目的:探讨去泛素化酶（CYLD）在小鼠心肌细胞衰老中的作用及机制。方法:选取野生型FVB（WT）小鼠和CYLD过表达（CYLD +/+）小鼠构建自然衰老模型。2月龄雄性WT小鼠（WT-2M， n=10）和CYLD +/+小鼠（CYLD-2M， n=10）作为年轻组，普通饲养17.5月（WT-17.5M，CYLD-17.5M， n=10）作为年老组。小动物超声检测心功能[左室短轴缩短率（LVFS）、左室射血分数（LVEF）]，蛋白免疫印迹检测心肌组织衰老相关蛋白p53、p21、p16表达水平，实时荧光定量PCR（qPCR）检测心肌组织衰老相关分泌表型（SASP） [细胞因子白介素-1β（IL-1β）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、趋化因子CXCL1（CXCL1）]转录水平。转录组测序检测CYLD调控心肌细胞衰老的信号通路，对肿瘤坏死因子α（TNF-α）通路行qPCR验证。 结果:与WT-17.5M小鼠比较，CYLD-17.5M小鼠心功能LVEF和LVFS值增高（均 P<0.05）；p53、p21、p16蛋白表达水平减低（均 P<0.05），IL1B、MMP3、CXCL1转录水平也下降（均 P<0.05）。与WT-2M小鼠比较，WT-17.5M小鼠p53、p21、p16蛋白表达明显升高（均 P<0.01），IL1B、MMP3及CXCL1转录水平上调（均 P<0.01）。转录组测序发现WT-17.5M小鼠较WT-2M小鼠表达上调的信号通路64个，CYLD-17.5M小鼠较WT-17.5M小鼠表达下调的信号通路37个，二者共有的差异信号通路29个。选取TNF-α通路行qPCR验证，WT-17.5M较WT-2M小鼠TNF-α转录水平明显上调（ P<0.05），且高于CYLD-17.5M小鼠（ P<0.05）。 结论:CYLD对心肌自然衰老起保护作用，TNF-α通路介导可能是CYLD保护心肌衰老的作用机制之一。

目的:探讨圆柱瘤基因(CYLD)在非小细胞肺癌中的表达及其对增殖和转移特性的影响。方法:选取2021年6月到2023年12月阜外华中心血管病医院、河南省人民医院和郑州大学人民医院收治的93例非小细胞肺癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析组织中CYLD mRNA表达水平；采用对照慢病毒和CYLD过表达慢病毒感染人非小细胞肺癌H1299细胞系，建立对照组和CYLD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、EdU和体外移植瘤分析CYLD对细胞增殖的影响；采用划痕实验、Transwell实验和体外移植瘤分析CYLD对非小细胞肺癌的转移的影响。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析CYLD对细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)、c-MYC、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和活化因子蛋白1(AP1)蛋白表达水平的影响。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:癌旁组织CLYD蛋白表达水平(1.02±0.17)明显高于非小细胞肺癌组织(0.49±0.29)，差异有统计学意义( t＝15.300， P<0.05)。癌旁组织CLYD mRNA表达水平(1.52±0.23)明显高于非小细胞肺癌组织(0.68±0.12)，差异有统计学意义( t＝30.860， P<0.05)。对照组细胞活力[(86.84±6.05)%]明显高于GLYD组细胞[(57.95±3.79)%]，差异有统计学意义( t＝9.909， P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(82.97±5.65)%]明显高于GLYD组细胞[(49.95±9.43)%]，差异有统计学意义( t＝7.352， P<0.05)。对照组细胞成瘤体积[(919.09±61.86) mm 3]明显高于GLYD组细胞[(639.93±51.24) mm 3]，差异有统计学意义( t＝8.512， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.49±4.20)%]明显高于GLYD组细胞[(46.71±5.15)%]，差异有统计学意义( t＝13.560， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合数[(141.83±11.48)个]明显高于GLYD组细胞[(87.17±7.70)个]，差异有统计学意义( t＝9.686， P<0.05)。对照组细胞体内转移灶[(11.17±2.79)个]明显高于GLYD组细胞[(5.67±2.07)个]，差异有统计学意义( t＝3.884， P<0.05)。对照组细胞细胞Ki-67、c-MYC、Cyclin D1、JNK和AP1蛋白表达水平(0.95±0.10、1.20±0.06、0.93±0.06、1.48±0.09、1.31±0.08)明显高于GLYD组细胞(0.63±0.07、0.81±0.10、0.67±0.12、1.04±0.13、0.63±0.07)，差异有统计学意义( t＝6.612、9.613、4.657、6.724、15.770， P<0.05)。 结论:CYLD在非小细胞癌组织中呈低表达，过表达CYLD可抑制非小细胞肺癌的增殖和转移能力，主要与JNK1信号通路相关。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela，命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力；采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14)，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值水平(2.23±0.15)明显高于miR-499-5p KD组(1.45±0.08)，差异有统计学意义( t＝11.150， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(80.97±3.36)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.99±9.87)%]，差异有统计学意义( t＝5.396， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(87.24±3.87)%]明显高于miR-499-5p KD组[(67.38±2.51)%]，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)表达水平(1.36±0.10)明显高于miR-499-5p KD组(0.92±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.218， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(73.37±4.01)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.21±2.29)%]，差异有统计学意义( t＝7.637， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(106.83±8.95)个]明显高于miR-499-5p KD组[(81.17±7.49)个]，差异有统计学意义( t＝5.384， P<0.05)。对照组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(1.16±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.67±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.409， P<0.05)。CYLD是miR-499-5p靶基因。对照组细胞CYLD蛋白表达水平(0.98±0.08)明显低于miR-499-5p KD组(1.59±0.06)，差异有统计学意义( t＝15.500， P<0.05)。癌旁组织CYLD蛋白表达水平(1.36±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.74±0.10)，差异有统计学意义( t＝19.310， P<0.05)。 结论:miR-499-5p在宫颈癌组织中高表达，主要靶向调控CYLD表达参与宫颈癌细胞的增殖和侵袭过程。

目的 了解舌粘膜癌变中基因体甲基化的差异表达基因.方法 用浓度 50 mg/L的 4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)诱导C57BL/6 小鼠舌癌.基因芯片和甲基化DNA免疫沉淀测序(MeDIP-Seq)检测0 周、12 周、28 周(代表正常、癌前、癌变)的舌粘膜的基因表达和基因组DNA甲基化.在人正常舌粘膜和癌前病变组织中用qRT-PCR和飞行质谱检测泛素羧基水解酶CYLD的mRNA表达和基因体甲基化.结果 正常、癌前和舌癌3 组间基因体MeDIP-score(mean±s)分别是(5.58±14.80)、(5.79±13.35)、(5.83±17.25),差异无统计学意义(H=100.75,P>0.05).3 组间 145 个差异表达基因伴基因体甲基化改变.CYLD在人癌前病变组织中表达降低伴有基因体甲基化降低(P<0.05).结论 舌粘膜癌变有多个基因体甲基化异常的差异表达基因,CYLD在人癌前病变中低表达可能与基因体甲基化有关.

目的:研究肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD及miR-454在直肠癌患者中的表达水平.方法:2016年1～3月,21例直肠癌患者分别检测癌灶组织、癌病灶周围组织以及直肠正常组织中的肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD及miR-454表达水平,分析肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD与miR-454的相关性,探讨三者在直肠癌发生、发展中的作用.结果:癌组织、癌旁组织以及正常组织中的SEMA3F、CYLD与miR-454表达差异均具有统计学意义(P＜0.01).转移组患者癌组织中SEMA3F、CYLD均显著低于无转移组,miR-454显著高于无转移组(P＜0.01).高分化组CRC组织中SEMA3F、CYLD表达水平显著高于中低分化组,miR-454表达显著低于中低分化组(P＜0.01).肿瘤抑制因子CYLD与miR-454具有显著负相关性(r=-0.971,P＜0.01).肿瘤抑制因子SEMA3F与miR-454具有显著负相关性(r=-0.955,P＜0.01).结论:肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD在直肠癌早期可见高表达,随着病情进展表达水平逐渐下降;而miR-454则起到促进直肠癌细胞异常增殖及转移的作用,随着疾病进展表达水平逐渐升高,且与SEMA3F、CYLD均呈显著负相关;肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD及miR-454表达对于直肠癌的诊断及病情进展、预后的评估均具有重要的参考价值.

目的 探讨miR-181b通过下调CYLD蛋白影响甲状腺乳头状癌细胞的增殖和凋亡行为及其机制.方法 qPCR检测miR-181b在甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织中的表达情况及差异;Western blotting实验检测miR-181b与CYLD蛋白之间的调控作用;克隆形成实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞增殖能力的变化情况;流式细胞术实验检测抑制miR-181b后甲状腺癌细胞凋亡行为的变化情况.结果 与正常甲状腺组织相比,甲状腺乳头状癌组织中miR-181b的表达水平相对上调,差异具有统计学意义(P<0.05);在FTC-133细胞株中miR-181b的表达水平相对较高;Western blotting实验证实miR-181b能直接调控CYLD蛋白的表达水平;抑制miR-181b的表达后可以抑制甲状腺癌细胞的增殖行为,并在一定程度上促进其凋亡.结论 miR-181b可以调控CLYD的表达影响甲状腺癌细胞的增殖和凋亡行为.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-362-5p对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响及其调控机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测人胃癌细胞株和正常胃黏膜细胞中miR-362-5p的表达;采用脂质体瞬时转染技术转染miR-362-5p抑制物;噻唑蓝(MTT)法检测miR-362-5p对胃癌细胞株SGC-7901增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-362-5p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;利用Targetscan信息学预测软件预测miR-362-5p靶向调控Cylindrom-atosis (CYLD)基因,构建携带CYLD野生型及突变型3'非翻译区(3'UTR)野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测;Western blot检测miR-362-5p对CYLD蛋白表达的调控作用.结果 miR-362-5p在胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MKN28的表达水平分别为6.27±0.70、4.63±0.35、5.53±0.45,明显高于胃黏膜细胞(P =0.006、0.003、0.003).转染miR-362-5p抑制物后,胃癌细胞SGC-7901中miR-362-5p表达水平下降[miR-362-5p-IN组(0.41 ±0.07),miR-362-5pNC组(0.84±0.07),P=0.022].下调miR-362-5p后显著抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖[48 h(吸光度值):miR-362-5p-IN组:0.28±0.02,miR-362-5p NC组:0.45±0.04,P=0.028;72 h(吸光度值):miR-362-5p-IN组:0.33±0.02,miR-362-5p NC组:0.61±0.04,P=0.003];下调miR-362-5p后流式细胞术结果显示胃癌细胞G1/Go期比例增加[miR-362-5p-IN组:(78.04±3.74)％,miR-362-5pNC组:(67.86±3.35)％,P=0.017],凋亡增加[miR-362-5p-IN组:(33.29±4.86)％,miR-362-5pNC组:(18.20±0.80)％,P=0.040].双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是miR-362-5p的潜在靶基因.Western blot法检测结果显示CYLD蛋白水平与miR-362-5p表达呈负相关.结论 miR-362-5p可通过靶向负调控CYLD蛋白,促进胃癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡,进而促进胃癌的发生发展.

目的:研究CYLD蛋白在毛发上皮瘤、毛母细胞瘤和汗管瘤等皮肤附属器肿瘤中的分布、表达特征,探索皮肤附属器肿瘤的发病机理.方法:收集毛发上皮瘤、毛母细胞瘤和汗管瘤患者皮损,进行CYLD蛋白免疫组织化学染色,并通过IPP软件测定平均光密度值进行半定量分析.结果:毛发上皮瘤组、毛母细胞瘤组的平均光密度值均低于正常人毛囊对照组(P＜0.001),但毛发上皮瘤组和毛母细胞瘤组CYLD蛋白平均光密度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05).汗管瘤组的平均光密度值低于正常人汗腺对照组(P＜0.001).结论:CYLD蛋白表达于正常角质形成细胞(基底层和颗粒层为主)、毛囊、汗腺和皮脂腺的细胞质和细胞核周围区域;毛发上皮瘤、毛母细胞瘤、汗管瘤的肿瘤组织中CYLD蛋白表达水平均显著下降,提示这三种皮肤附属器肿瘤的致病机理可能与CYLD蛋白表达下调有关.

目的 研究miR-320a和头帕肿瘤综合征蛋白( CYLD)在胃癌患者中的表达及其与临床病理特征及预后的关系.方法 选取2013年3月—2014年11月在我院行肿瘤切除术的460例胃癌患者作为研究对象,分别收集患者肿瘤组织及癌旁非肿瘤胃粘膜组织,采用荧光定量PCR检测miR-320a和CYLD mRNA表达水平,采用免疫组织化学染色法检测CYLD蛋白表达,分析miR-320a和CYLD表达水平及其与临床病理特征及预后的关系.结果 miR-320a和CYLD mRNA在肿瘤组织中的相对表达量为(0. 37 ± 0. 09)、(0. 91 ± 0. 23),在癌旁非肿瘤组织中的相对表达量为(0. 86 ± 0. 15),(1. 56 ± 0.42),miR -320a 和 CYLD mRNA 在肿瘤组织中的相对表达量与非肿瘤组织比较,差异具有统计学意义(t =60. 078, 29. 113,P<0. 001);CYLD蛋白在肿瘤组织中的阳性表达率43. 48%与癌旁非肿瘤组织73. 91%比较,差异具有统计学意义(χ2=86. 624,P=0. 003);miR-320a表达水平与患者肿瘤直径和淋巴结转移有关(χ2=25. 859,13. 742,P<0. 05);YLD表达水平与患者TNM分期和肿瘤分化程度有关(χ2=37. 725,59. 323,P<0. 05). miR-320a低表达患者中位生存期(20. 36 ± 0. 56)(95% CI:19. 252~21. 462)与miR-320a高表达患者中位生存期(28. 29个月95% CI:27. 158~29. 412个月)比较,差异具有统计学意义(χ2=87. 967,P<0. 001);CYLD阴性表达患者中位生存期(17. 70个月95% CI:16. 599~18. 796个月)与CYLD阳性表达患者中位生存期(26. 74个月95% CI:25. 474~27. 997个月)比较,差异具有统计学意义( χ2=109. 887,P<0. 001);miR-320a和CYLD共表达患者中位生存期(29. 01个月95% CI:26. 831~28. 946个月)与非共表达患者中位生存期(17. 13个月95% CI:17. 214~19. 568个月)比较,差异具有统计学意义(χ2=117. 680,P<0. 001).肿瘤组织miR-320a与CYLD mRNA表达水平呈正相关(r=0. 607,P<0. 001);miR-320a低表达、CYLD阴性表达、TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度是影响胃癌患者预后的独立危险因素( HR=1. 939、2. 180、1. 561、1. 719、1. 608,95% CI:1. 141~3. 295,1. 252~3. 796,1. 014~2. 403,1. 115~2. 650,1. 097~2. 357,P<0. 05).结论 miR-320a和CYLD在胃癌患者肿瘤组织中表达量明显降低,与疾病发生发展及不良预后有关,是潜在的胃癌诊断及治疗新靶点.

目的 探究复方丹参注射液对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤(ALI)大鼠肺组织的改善作用,并探究其可能的作用机制.方法 将SD大鼠分为假手术组、模型组、复方丹参注射液(SM)低、中、高剂量组、地塞米松组,每组12只大鼠,HE染色观察胰腺、肺组织损伤情况;测量腹水量、肺组织干、湿质量;测定肺泡灌洗液(BAL)中中性粒细胞(PMN)数量以及动脉血中血气指标;蛋白免疫印迹(WB)、免疫组化法分析CYLD/NF-κB通路蛋白表达;酶联免疫吸附法检测BAL中炎性细胞因子水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠胰腺、肺组织病理评分、腹水量、胰腺、肺组织W/D、PMN、PaCO2、p-p65、p-IκBα蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA升高,PaO2、OI、CYLD蛋白表达、SOD水平降低(P＜0.05).与模型组相比,SM组、地塞米松组胰腺、肺组织病理评分、腹水量、胰腺、肺组织W/D 、PMN、PaCO2、p-p65、p-IκBα蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA均降低,PaO2、OI、CYLD蛋白表达、SOD水平均升高(P＜0.05).结论 复方丹参注射液可缓解SAP-ALI大鼠炎症损伤,可能与激活肺组织CYLD、抑制/NF-κB信号通路激活有关.