目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) CCAT1对膀胱癌细胞增殖、迁移和耐药的影响及其机制。方法:选取2019年6月到2021年6月新乡市中心医院收治的71例膀胱癌标本作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织lncRNA CCAT1表达水平。采用浓度梯度递增法建立顺铂耐药细胞株T24/顺铂(DDP)，分别采用对照lncRNA和lncRNA CCAT1敲降慢病毒感染T24和T24/DDP细胞系，分别为T24/对照组，T24/CCAT1 KD组，T24/DDP对照组和T24/DDP CCAT1 KD组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞的增殖能力；采用划痕实验和Transwell实验分析细胞的迁移能力；采用流式细胞术分析细胞的耐药能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA CCAT1靶基因，采用荧光定量PCR分析靶基因表达水平，组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中lncRNA CCAT1表达水平(1.03±0.18)明显低于膀胱癌组织(2.78±0.48)，差异有统计学意义( t＝28.341， P<0.05)。T24-对照组细胞24、48、72 h吸光度值(0.92±0.03、1.49±0.06、2.00±0.03)明显高于T24-CCAT1 KD组(0.70±0.06、1.17±0.04、1.56±0.10)，差异均有统计学意义( F＝3.108， P<0.05)。T24-对照组细胞划痕愈合率[(87.75±3.50)%]明显高于T24-CCAT1 KD组[(1.03±0.18)%]，差异均有统计学意义( t＝8.555， P<0.05)。T24-对照组细胞迁移数量[(123.25±17.08)个]明显高于T24-CCAT1 KD组[(90.75±11.32)个]，差异均有统计学意义( t＝3.172， P<0.05)。T24/DDP对照组经顺铂处理后24、48、72 h吸光度值(0.73±0.09、1.27±0.10、1.84±0.12)明显高于T24/DDP CCAT1 KD组细胞(0.52±0.03、0.91±0.03、1.36±0.04)，差异均有统计学意义( F＝4.094， P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示lncRNA CCAT1是微小RNA(miR)-490-3p的海绵。T24/对照组细胞miR-490-3p表达水平(1.21±0.10)明显低于T24/CCAT1 KD组细胞(2.30±0.20)，差异有统计学意义( t＝9.699， P<0.05)。 结论:lncRNA CCAT1在膀胱癌中呈高表达，通过miR-490-3p调节着膀胱癌细胞的增殖、迁移和耐药等过程。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-490-3p抑制脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:选取2021年7月到2023年7月新乡医学院第一附属医院收治的70例原发性脑胶质瘤标本和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和胶质瘤组织miR-490-3p的表达水平。复苏脑胶质瘤细胞U251，分为对照组和miR-490-3p组，分别采用脂质体转染对照miRNA和miR-490-3p至U251细胞，转染48 h后，采用细胞计数试剂(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖能力；体外异体成瘤实验分析两组细胞体内增殖能力；划痕实验和Transwell实验分析两组细胞的迁移和侵袭能力；双荧光素酶报告基因分析miR-490-3p的靶基因，采用蛋白质免疫印迹分析miR-490-3的表达水平。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:脑胶质瘤组织中miR-490-3p水平(0.55±0.11)明显低于癌旁组织(1.18±0.25)，差异有统计学意义( t＝20.050， P<0.05)。对照组细胞CCK-8吸光度值、EdU染色阳性率和肿瘤体积[1.93±0.08、(90.66±4.69)%、(1 085.27±118.17) mm 3]明显高于miR-490-3p组[1.47±0.11、(64.12±6.56)%、(685.20±57.28) mm 3]，差异有统计学意义( t＝10.120、10.410、9.634， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率和迁移细胞数量[(80.26±5.51)%、(136.60±10.50)个]明显高于miR-490-3p组[(55.81±6.64)%、(99.50±10.42)个]，差异有统计学意义( t＝8.958、7.932， P<0.05)。高迁移率族蛋白A2(HMGA2)/Wnt5a是miR-490-3p的靶基因。对照组细胞HMGA2和Wnt5a蛋白表达水平(1.12±0.14、1.21±0.12)明显高于miR-490-3p组(0.68±0.09、0.75±0.09)，差异有统计学意义( t＝8.441、10.120， P<0.05)。脑胶质瘤组织中HMGA2和Wnt5a蛋白表达水平(1.06±0.14、0.91±0.09)明显高于癌旁组织(1.65±0.18、2.18±0.25)，差异有统计学意义( t＝21.660、41.030， P<0.05)。 结论:miR-490-3p在脑胶质瘤组织中呈低表达，通过靶向调节HMGA2/Wnt5a表达水平，调控脑胶质瘤细胞增殖和迁移过程。

目的:探究微小RNA(miRNA，miR)-184通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路影响B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白1(BCL2L1)参与骨肉瘤细胞化疗耐药性的机制。方法:选用骨肉瘤细胞株MG63，采用聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)等方法检测其中miR-184表达水平以及JAK2/STAT3、BCL2L1蛋白表达；转染miR-184模拟物、抑制物序列，观察对MG63、顺铂培养下的MG63(DPP-MG63)的影响，另将JAK2/STAT3通路抑制剂AG490与细胞一起培养，观察细胞变化。采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析及组内两两比较LSD- t检验进行统计学分析。 结果:miR-184在骨肉瘤细胞中降低( t＝9.074， P<0.05)，在过表达miR-184后骨肉瘤细胞的增殖、侵袭能力减弱，凋亡率升高( F＝13.810、57.090、59.660， P<0.05)，且其中JAK2/STAT3通路的蛋白表达、BCL2L1蛋白(0.92±0.04)均被抑制，细胞耐药性降低( F＝186.200、252.900、211.600、156.200、176.500， P<0.05)，而抑制miR-184则反之。同样，在经AG490培养后，细胞的增殖、侵袭能力降低，耐药性降低，BCL2L1蛋白表达(0.84±0.05)则升高( F＝11.270、38.300、77.130， P<0.05)。拯救实验显示，沉默miR-184后的细胞再与AG490进行培养，细胞生物学行为、耐药性与MG63、DPP-MG63细胞比较差异均无统计学意义( t＝0.612、0.059、0.050、0.612， P>0.05)。 结论:miR-184通过激活JAK2/STAT3信号通路，抑制BCL2L1的表达，促进骨肉瘤细胞的生长，并降低耐药性。

目的:探讨环状RNA(circRNA，Circ)_101237调控肝癌细胞进展的分子机制。方法:将新乡医学院第一附属医院2019年7月至2021年7月行手术切除的肝癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肝癌组织Circ_101237表达水平。采用sh-Con和sh-Circ_101237慢病毒感染人肝癌细胞系MHCC97H，建立sh-Con组和sh-Circ_101237组细胞系，细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分析Circ_101237对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。双荧光素酶报告实验分析Circ_101237的靶基因。组间数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中Circ_101237表达水平(1.01±0.18)明显低于肝癌组织Circ_101237表达水平(2.09±0.26)，差异有统计学意义( t＝30.560， P<0.05)。sh-Con组细胞吸光度值( A)、细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.97±0.09)，(164.67±14.40)个，(62.50±5.51)%，(130.83±25.18)个]明显高于sh-Circ_101237组细胞 A值\细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.33±0.18)，(111.33±9.07)个；(28.63±6.84)%，(92.33±14.05)个]，差异有统计学意义( t＝7.782、7.675、9.444、3.270， P<0.05)。Circ_101237与miR-490-3p存在连续互补结合位点。sh-Con组细胞miR-490-3p表达水平(0.99±0.14)明显低于sh-Circ_101237组细胞miR-490-3p表达水平(2.17±0.24)，差异有统计学意义( t＝10.280， P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞 A值(1.01±0.13)明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞 A值(1.60±0.09)，差异有统计学意义( t＝9.143， P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞划痕愈合率[(27.41±5.15)%]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组划痕愈合率[(49.19±7.81)%]，差异有统计学意义( t＝5.703， P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(90.83±9.87)个]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(122.33±11.09)个]，差异有统计学意义( t＝5.197， P<0.05)。 结论:Circ_101237在肝癌组织中呈高表达，通过miR-490-3p调节着肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性细胞生物学行为。

目的:观察微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胰腺癌的增殖、迁移、侵袭、凋亡的调控作用。方法:选取AsPC-1和SW1990胰腺癌细胞株[均购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)细胞库]作为研究对象。将miR-490-3p模拟物(75 pmol)转染至胰腺癌细胞株AsPC-1和SW1990中，分别构建miR-490-3p过表达组，空载体作为阴性对照组，48 h后，利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-490-3p的表达，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测miR-490-3p对细胞增殖的作用，细胞划痕实验检测细胞的迁移能力，Transwell实验检测细胞的侵袭能力，原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测细胞的凋亡能力。此研究时限为4个月。组间数据比较采用独立样本 t检验。 结果:miR-490-3p在胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞中相对表达低于正常胰腺细胞(0.58±0.06、0.40±0.20比1.00±0.11， t＝5.886、4.656， P<0.01)；转染miR-490-3p模拟物后，胰腺癌AsPC-1和SW1990细胞内miR-490-3p相对表达量明显升高(2 173 099.24±385 195.63、1 842 351.45±498 269.21， t＝9.771、6.404， P<0.01)，差异有统计学意义。过表达miR-490-3p后，CCK-8实验结果显示，明显降低AsPC-1和SW1990细胞的增殖(1.63±0.06比2.13±0.02， t＝3.333， P<0.05；1.09±0.04比1.63±0.03， t＝3.119， P<0.05)，差异有统计学意义；划痕实验结果显示，明显抑制AsPC-1和SW1990细胞迁移对照组[(48.16±6.17) μm比(18.34±3.26) μm， t＝9.564， P<0.01；(48.49±6.98) μm比(23.02±3.26) μm， t＝7.390， P<0.01]，差异有统计学意义；Transwell细胞侵袭实验显示，明显抑制AsPC-1和SW1990细胞侵袭[(36.00±2.45)个比(15.33±2.94)个， t＝13.220， P<0.01；(99.00±15.67)个比(46.17±11.07)个， t＝6.745， P<0.01]，差异有统计学意义；TUNEL细胞凋亡实验结果显示，(17.75±1.71比6.75±4.03， t＝5.025， P<0.01；23.25±3.40比10.25±2.63， t＝6.045， P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:过表达miR-490-3p后抑制AsPC-1和SW1990细胞株的增殖、迁移、侵袭能力，促进细胞凋亡的作用。

目的:构建基于微小RNA(miRNA，miR)表达量的肺腺癌预后列线图风险模型，研究其对肺腺癌患者生存的预测价值。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载获取肺腺癌miRNA表达数据，包括miRNAseq和临床数据。应用R 3.6.2软件中的edgeR包筛选肺腺癌组织和正常肺组织的差异基因，以│logFC│>2， P<0.05为筛选条件。应用单因素回归分析、LASSO回归分析、多因素Cox回归分析筛选与预后明显相关的miRNAs，建立风险评分(risk score)方程，构建列线图模型。应用内部验证法和图像校准法、受试者工作特征曲线(ROC)评价模型的特异性和敏感性。通过风险评分及生存曲线对患者进行生存分析。分析miRNAs在各种族表达差异。 结果:识别127个差异miRNA，下调16个，上调111个。单因素回归分析得到14个与预后相关的miRNAs，LASSO回归分析得到13个与预后相关的miRNAs( P<0.05)。多因素回归分析结果显示hsa-miR-1293、hsa-miR-450a-1、hsa-miR-5571、hsa-miR-3189、hsa-miR-490、hsa-miR-142、hsa-miR-31、hsa-miR-548v是显著的预测因素( P<0.05)。应用这8个miRNA构建列线图模型，Concordance值(0.701)及图像校准显示该列线图预测能力较好。1、3、5年曲线下面积(AUC)为0.721、0.748、0.733。生存分析结果显示高风险组较低风险组生存率低( P<0.05)，随着风险评分数值的升高，死亡人数增多。KM生存曲线显示hsa-miR-1293、hsa-miR-5571、hsa-miR-490、hsa-miR-142、hsa-miR-31、hsa-miR-548v与肺腺癌生存预后相关( P<0.05)。另外这8个miRNAs表达种族差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:成功构建基于miRNAs表达预测肺腺癌预后的列线图模型，其预测准确性较高。

目的:探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)调节微小核糖核酸(miR)-424-5p/磷酸丝氨酸氨基转移酶1(PSAT1)轴对乳腺癌恶性进展的影响.方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20中LncRNA MCM3AP-AS1、miR-424-5p和PS AT1信使核糖核酸(mRNA)的表达水平.构建LncRNA MCM3AP-AS1低表达模型、miR-424-5p敲低与过表达模型,并使用RT-qPCR方法验证转染模型构建的成功.分别采用四氮甲基唑蓝(MTT)法、Transwell实验检测乳腺癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力.免疫印迹法检测各组MDA-MB-231细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和PS AT1蛋白的表达.经生物信息学分析后,采用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫共沉淀(RIP)实验分别验证LncRNA MCM3AP-AS1与miR-424-5p、miR-424-5p与PSAT1之间的靶向关系.结果:在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20 中 MCM3AP-AS1、PSAT1 mRNA 的表达水平显著高于 MCF-10A(P＜0.05),miR-424-5p 表达水平显著低于MCF-10A(P＜0.05).敲低MCM3AP-AS1或过表达miR-424-5p均可以降低MDA-MB-231细胞的吸光度(OD490)值、细胞迁移数目和细胞侵袭数目、CyclinD1、N-cadherin和PS AT1蛋白表达水平(P＜0.05),提高细胞E-cadherin蛋白表达水平(P＜0.05).敲低miR-424-5p的表达逆转了下调MCM3AP-AS1对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭以及相关蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实MCM3AP-AS1靶向负调控miR-424-5p表达,miR-424-5p靶向负调控PSAT1的表达.结论:LncR-NA MCM3AP-AS1在乳腺癌中呈高表达,其低表达可通过靶向调节miR-424-5p/PSAT1轴抑制乳腺癌的恶性进展.

本研究主要观察微小RNA-126-3p(miR-126)的差异性表达对人皮肤黑色素瘤(CM)细胞株C8161的迁移、侵袭性的影响,并探究了Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路和上皮-间质转化(EMT)过程在其中的角色.采用细胞转染法实现miR-126的差异性表达,用JAK2/STAT3通路抑制剂AG490、激动剂Coumermycin A1处理miR-126差异表达的细胞,并将C8161细胞分为对照组(不做转染,不做药物处理)、阴性对照(NC)组(转染模拟物对照,不做药物处理)、miR-126组(转染miR-126模拟物,不做药物处理)、miR-126+通路抑制剂组(转染miR-126模拟物后AG490处理)和miR-126+通路激动剂组(转染miR-126模拟物后Coumermycin A1处理).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126的表达水平;利用蛋白免疫印迹法测定EMT关键蛋白和JAK2/STAT3通路蛋白的表达水平;利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、划痕愈合试验、Transwell小室联合基质胶法分别检测细胞的活力、迁移和侵袭能力.与NC组相比,miR-126模拟物转染使miR-126的表达水平在miR-126组显著提高(#P<0.05),与此同时,相对细胞活力、细胞迁移率和细胞侵袭数均显著降低(#P<0.05).此外,miR-126组的上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)高于NC组(#P<0.05),而波形蛋白(vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(FN)、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的比值均低于NC组(#P<0.05).更重要的是,与NC组和miR-126组相比,JAK2和STAT3蛋白的表达水平的上述指标在miR-126+通路抑制剂组中的变化更显著(#P<0.05和&P<0.05),而上述指标在miR-126+通路激活剂组中的变化趋势减弱(#P<0.05和&P<0.05),其中细胞侵袭数和FN、JAK2、STAT3蛋白的表达水平在miR-126+通路激动剂组和NC组之间无显著差异.过表达miR-126抑制人CM细胞的活力、迁移和侵袭能力,而该作用很可能是通过阻碍EMT进程、抑制JAK2/STAT3通路的活化来实现的.这些研究结果有助于为人CM的临床治疗提供新的理论依据,为其治疗方法提供新的策略.

目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制.方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC细胞)、结直肠癌细胞系(LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞),用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达.将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组(miR-199mimics+TFR1组),分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内;另取部分未转染细胞作为空白对照组.实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达,MTT实验检测细胞增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测TFR1蛋白表达,生物学软件Tar-getScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因.结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系(P均<0.05),且SW620细胞中miR-199相对表达量最低,故选SW620细胞为实验细胞.miR-199过表达组miR-199相对表达量高于阴性对照组、空白对照组;转染48、72 h,miR-199过表达组A490值低于阴性对照组、空白对照组(P均<0.05);miR-199过表达组侵袭细胞数少于阴性对照组、空白对照组(P均<0.05).TFR1为miR-199潜在的预测靶基因,TFR1存在与miR-199结合的位点,TFR1 mRNA的3'UTR中存在与miR-199互补的序列.空白对照组、miR-199过表达组野生型3'UTR 的TFR1萤光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),突变型3'UTR的TFR1萤光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-199过表达组TFR1 mRNA和蛋白表达均低于空白对照组、阴性对照组(P均<0.05).miR-199过表达组A490 值低于阴性对照组、空白对照组、miR-199mimics+ TFR1组(P均<0.05),侵袭细胞数少于阴性对照组、空白对照组、miR-199mimics+TFR1组(P均<0.05).结论 miR-199可抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭,其机制可能与靶向下调TFR1表达有关.

我们取结肠癌细胞(SW480)为研究对象,观察微小RNA(miRNA,miR)-490-3p对其生物学行为的影响.一、材料与方法1.材料:人结肠癌细胞株SW480、Leibovitz L-15培养基、胎牛血清(FBS)、青-链霉素、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂、Sequence 5'-CAACCTGGAGGACTCCATGCTG-3'、Lipofectamine 2000转染试剂、Martigel基底膜胶、Transwell板、辣根过氧化物酶标记二抗等.