组差异表达(差异表达倍数≥2且P<0.01)血清外泌体miRNAs.生物信息学分析差异表达外泌体miRNAs的功能.取两组外周血,qRT-PCR法定量检测两组差异表达外泌体miRNAs.结果 PCOS患者血清外泌体中差异表达miRNAs共有243条,其中hsa-miR-378d、hsa-miR-378b、hsa-miR-4772-3p等表达上调115条、hsa-miR-5090、hsa-miR-3680-3p、hsa-miR-6836-5p等表达下调128条.PCOS患者差异表达血清外泌体miRNAs与类固醇激素的合成有关,可能参与调节胰岛素信号受体通路.与对照组比较,实验血清外泌体miR-146a-5p、miR-25-5p、miR-27a-3p、miR-93-5p、miR-23a-3p、miR-223-5p、miR-25-3p、miR-483-5p、miR-383-5p相对表达量升高(P均<0.05).结论 PCOS患者血清外泌体hsa-miR-378d、hsa-miR-378b、hsa-miR-4772-3p等表达上调,hsa-miR-5090、hsa-miR-3680-3p、hsa-miR-6836-5p等表达下调.PCOS患者差异表达血清外泌体miRNAs与类固醇激素的合成有关,可参与调节胰岛素信号受体通路.

目的 探讨微小RNA-383(miR-383)在小鼠卵泡不同发育阶段的表达规律以及对颗粒细胞增殖的影响.方法 取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、21、21 d[腹腔注射10 IU孕马血清促性腺激素(PMSG) 48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG)6 h后]的卵巢组织、卵泡和颗粒细胞,通过实时定量PCR法检测miR-383的表达情况.取小鼠出生21 d的颗粒细胞,分别转染miR-383模拟物(miR-383 mimics)或miR-383抑制物(miR-383 inhibitor),另外设置阴性对照组.通过噻唑蓝(MTT)法检测颗粒细胞增殖情况,流式细胞术检测颗粒细胞的细胞周期变化.采用Westernblot法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、cyclin B、细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、CDK2、CDK4的蛋白水平.结果 与小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔较小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又进一步降低.与小腔前卵泡颗粒细胞相比,大腔前卵泡和腔较小的有腔卵泡颗粒细胞中miR-383的含量降低,但是在成熟卵泡颗粒细胞中的含量却有所上调.与空白组相比,miR-383 mimics组颗粒细胞的增殖速度减慢,且G0/G1期比例升高,G2/M期比例降低,cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平降低;而miR-383 inhibitor组颗粒细胞的增殖速度加快,G0/G1期比例降低,G2/M期比例升高,且cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平增加.结论 miR-383可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,将颗粒细胞周期阻滞在G0/G1期,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖.

目的 探讨微小RNA-383(miR-383)靶向调控人过氧化物还原酶-3(PRDX3)的表达对肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外培养肝癌HepG2细胞,应用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测HepG2细胞中miR-383表达水平;将HepG2细胞分为空白(NG)组、miR-383阴性对照(NC)组、miR-383过表达(miR-383 mimics)组,转染48 h后,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-383的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证,应用蛋白免疫印记(Western blotting)法检测对PRDX3、Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响.结果 与NG组、NC组比较,miR-383 mimics组HepG2细胞中miR-383表达水平显著升高(P<0.05);HepG2细胞增殖抑制率明显升高,侵袭、迁移细胞数明显减少(P<0.05).TargetScan数据库预测显示PRDX3是miR-383潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系.Western blotting结果显示,miR-383过表达后,PRDX3、Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均显著下调.结论 miR-383可能通过下调PRDX3表达抑制人肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨血清微小RNA-367(microRNA-367,miR-367)、微小RNA-383(microRNA-383,miR-383)表达水平与宫颈癌根治术后复发及预后的相关性.方法:选取2012年01月至2014年12月在本院行宫颈癌根治术的114例患者为研究对象,记录患者年龄、肿瘤大小、病理类型、病理分级、临床分期、间质浸润深度、淋巴结转移等一般资料,根据术后36个月复发与否将其分为预后良好组(97例)及预后不良组(17例),采用荧光实时定量聚合酶链反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清中miR-367、miR-383表达水平并进行比较;分析miR-367、miR-383表达水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系;采用乘积极限法(Kaplan-Meier,K-M)进行宫颈癌患者术后36个月预后分析,并采用Log-rank检验进行显著性比较;采用COX模型分析影响宫颈癌患者术后复发的因素.结果:宫颈癌患者血清miR-367、miR-383表达水平与年龄、肿瘤大小、病理类型均无关(P>0.05),与病理分级、临床分期、间质浸润程度、淋巴结转移均有关(P<0.05).与预后良好组相比,预后不良组血清miR-367、miR-383表达水平均较低(P<0.05).114例接受宫颈癌根治术的患者随访36个月,17例复发,复发率为14.91％.K-M曲线结果显示,miR-367高表达组、miR-367低表达组术后36个月复发率分别为8.20％、22.64％,无进展生存期平均值分别为35.049个月(95％CI:34.165～35.933)、32.736个月(95％CI:30.954～34.517)(P=0.028);miR-383高表达组、miR-383低表达组术后36个月复发率为5.08％、25.45％,无进展生存期平均值分别为35.153个月(95％CI:34.213～36.092)、32.091个月(95％CI:30.164～34.017)(P=0.002).COX风险评估模型结果显示,miR-367低表达、miR-383低表达、低分化、Ⅱa期、间质浸润深度>1/2、伴淋巴结转移均是影响宫颈癌患者术后复发的独立危险因素(P<0.05).结论:宫颈癌患者血清miR-367、miR-383均为低表达,且与术后复发情况密切相关,可能为预测患者预后提供临床参考依据.

目的 通过数据挖掘分析长链非编码RNA(lncRNA)、微小RNA(miRNA)和信使RNA(mRNA)在喉鳞状细胞癌中的相互作用机制.方法 从肿瘤基因图谱(TCGA)中获取喉鳞状细胞癌的lncRNA、miRNA、mRNA表达谱数据及相关临床数据,从TCGA和GEO数据库中获取喉鳞状细胞癌的DNA甲基化数据.进行蛋白相互作用(PPI)、基因文本(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路分析和Kaplan-Meier生存分析,构建竞争性内源RNA(ceRNA)网络和转录因子调控网络.结果 LINC00278、LINC00689、MYHAS、miRNA-99a和miRNA-301a属于低风险基因(HR<1);MNX1-AS1、LINC02575、HOXB-AS4、LSAMP-AS1、LINC02086、IG-FL2-AS1、LINC02253、CASC20、miRNA-383、miRNA-196a-2、miRNA-196a-1、miRNA-100和miRNA-4652属于高风险基因(HR>1).ceRNA网络中有11个lncRNA(LINC02576、LINC02086、AC020659.1、LINC00528、LINC00689、HOXB-AS4、MNX1-AS1、LINC00278、AC010624.1、AC016773.1、MYHAS)、5个miRNA(has-miRNA-206、has-miR-NA-573、has-miRNA-3662、has-miRNA-133b、has-miRNA-449a)和12个mRNA(STC2、PAX3、NETO2、EIF5A2、AD-PRHL1、SYNM、ACTA1、GPR156、CLIC5、BMP3、HNF4A、FOXL2).MYHAS的共表达mRNA(cor-mRNA)主要富集在钙信号通路、环磷酸鸟苷(cGMP)-cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)信号通路和催产素信号通路等.转录因子网络中有9个转录因子(MYOD、RSRFC4、TAL1BETAITF2、YY1、P300、PAX3、PAX5、ZID和OLF1).喉鳞状细胞癌DNA甲基化分析得到75个甲基化位点,对应高甲基化基因56个,低甲基化基因15个.结论 ceRNA网络并不能完全阐释lncRNA、miRNA和mRNA在喉鳞状细胞癌发生中的作用机制,lncRNA、miRNA和mRNA在喉鳞状细胞癌发生过程中既相互联系又相互独立.筛选出的lncRNA、miRNA和mRNA为试验验证缩小了范围并提供了理论基础.MYHAS在喉鳞状细胞癌中发挥重要作用,是一个潜在的生物学靶点.

目的:检测miR-383、miR-515在胃癌组织中的表达及意义,并探讨其与临床病理特征及预后的关系.方法:选取2016年2月—2017年3月住院治疗的60例胃癌患者,收集切除的癌组织及癌旁组织分别作为胃癌组、癌旁组织组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测胃癌组织中miR-383、miR-515表达水平;Kaplan-meier法分析胃癌组织中miR-383、miR-515表达水平与预后关系,采用Cox回归模型分析影响胃癌患者预后的危险因素.结果:胃癌组中miR-383表达水平明显低于癌旁组织组(P<0.05),miR-515表达水平明显高于癌旁组织组(P<0.05).胃癌患者中miR-383表达、miR-515表达与肿瘤直径、血管浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤位置、组织学分级、肿瘤类型无相关性(P>0.05).Kaplan-meier法分析显示,胃癌组织中miR-383高表达组平均生存时间及3年内总生存率显著高于miR-383低表达组(Log-rank P=0.003),miR-515低表达组平均生存时间及3年内总生存率高于miR-515高表达组(Log-rank P=0.009).多因素分析显示,miR-383、miR-515表达和肿瘤分化程度是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05).结论:胃癌组织中miR-383表达水平降低,miR-515表达水平升高,两者可能作为临床预后判断的靶点,为临床诊治提供一定参考.