目的:探讨微小RNA-499（miR-499）调节α型和β型肌球蛋白重链（α-MHC、β-MHC）基因轴在脓毒症心功能障碍（SMD）中的作用机制及意义。方法:将60只健康成年雄性SD大鼠按随机数字法分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS组）、脂多糖（LPS）致SMD模型组（LPS组）、miR-499激动剂预处理组（agomir+LPS组）和miR-499抑制剂预处理组（antagomir+LPS组），每组15只。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg制备SMD大鼠模型；PBS组腹腔注射等量PBS。两个预处理组分别于制模前连续3 d经尾静脉注射agomir 30 mg/kg或antagomir 80 mg/kg，每日1次；PBS组和LPS组不给予预处理。注射LPS 5 h后检测超声心动图，并记录相关指标；在注射LPS 6 h后取左心房血和心肌组织，采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测血浆和心肌组织中miR-499的表达量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测心肌组织中α-MHC、β-MHC的蛋白表达；采用电化学发光仪测定血浆心力衰竭标志物N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平。结果:与PBS组比较，LPS刺激后大鼠出现精神萎靡，血浆和心肌组织中miR-499表达下调，且心肌组织中α-MHC表达显著下调、β-MHC表达显著上调，超声心动图结果显示左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、心排血量（CO）、每搏量（SV）和心率（HR）分别下降了49.1%、59.2%、48.8%、39.4%、15.9%，且血浆NT-proBNP水平显著升高，表明LPS能诱导大鼠心功能障碍。与LPS组相比，给予agomir预处理过表达miR-499后，超声心动图显示大鼠心功能改善，表现为LVEF、LVFS显著升高〔LVEF：0.662±0.020比0.323±0.024，LVFS：（36.16±1.43）%比（20.20±1.32）%，均 P<0.01〕；同时大鼠心肌组织中β-MHC/α-MHC失调被逆转，β-MHC蛋白表达显著下调（β-MHC/GAPDH：0.74±0.04比2.97±0.34， P<0.01），α-MHC的蛋白表达显著上调（α-MHC/GAPDH：1.59±0.05比0.74±0.14， P<0.01），且血浆NT-proBNP水平明显下降（ng/L：114.49±6.85比334.13±4.36， P<0.01）。而给予antagomir预处理抑制miR-499表达后，超声心动图显示大鼠心功能被显著抑制，表现为LVEF、LVFS较LPS组显著下降〔LVEF：0.297±0.021比0.323±0.024，LVFS：（19.38±1.52）%比（21.20±1.32）%，均 P<0.01〕；同时大鼠心肌组织中α-MHC蛋白表达显著下调（α-MHC/GAPDH：0.63±0.03比0.74±0.14， P<0.01），β-MHC蛋白表达显著上调（β-MHC/GAPDH：3.03±0.47比2.97±0.34， P<0.01），且血浆NT-proBNP水平明显升高（ng/L：373.91±4.23比334.13±4.36， P<0.05）。 结论:miR-499能通过调节SMD大鼠心肌组织中α-MHC、β-MHC的表达水平，改善脓毒症引起的心功能障碍；靶向调节miR-499的表达可能成为治疗SMD的有效途径。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela，命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力；采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14)，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值水平(2.23±0.15)明显高于miR-499-5p KD组(1.45±0.08)，差异有统计学意义( t＝11.150， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(80.97±3.36)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.99±9.87)%]，差异有统计学意义( t＝5.396， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(87.24±3.87)%]明显高于miR-499-5p KD组[(67.38±2.51)%]，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)表达水平(1.36±0.10)明显高于miR-499-5p KD组(0.92±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.218， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(73.37±4.01)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.21±2.29)%]，差异有统计学意义( t＝7.637， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(106.83±8.95)个]明显高于miR-499-5p KD组[(81.17±7.49)个]，差异有统计学意义( t＝5.384， P<0.05)。对照组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(1.16±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.67±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.409， P<0.05)。CYLD是miR-499-5p靶基因。对照组细胞CYLD蛋白表达水平(0.98±0.08)明显低于miR-499-5p KD组(1.59±0.06)，差异有统计学意义( t＝15.500， P<0.05)。癌旁组织CYLD蛋白表达水平(1.36±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.74±0.10)，差异有统计学意义( t＝19.310， P<0.05)。 结论:miR-499-5p在宫颈癌组织中高表达，主要靶向调控CYLD表达参与宫颈癌细胞的增殖和侵袭过程。

目的:探讨血清微小RNA(miR)-146a、miR-499与冠心病患者非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCABG)后新发房颤的关系。方法:选取郑州大学第一附属医院2019年8月至2021年8月收治的118例冠心病患者作为研究对象，所有患者均行OPCABG术治疗，术后接受为期7 d观察，将观察期间发生房颤患者纳入发生组，未发生房颤患者纳入未发生组。入院次日检测患者血清miR-146a、miR-499水平，询问并记录两组一般资料，采用独立样本 t检验和Logistics回归分析血清miR-146a、miR-499与冠心病患者OPCABG术后新发房颤的关系，两组间比较以独立样本 t检验。 结果:纳入的118例冠心病患者，OPCABG术后发生房颤28例，占23.73%；初步比较两组一般资料及实验室指标后，将符合条件的变量纳入，经Logistics回归分析显示，发生组血清miR-146a、miR-499水平均高于未发生组(1.36±0.18比1.24±0.16、2.13±0.22比1.95±0.18)，差异有统计学意义( t＝3.439、4.487， P<0.05)；绘制受试者工作特征(ROC)曲线图显示，血清miR-146a、miR-499单独及联合预测冠心病患者OPCABG术后发生房颤的曲线下面积(AUC)分别为0.788、0.815、0.860，均有一定预测价值。 结论:血清miR-146a、miR-499过表达与冠心病患者OPCABG术后发生房颤有关，术前检测两者水平有助于预测术后房颤发生风险。

目的:探讨海风藤提取物(KPSE)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用IL-1β处理大鼠软骨细胞建立软骨细胞损伤模型。0.1、1.0、10.0 mg/ml浓度KPSE与10 ng/ml IL-1β处理细胞(分别记为KPSE-L+IL-1β组、KPSE-M+IL-1β组、KPSE-H+IL-1β组)。将anti-miR-con、anti-miR-499a、miR-con、miR-499a mimics转染至软骨细胞并加入10 ng/ml的IL-1β培养(分别记为IL-1β+anti-miR-con组、IL-1β+anti-miR-499a组、IL-1β+miR-con组、IL-1β+miR-499a组)。分别将anti-miR-NC、anti-miR-499a转染至软骨细胞后加入10 mg/ml的KPSE及10 ng/ml的IL-1β培养(分别标记为anti-miR-NC+KPSE-H+IL-1β组、anti-miR-499a+KPSE-H+IL-1β组)。噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测细胞活力，酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6表达，蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved-Caspase-3)表达，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测微小核糖核酸-499a(miR-499a)表达。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK- q检验。 结果:KPSE+L+IL-1β组、KPSE+M+IL-1β组、KPSE+H+IL-1β组细胞吸光度值显著高于IL-1β组(0.50±0.05、0.73±0.07、0.79±0.08比0.38±0.03)，cleaved-Caspase-3表达(0.71±0.07、0.57±0.05、0.48±0.04比0.83±0.08)、细胞凋亡率[(22.43±2.17)%、(16.38±1.54)%、(9.85±0.91)%比(27.86±2.61)%]、TNF-α[(61.02±6.23)、(40.56±3.57)、(30.15±2.86) pg/ml比(86.37±8.12) pg/ml]、IL-1β[(516.76±41.05)、(362.45±32.87)、(214.59±20.54) pg/ml比(637.15±53.32) pg/ml]和IL-6表达[(531.52±51.68)、(418.36±40.53)、(246.28±21.08) pg/ml比(584.11±55.05) pg/ml]显著低于IL-1β组，差异有统计学意义( F＝83.568、70.682、103.211、291.687、402.183、250.447， P<0.05)。KPSE+L+IL-1β组、KPSE+M+IL-1β组、KPSE+H+IL-1β组细胞miR-499a表达显著高于IL-1β组(0.53±0.05、0.78±0.07、0.93±0.09比0.34±0.03)，差异有统计学意义( F＝130.619， P<0.05)。IL-1β+miR-499a组细胞吸光度值显著高于IL-1β+miR-con组(0.78±0.06比0.37±0.02)，cleaved-Caspase-3表达(0.37±0.03比0.82±0.09)、细胞凋亡率[(11.56±1.04)%比(26.91±2.45)%]、TNF-α[(43.05±4.06) pg/ml比(85.61±8.17) pg/ml]、IL-1β[(317.81±27.54) pg/ml比(637.01±58.68) pg/ml]、IL-6表达[(264.59±24.13) pg/ml比(578.30±51.04) pg/ml]显著低于IL-1β+miR-con组，差异有统计学意义( t＝24.431、14.653、20.178、12.297、10.563、17.138， P<0.05)。anti-miR-499a+KPSE+H+IL-1β组细胞吸光度值显著低于anti-miR-NC+KPSE+H+IL-1β组(0.38±0.04比0.78±0.06)，cleaved-Caspase-3表达(0.78±0.07比0.46±0.04)、细胞凋亡率[(19.63±1.52)%比(10.23±1.01)%]、TNF-α[(63.22±6.24) pg/ml比(32.57±3.16) pg/ml]、IL-1β[(456.97±43.81) pg/ml比(204.61±18.26) pg/ml]、IL-6表达[(398.74±34.12) pg/ml比(257.19±22.41) pg/ml]显著高于IL-1β+miR-con组，差异有统计学意义( t＝16.133、12.041、17.599、13.431、15.125、25.022， P<0.05)。 结论:KPSE可降低IL-1β诱导的软骨细胞损伤，其机制可能与上调miR-499a表达有关。

目的:探讨叉头蛋白M1反义长链非编码RNA(LncRNA FOXM1-AS)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)炎症因子表达和上皮-间质转化(EMT)的影响，并研究其潜在机制。方法:本研究为实验研究。培养BEAS-2B，采用随机数字表法分成对照组，CSE组(2.5% CSE处理)、siNC+CSE组(转染siNC，给予2.5% CSE处理)、siFOXM1-AS+CSE组(转染siFOXM1-AS，给予2.5% CSE处理)；通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法、酶联免疫吸附试验法和蛋白质印迹法检测各组FOXM1-AS、IL-6、TNF-α、E-cadherin、Vimentin基因表达水平和IL-6、TNF-α水平以及SOX6蛋白表达；利用生物信息学软件miRcode预测FOXM1-AS的潜在靶基因(miR-499a-5p)，荧光素酶报告基因实验鉴定二者的靶向关系。结果:与对照组比较，CSE组细胞中FOXM1-AS的表达水平显著增加(1.06±0.08比2.89±0.31， P<0.01)。利用siFOXM1-AS沉默FOXM1-AS后，明显抑制了CSE诱导的细胞炎症因子IL-6(2.63±0.34比1.39±0.23， P<0.01)、TNF-α(2.58±0.23比1.35±0.20， P<0.01)的表达，细胞EMT进程中，E-cadherin基因表达水平增加(0.35±0.10比0.92±0.08， P<0.01)，而Vimentin基因表达水平减少(2.37±0.28比1.41±0.20， P<0.01)。此外，FOXM1-AS通过靶向结合miR-499a-5p调控SOX6表达。miR-499a-5p抑制剂可逆转siFOXM1-AS对CSE诱导的细胞炎症因子表达及EMT的作用。 结论:下调FOXM1-AS靶向miR-499a-5p可抑制CSE诱导的BEAS-2B细胞炎症因子表达和EMT。

目的 探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系.方法 选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例).根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例).以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例).另外,选取同期体检健康者151例为健康组.分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能.结果 轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P＜0.05).预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P＜0.05).脓毒症并发AI.I患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P＜0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P＜0.05).miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关.miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估.

目的 观察冠状动脉再灌注治疗对急性心肌梗死(AMI)患者血浆外泌体微小RNA(miRNA,miR)差异表达的影响.方法 选取2022年10月至11月于深圳市龙岗区第三人民医院确诊的3例老年男性AMI患者,进行冠状动脉再灌注治疗,留取患者入院时、术后2 h和术后24 h静脉血,应用miRNA测序技术筛选3例患者血浆外泌体中共同差异表达miRNA后,对其靶基因进行生信分析,利用定量聚合酶链反应验证其中差异表达的miR-499a-5p.结果 与入院时比较,术后2 h血浆外泌体miRNA有418个上调和406个下调,术后24 h血浆外泌体miRNA有320个上调和225个下调(P＜0.05);与术后2 h比较,术后24 h血浆外泌体miRNA有344个上调和350个下调(P＜0.05).Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes富集分析显示,差异表达的miRNA富集在磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B、缺氧诱导因子1和血管平滑肌收缩等通路.Gene Ontology富集分析显示,差异表达的miRNA靶基因分子功能方面主要富集于蛋白结合和DNA结合;细胞组分方面主要富集于细胞膜和细胞质;生物学过程方面主要富集于信号转导和DNA模板转录.术后2 h miR-499a-5p水平显著低于入院时[(0.577±0.020)vs(1.000± 0.023),P＜0.05],术后 24 h miR-499a-5p 水平显著低于术后 2 h[(0.068±0.006)vs(0.577±0.020),P＜0.05].结论 血浆外泌体miRNA可作为早期诊断老年AMI患者和预测冠状动脉再灌注治疗效果的生物标志物.

目的:分析表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA(miR)-499、miR-144-3p 变化,并评估其对预后的预测价值.方法:收集2018 年 1 月至 2020 年我院收治的 107 例 EGFR/ALK 野生型晚期 NSCLC 患者临床资料(NSCLC组),另取同期健康体检者107 例作为对照组,采用实时荧光RCR技术检测血清miR-499、miR-144-3p表达,比较其在两组中的差异,并评估不同临床病理特征晚期 NSCLC 患者血清 miR-499、miR-144-3p表达的变化;以出院时为随访起点,2023 年 1 月为截止时间,死亡为终点事件,以大于等于平均值作为高表达的标准,分别比较miR-499、miR-144-3p 高表达与低表达的晚期 NSCLC 患者预后生存率.结果:NSCLC组血清miR-499[(0.74±0.18)vs(1.05±0.20)]、miR-144-3p 相对表达量[(0.82±0.19)vs(1.22±0.21)]均低于对照组(P＜0.05).晚期NSCLC患者中,Ⅳ期患者血清miR-499[(0.64±0.17)vs(0.86±0.21)]、miR-144-3p 相对表达量[(0.71±0.16)vs(0.95±0.22)]低于ⅢB 及ⅢC 期者(P＜0.05),低分化者则低于中高分化者[(0.63±0.16)vs(0.85±0.21),(0.70±0.15)vs(0.94±0.22),P＜0.05].晚期NSCLC患者随访时间为4～56 个月,中位随访时间 34 个月,血清 miR-499 高表达者生存率明显高于低表达者(P＜0.05),血清miR-144-3p高表达者生存率明显高于低表达者(P＜0.05).结论:miR-499、miR-144-3p在EGFR/ALK野生型晚期 NSCLC 患者血清中呈低表达,Ⅳ期及低分化者表达更低,且表达水平对预后生存率有一定预测价值.

目的:探讨ABCG2及microRNA基因多态性与鼻咽癌易感性的关系.方法:2019年01月至2023年01月间我院肿瘤科住院的102例鼻咽癌患者作为研究对象,通过收集相关临床资料、采集鼻咽癌患者及健康人外周血并进行ABCG2基因、hsa-miR-499及hsa-miR-608基因多态性分析.结果:miR499:rs3746444(T→C)和miR608:rs4919510(C→G)在研究组和对照组之间存在差异(P＜0.05).通过风险因素分析,证实以rs3746444TT对照,rs3746444C变异基因型(TC+CC)个体发生鼻咽癌的危险增加45％(OR=1.45,95％CI=1.05～1.78),携带miR608:rs4919510(C→G)GC+GG的基因发生鼻咽癌是携带CC基因的1.53倍,(OR=1.53,95％CI=1.02～2.26);总和分析ABCG2 G34A基因GA+AA在鼻咽癌组的分布频率为57.84％,与对照组相比(32.00％)明显增高(OR=1.20,95％CI:1.02～1.42).如果等位基因由G突变为A,发病风险亦明显提高(OR=1.18,95％CI:1.03～1.35);ABCG2 C421A等位基因由C突变为A,鼻咽癌发病风险亦明显增高(OR=1.12,95％CI:1.02～1.29).ABCG2 G34A、ABCG2 C421A使鼻咽癌发病风险明显增高;2年患者生存率91.18％(93/102),患者性别、年龄、分化程度、吸烟、饮酒、EBV病毒感染及家族遗传史无差异(P＞0.05),与TNM分期、淋巴结转移、ABCG2 G34A、ABCG2 C421A、miR499:rs3746444(T→C)及miR608:rs4919510(C→G)存在差异(P＜0.05);miR499+G34A+C421A+miR608对鼻咽癌诊断价值最高.结论:ABCG2、miR499及miR608多态性与鼻咽癌易感性相关,影响患者预后,对鼻咽癌有一定的诊断价值.

目的 探讨血清微小RNA-499(miR-499)、可溶性fms样酪氨酸激酶1(sFlt-1)、血小板微颗粒(PMP)对老年急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者PCI术后院内康复期间主要不良心脏事件(MACE)的预测效能.方法 选取2019年3月至2022年6月南阳市第一人民医院心血管内科住院的STEMI患者106例,根据PCI术后院内康复期间发生MACE情况分为MACE组21例和对照组85例.比较2组PCI术前、术后即刻血清miR-499、sFlt-1、PMP水平及TIMI血流分级,分析各血清指标与TIMI血流分级的相关性,评价各血清指标对MACE的预测效能.结果 MACE组发病至入院时间、Gensini评分、KillipⅣ级比例明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).2组PCI术后即刻血清miR-499、sFlt-1、PMP水平明显低于PCI术前(P＜0.01);MACE组PCI术前和术后即刻血清miR-499、sFlt-1、PMP水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).MACE组PCI术前、术后即刻TIMI血流分级状况明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman相关性分析显示,PCI术前和术后即刻血清 miR-499、sFlt-1、PMP 水平与 TIMI 血流分级呈负相关(r=-0.510,r=-0.558,r=-0.486,P＜0.01;r=-0.603,r=-0.572,r=-0.615,P＜0.01).ROC 曲线分析显示,PCI 术前和术后即刻血清 miR-499、sFlt-1、PMP联合预测MACE的曲线下面积高于miR-499、sFlt-1、PMP单一指标预测.结论 血清miR-499、sFlt-1、PMP可作为预测老年STEMI患者PCI术后院内康复期间MACE的重要指标,PCI术后即刻联合检测预测效能更为可靠.