我国结直肠癌的发病率和死亡率逐年升高，目前缺乏有效无创、依从性高的结直肠癌筛查方法。粪便DNA和RNA检测是近年新兴的非侵入性结直肠癌筛查手段，尤其是粪便多靶点DNA和微小RNA（miRNA）检测具有无创无痛、敏感性高、安全方便等特点，能在很大程度上弥补传统筛查方法的不足。国外已将粪便多靶点DNA检测纳入结直肠癌的筛查指南，但其也存在特异性低、价格昂贵、癌前病变检出率低等不足。粪便miRNA检测具有敏感性和特异性较高（miR-451）、癌前病变检出率高（miR-92a）等优势，但缺乏大样本、多中心的循证医学证据支持。本文对粪便标志物DNA和RNA筛查结直肠癌进展进行综述，重点介绍粪便多靶点DNA和miRNA检测的特性。

目的:通过检测类风湿关节炎(RA)患者血浆外泌体中miRNA-146a-5p和miRNA-155-5p的表达，探讨其在RA发病中的作用。方法:采用Qiagen外泌体提取试剂盒提取56例RA患者和24例健康者血浆中的外泌体，以miRNA-451a作为内源性参考对照，实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测外泌体中miRNA-146a-5p和miRNA-155-5p的相对表达量，使用2 -△△Ct法计算相对表达水平。 结果:RA患者外泌体中miRNA-146a-5p和miRNA-155-5p的相对表达量均显著高于健康对照组[13.662(6.058，30.801)vs 5.261(2.453，12.103)和33.354(15.087，275.309)vs 11.684(1.551，17.221)， P均<0.05]，且活动期RA组中二者的相对表达量也明显高于稳定期RA组[27.542 (13.905，87.017) vs 7.217 (5.218，13.697)和155.110 (35.600，437.745) vs 15.526 (10.628，24.504)， P均<0.05]。外泌体中miRNA-146a-5p和miRNA-155-5p水平与基于C反应蛋白的28个关节疾病活动性评分(DAS28-CRP)、基于红细胞沉降率的28个关节疾病活动性评分(DAS28-ESR)、关节压痛数(tender joint count，TJC)和关节肿胀数(swollen joint count，SJC)均呈正相关。RA组和健康对照组外泌体浓度[660.381 (581.212, 807.308) μg/ml vs 675.897 (559.328, 752.316) μg/ml]，以及活动期RA组和稳定期RA组外泌体的浓度[634.963 (561.095, 756.107) μg/ml vs 676.374 (589.167, 898.333) μg/ml]差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:miRNA-146a-5p和miRNA-155-5p在RA患者血浆外泌体中明显高表达，且在活动期RA组中的表达明显高于稳定期RA组，提示血浆外泌体miRNA-146a-5p和miRNA-155-5p可能在RA发病中起重要作用，且与疾病活动度有关。

目的 分析微小RNA-451(miR-451)在小细胞性贫血及慢性感染贫血儿童血清中的表达情况,探讨miR-451与红细胞相关参数的相关性及其对儿童贫血的诊断价值.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测小细胞性贫血组(n=80)、慢性感染贫血组(n=80)、健康对照组(n=80)儿童血清miR-451表达水平;采用Pearson相关分析法探讨血清miR-451与红细胞相关参数[红细胞分布宽度(RDW)、红细胞(RBC)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞体积(MCV)]的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-451 对小细胞性贫血、慢性感染贫血、贫血严重程度的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析探讨儿童发生小细胞性贫血、慢性感染贫血的影响因素.结果 小细胞性贫血组、慢性感染贫血组儿童血清miR-451表达水平低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);miR-451 与 RDW 呈负相关(r=-0.388,P＜0.05),与 Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV 分别呈正相关(r=0.402、0.393、0.391、0.360、0.323,P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-451诊断小细胞性贫血、慢性感染贫血的曲线下面积分别为0.718、0.735,诊断价值高于红细胞相关参数RDW、Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV,差异有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,体质量指数、RDW、Hb、RBC、MCHC、MCH、MCV、miR-451均为儿童发生小细胞性贫血、慢性感染贫血的影响因素(P＜0.05).随着儿童贫血程度的加重,血清miR-451表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-451水平对儿童贫血严重程度具有较高的诊断价值.结论 miR-451在小细胞性贫血、慢性感染贫血儿童血清中表达降低,且其表达水平与红细胞相关参数水平存在相关性,血清miR-451对小细胞性贫血、慢性感染贫血和贫血严重程度均具有较高的诊断价值.

目的 探讨活动性肺结核(ATB)患者血清微小RNA(miR)-451a、Toll样受体4(TLR4)表达水平与其预后的关系.方法 将350例肺结核患者根据诊断情况分为ATB组(162例)与非ATB组(NATB组,188例),另选180例健康体检者纳入对照组.ATB组依据预后分为预后良好组(120例)与预后不良组(42例).检测血清miR-451a、TLR4 mRNA水平,分析ATB患者预后影响因素,Pearson法分析miR-451a与TLR4 mRNA相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-451a、TLR4 mRNA预测ATB患者预后的效能.结果 对照组、NATB组、ATB组血清miR-451a水平依次降低、TLR4 mRNA水平依次升高(均P＜0.05).ATB 组血清 miR-451a 与 TLR4 mRNA 水平呈负相关(r=-0.519,P＜0.05),血清 miR-451a 与 C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)呈负相关(r=-0.404、-0.377、-0.435、-0.391,P＜0.05),血清 TLR4 mRNA 与 CRP、ESR、IFN-γ、IL-12 呈正相关(r=0.469、0.361、0.442、0.384,P＜0.05).预后不良组血清miR-451a水平低于预后良好组,血清TLR4 mRNA水平高于预后良好组(P＜0.05).回归分析显示,TLR4 mRNA、miR-451a是ATB患者预后影响因素(P=0.001、0.009).血清miR-451a联合TLR4 mRNA 预测 ATB患者预后不良的ROC曲线下面积(AUC)为0.949,优于单独检测 miR-451a、TLR4 mRNA 的 0.852、0.821(P＜0.05).结论 ATB 患者血清 miR-451a 水平降低、TLR4 mRNA水平升高,与炎症反应及预后密切相关,miR-451联合TLR4 mRNA对预后预测价值较高.

目的 探究益景汤对早期糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜组织中微小RNA(miRNA)表达的影响,筛选出益景汤干预早期DR的靶点miRNA.方法 将20只2月龄雄性SD大鼠使用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)和益景汤组(YJG),另将常规喂养的大鼠设为对照组(CG),每组10只.YJG组大鼠每日灌胃益景汤12.50 g/kg,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,均干预16周.给药完成后记录大鼠体质量,摘除双侧眼球剥离视网膜,提取总RNA,PCR扩增构建小RNA文库,采用高通量测序技术对该文库进行测序.对差异miRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行基因本体论(GO)、Pathway分析,选择差异倍数较大的miRNA进行PCR验证.结果 (1)已知miRNA差异:筛选出644个已知miRNA,其中差异miRNA共59个.与CG组比较,MG组35个miRNA上调、6 个miRNA下调,YJG组20个miRNA上调、4个miRNA下调;与MG组比较,YJG组6个miRNA上调、13个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05);其中,1个上调miRNA,11个下调miRNA为益景汤干预DM大鼠后,3组共同差异性表达miRNA.(2)新发现miRNA差异:3组筛选出242个新发现的miRNA,其中差异miRNA共105个.与CG组比较,MG组50个miRNA上调,15个miRNA下调;与CG组比较,YJG组55个miRNA上调,20个miRNA下调;与MG组比较,YJG组16个miRNA上调,6个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).(3)差异miRNA生物学功能和通路:差异基因主要涉及生物学过程方面的多种蛋白的转录调节;靶基因关联的通路主要是肿瘤相关的信号通路和糖脂代谢相关通路.(4)PCR验证:MG组大鼠视网膜miR-673-3p表达低于CG组,余11个miRNA表达均高于CG组;YJG组大鼠视网膜miR-673-3p、miR-23b-5p表达均高于MG组,余10个miRNA表达均低于MG组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).除miR-23b-5p外,其余11个miRNA与上述RNA检测结果一致.结论 miR-673、miR-1、miR-133、miR-214、miR-23b、miR-31a、miR-451等可能是益景汤干预早期DR微血管损害的靶点miRNA.

目的 探讨微小RNA-451a(miR-451a)通过巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路改善脓毒症大鼠肺损伤的作用机制.方法 采用随机数表法选取40 只大鼠为造模组,其余10 只大鼠为假手术组.造模组大鼠采用结扎盲肠法制备脓毒症模型后,再随机分为模型组、miR-451a agomir组、agomir-NC组和MIF抑制剂(ISO-1)组,每组各10 只.miR-451a agomir组、agomir-NC组、ISO-1 组分别由尾静脉注射2 mg/kg miR-451a agomir、2 mg/kg agomir-NC、1 mg/kg ISO-1 干预,假手术组、模型组大鼠均注射等体积的生理盐水,每4h注射1 次、连续干预48 h.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清和肺组织中miR-451a、MIF mRNA表达水平.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6 水平.采用HE染色观察肺组织病理学变化.采用TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况.采用Western blot检测肺组织MIF、AMPK、p-AMPK蛋白表达水平.采用双荧光素酶实验验证miR-451a与MIF的关系.结果 与假手术组相比,造模组大鼠血清中miR-451a表达水平降低,MIF mRNA表达水平升高(P＜0.05).模型组、agomir-NC组大鼠肺组织细胞凋亡率及TNF-α、IL-6 水平均高于假手术组、miR-451a agomir组及ISO-1 组(P＜0.05).模型组、agomir-NC组大鼠肺组织p-AMPK/AMPK、miR-451a蛋白表达水平均低于假手术组、miR-451a、agomir组及ISO-1 组,MIF及MIF mRNA蛋白表达水平均高于假手术组、miR-451a agomir组及ISO-1 组(P＜0.05).miR-451a mimics+MIF WT组细胞荧光素酶活性低于mimics-NC+MIF WT组(P＜0.05).结论 上调miR-451a的表达可减轻脓毒症大鼠病理损伤,改善炎性浸润及细胞凋亡状况,可能与靶向抑制MIF、激活AMPK通路有关.

目的 研究活动性肺结核患者血清微小RNA(miR)-20a和25羟维生素D3[25(OH)D3]与结肠癌相关转录因子2(1ncRNACCAT2)及miR-451a水平变化及临床意义.方法 以2020年1月-2022年7月山东第一医科大学附属济南人民医院收治的活动性肺结核患者97例为病例组,随机选取同期在医院体检的104名健康体检者为健康对照组,统计两组一般资料及血清miR-20a、25(OH)D3、lncRNA CCAT2、miR-451a表达水平,比较不同病情严重程度患者血清miR-20a、25(OH)D3、lncRNA CCAT2及miR-451a表达水平.结果 病例组血清25(OH)D3、miR-451a表达水平低于健康对照组,血清miR-20a、lncRNA CCAT2水平高于健康对照组(P＜0.05).轻、中、重度组患者血清25(OH)D3水平呈逐渐降低趋势,血清miR-20a、lncRNA CCAT2、miR-451a表达水平呈逐渐升高趋势,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 血清miR-20a,25(OH)D3、lncRNA CCAT2、miR-451a表达水平与活动性肺结核患者病情发生和发展密切相关,通过监测活动性肺结核患者血清miR-20a、25(OH)D3、1ncRNA CCAT2、miR-451a表达水平变化有助于测评患者病情情况.

目的 观察过表达miR-451a对宫颈癌细胞株SiHa和C33A增殖和凋亡的影响,探讨其分子机制. 方法 以宫颈癌细胞株SiHa和C33A为研究对象,分为miR-NC组(脂质体转染miR-NC)和miR-451a组(脂质体转染miR-451a模拟物),qPCR检测转染48 h各组细胞miR-451a、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和钙结合蛋白39 (CAB39) mRNA的表达,Western blotting检测各组细胞MIF、CAB39、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,MIT法和平板克隆实验检测细胞增殖能力. 结果 与miR-NC组相比,miR-451a组SiHa和C33A细胞中miR-451a表达均显著增加(P＜0.01),MIF和CAB39 mRNA及蛋白表达显著减少,CAB39下游蛋白p-PI3K和p-AKT表达下调.miR-451 a组细胞周期进展被显著抑制(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05),细胞的增殖能力显著下降(P＜0.05). 结论 过表达miR-451a能够抑制宫颈癌细胞株的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调MIF、CAB39蛋白的表达有关.

目的:探讨微小RNA-451(miR-451)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)炎症发生的抑制作用及靶向β型蛋白酶体亚基8(proteasome subunit βtype 8,Psmb8)基因的调控机制.方法:分别将MCs培养于低糖和高糖DMEM培养基中,qPCR检测miR-451的表达水平;qPCR检测过表达miR-451后炎症相关因子IL-18和TNF-α的mRNA表达水平;Western blot检测IL-18、TNF-α及Psmb8的蛋白表达水平;Western blot 检测低表达Psmb8的MCs中IL-18和TNF-α蛋白的相对表达水平.结果:高糖组MCs的miR-451表达水平较低糖组明显降低(P<0.01),而Psmb8表达却显著增高(P<0.01).进一步在高糖组过表达miR-451后,Psmb8的表达水平明显降低(P<0.01),炎症相关因子IL-18和TNF-α表达水平亦明显降低(P<0.01).同时,在高糖组中沉默Psmb8后,IL-18和TNF-α表达水平降低(P<0.01).结论:miR-451在高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞中靶向抑制Psmb8的表达,降低炎症相关因子IL-18和TNF-α蛋白的表达,从而缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞的炎症反应.

目的 探讨微小RNA-451(miRNA-451)通过调控COX-2等细胞因子对人肝癌细胞株增殖和侵袭能力的影响.方法 采用RT-PCR法检测正常肝细胞株以及人肝细胞癌细胞株中miRNA-451的表达情况;利用慢病毒转染的方法使MHCC-97H细胞过表达miRNA-451,利用RT-PCR法检测MIF 、MAPK 、ERK 、COX-2 、TGF-β 、VEGF和PGE2 mRNA的表达水平;通过平板克隆实验和Transwell小室分别检测miRNA-451过表达后MHCC-97H的增殖和侵袭能力的变化.结果 HCC细胞株HCCLM-3、MHCC-97H、MHCC-97L、Huh-7、SMMC-7721、HepG2中miRNA-451的相对表达量分别为(0.11±0.01)、(0.23±0.01)、(0.44±0.03)、(0.55±0.02)、(0.74±0.03)、(0.70±0.01),与正常肝细胞株L-02细胞比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05).转染72 h后,LV-pre-miRNA-451组miRNA-451的相对表达量较空白对照组上调了(12.09 ± 0.15)倍(P﹤0.05).miRNA-451过表达后,MIF 、MAKP 、ERK 、COX-2 、TGF-β 、VEGF 、PGE2 mRNA的相对表达量分别为(0.30 ± 0.13)、(0.68 ± 0.02)、(0.48 ± 0.02)、(0.56±0.01)、(0.51±0.02)、(0.42±0.02)、(0.76±0.03),与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05).培养24 h后,LV-pre-miRNA-451组侵袭至Transwell膜背面的细胞数量为(53±5)个,明显低于空白对照组的(79±4)个,差异有统计学意义(t=7.700,P﹤0.01);HCC细胞株MHCC-97H过表达miRNA-451后的平板克隆形成率为(15.7± 0.5)%,明显低于空白对照组细胞的(27.0±0.4)%,差异有统计学意义(t=31.705,P﹤0.01).结论 miRNA-451通过MIF/MAPK/ERK途径可调控肿瘤微环境内的细胞因子,从而影响肿瘤细胞的侵袭能力.