目的:探讨微小RNA-499（miR-499）调节α型和β型肌球蛋白重链（α-MHC、β-MHC）基因轴在脓毒症心功能障碍（SMD）中的作用机制及意义。方法:将60只健康成年雄性SD大鼠按随机数字法分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS组）、脂多糖（LPS）致SMD模型组（LPS组）、miR-499激动剂预处理组（agomir+LPS组）和miR-499抑制剂预处理组（antagomir+LPS组），每组15只。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg制备SMD大鼠模型；PBS组腹腔注射等量PBS。两个预处理组分别于制模前连续3 d经尾静脉注射agomir 30 mg/kg或antagomir 80 mg/kg，每日1次；PBS组和LPS组不给予预处理。注射LPS 5 h后检测超声心动图，并记录相关指标；在注射LPS 6 h后取左心房血和心肌组织，采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测血浆和心肌组织中miR-499的表达量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测心肌组织中α-MHC、β-MHC的蛋白表达；采用电化学发光仪测定血浆心力衰竭标志物N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平。结果:与PBS组比较，LPS刺激后大鼠出现精神萎靡，血浆和心肌组织中miR-499表达下调，且心肌组织中α-MHC表达显著下调、β-MHC表达显著上调，超声心动图结果显示左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、心排血量（CO）、每搏量（SV）和心率（HR）分别下降了49.1%、59.2%、48.8%、39.4%、15.9%，且血浆NT-proBNP水平显著升高，表明LPS能诱导大鼠心功能障碍。与LPS组相比，给予agomir预处理过表达miR-499后，超声心动图显示大鼠心功能改善，表现为LVEF、LVFS显著升高〔LVEF：0.662±0.020比0.323±0.024，LVFS：（36.16±1.43）%比（20.20±1.32）%，均 P<0.01〕；同时大鼠心肌组织中β-MHC/α-MHC失调被逆转，β-MHC蛋白表达显著下调（β-MHC/GAPDH：0.74±0.04比2.97±0.34， P<0.01），α-MHC的蛋白表达显著上调（α-MHC/GAPDH：1.59±0.05比0.74±0.14， P<0.01），且血浆NT-proBNP水平明显下降（ng/L：114.49±6.85比334.13±4.36， P<0.01）。而给予antagomir预处理抑制miR-499表达后，超声心动图显示大鼠心功能被显著抑制，表现为LVEF、LVFS较LPS组显著下降〔LVEF：0.297±0.021比0.323±0.024，LVFS：（19.38±1.52）%比（21.20±1.32）%，均 P<0.01〕；同时大鼠心肌组织中α-MHC蛋白表达显著下调（α-MHC/GAPDH：0.63±0.03比0.74±0.14， P<0.01），β-MHC蛋白表达显著上调（β-MHC/GAPDH：3.03±0.47比2.97±0.34， P<0.01），且血浆NT-proBNP水平明显升高（ng/L：373.91±4.23比334.13±4.36， P<0.05）。 结论:miR-499能通过调节SMD大鼠心肌组织中α-MHC、β-MHC的表达水平，改善脓毒症引起的心功能障碍；靶向调节miR-499的表达可能成为治疗SMD的有效途径。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela，命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力；采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14)，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值水平(2.23±0.15)明显高于miR-499-5p KD组(1.45±0.08)，差异有统计学意义( t＝11.150， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(80.97±3.36)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.99±9.87)%]，差异有统计学意义( t＝5.396， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(87.24±3.87)%]明显高于miR-499-5p KD组[(67.38±2.51)%]，差异有统计学意义( t＝22.920， P<0.05)。对照组细胞细胞核增殖抗原(Ki-67)表达水平(1.36±0.10)明显高于miR-499-5p KD组(0.92±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.218， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(73.37±4.01)%]明显高于miR-499-5p KD组[(57.21±2.29)%]，差异有统计学意义( t＝7.637， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(106.83±8.95)个]明显高于miR-499-5p KD组[(81.17±7.49)个]，差异有统计学意义( t＝5.384， P<0.05)。对照组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(1.16±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.67±0.06)，差异有统计学意义( t＝9.409， P<0.05)。CYLD是miR-499-5p靶基因。对照组细胞CYLD蛋白表达水平(0.98±0.08)明显低于miR-499-5p KD组(1.59±0.06)，差异有统计学意义( t＝15.500， P<0.05)。癌旁组织CYLD蛋白表达水平(1.36±0.11)明显高于miR-499-5p KD组(0.74±0.10)，差异有统计学意义( t＝19.310， P<0.05)。 结论:miR-499-5p在宫颈癌组织中高表达，主要靶向调控CYLD表达参与宫颈癌细胞的增殖和侵袭过程。

目的:探讨叉头蛋白M1反义长链非编码RNA(LncRNA FOXM1-AS)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)炎症因子表达和上皮-间质转化(EMT)的影响，并研究其潜在机制。方法:本研究为实验研究。培养BEAS-2B，采用随机数字表法分成对照组，CSE组(2.5% CSE处理)、siNC+CSE组(转染siNC，给予2.5% CSE处理)、siFOXM1-AS+CSE组(转染siFOXM1-AS，给予2.5% CSE处理)；通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法、酶联免疫吸附试验法和蛋白质印迹法检测各组FOXM1-AS、IL-6、TNF-α、E-cadherin、Vimentin基因表达水平和IL-6、TNF-α水平以及SOX6蛋白表达；利用生物信息学软件miRcode预测FOXM1-AS的潜在靶基因(miR-499a-5p)，荧光素酶报告基因实验鉴定二者的靶向关系。结果:与对照组比较，CSE组细胞中FOXM1-AS的表达水平显著增加(1.06±0.08比2.89±0.31， P<0.01)。利用siFOXM1-AS沉默FOXM1-AS后，明显抑制了CSE诱导的细胞炎症因子IL-6(2.63±0.34比1.39±0.23， P<0.01)、TNF-α(2.58±0.23比1.35±0.20， P<0.01)的表达，细胞EMT进程中，E-cadherin基因表达水平增加(0.35±0.10比0.92±0.08， P<0.01)，而Vimentin基因表达水平减少(2.37±0.28比1.41±0.20， P<0.01)。此外，FOXM1-AS通过靶向结合miR-499a-5p调控SOX6表达。miR-499a-5p抑制剂可逆转siFOXM1-AS对CSE诱导的细胞炎症因子表达及EMT的作用。 结论:下调FOXM1-AS靶向miR-499a-5p可抑制CSE诱导的BEAS-2B细胞炎症因子表达和EMT。

目的 探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系.方法 选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例).根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例).以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例).另外,选取同期体检健康者151例为健康组.分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能.结果 轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P＜0.05).预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P＜0.05).脓毒症并发AI.I患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P＜0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P＜0.05).miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关.miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估.

目的 观察冠状动脉再灌注治疗对急性心肌梗死(AMI)患者血浆外泌体微小RNA(miRNA,miR)差异表达的影响.方法 选取2022年10月至11月于深圳市龙岗区第三人民医院确诊的3例老年男性AMI患者,进行冠状动脉再灌注治疗,留取患者入院时、术后2 h和术后24 h静脉血,应用miRNA测序技术筛选3例患者血浆外泌体中共同差异表达miRNA后,对其靶基因进行生信分析,利用定量聚合酶链反应验证其中差异表达的miR-499a-5p.结果 与入院时比较,术后2 h血浆外泌体miRNA有418个上调和406个下调,术后24 h血浆外泌体miRNA有320个上调和225个下调(P＜0.05);与术后2 h比较,术后24 h血浆外泌体miRNA有344个上调和350个下调(P＜0.05).Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes富集分析显示,差异表达的miRNA富集在磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B、缺氧诱导因子1和血管平滑肌收缩等通路.Gene Ontology富集分析显示,差异表达的miRNA靶基因分子功能方面主要富集于蛋白结合和DNA结合;细胞组分方面主要富集于细胞膜和细胞质;生物学过程方面主要富集于信号转导和DNA模板转录.术后2 h miR-499a-5p水平显著低于入院时[(0.577±0.020)vs(1.000± 0.023),P＜0.05],术后 24 h miR-499a-5p 水平显著低于术后 2 h[(0.068±0.006)vs(0.577±0.020),P＜0.05].结论 血浆外泌体miRNA可作为早期诊断老年AMI患者和预测冠状动脉再灌注治疗效果的生物标志物.

目的 检测微小RNA-499-5p(miR-499-5p)在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,并探讨其调节机制.方法 实时定量聚合酶链反应(PCR)法用来检测骨肉瘤组织、瘤旁组织及骨肉瘤细胞株中miR-499-5p的表达量.细胞计数试剂盒(CCK-8)法及Western blot 分别用来研究miR-499-5p对骨肉瘤细胞增殖能力的影响及探讨miR-499-Sp调节骨肉瘤细胞增殖的相关机制.结果 在骨肉瘤组织中,miR-499-5p表达量显著升高(肉瘤旁组织中表达量为0.34±0.09,而骨肉瘤组织中的表达量为1.47 ±0.18,P=0.008);此外,miR-499-5p在骨肉瘤细胞株HoS、MG-63及Hu09中的水平(分别为1.65±0.03、1.13 ±0.11、1.87±0.14)显著高于其在人骨髓间充质干细胞hMSCs中的水平(0.56±0.19,P =0.005);CCK-8实验结果表明,与空白及阴性对照组比较,在转染miR-499-5p mimics后48、72、96 h,MG-63细胞的增殖能力明显增强(P=0.030);流式细胞术检测细胞凋亡的结果表明,过表达miR-499-5p组内MG-63细胞的凋亡率为(0.87±0.19)％,显著低于空白组及阴性对照组内细胞的凋亡率[分别为(5.49±0.53)％、(6.72±0.85)％,P=0.030];此外,我们通过靶基因预测软件、结合RT-qPCT及Western blot结果初步认为miR-499-5p可通过转录后调节程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达而发挥上述促癌效应.结论 miR-499-5p在骨肉瘤组织中高表达且其在体外可促进骨肉瘤细胞的增殖.

目的 研究微小RNA(microRNA)在体外循环(CPB)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者中表达,并初步探讨其机制.方法 设定体外循环转流开始前(T1)、转流结束后4 h (T2)、术后8 h(T3)、术后16 h(T4)等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术加以验证.酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数.Pearson相关性分析研究microRNA-320(miR-320)与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分的相关性.体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8(CCK-8)法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响.结果 在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义(t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均<0.001),其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度(0.28 ± 0.09)最为显著,而miR-320的增高程度(1.62 ± 0.12)最为显著(P均<0.05).qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平(1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08)逐渐升高,差异有统计学意义(F=20.648,P<0.05).CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[(110 ± 10)ng/L vs.(254 ± 16)ng/L]、IL-6[(86 ± 8)ng/L vs.(165 ± 11)ng/L]、呼吸指数[(0.182 ± 0.021)vs.(0.381 ± 0.032)]均增高,氧合指数[(350 ± 22)vs.(245 ± 18)]下降,差异均有统计学意义(P均<0.05).Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关(r = 0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P 均 < 0.05),而与氧合指数呈负相关(r =-0.745, P<0.05).pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率 [(82% ± 8%)vs. 100%]、凋亡率[(20.0% ± 1.1%)vs.(9.4% ± 0.8%)]相比,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能.

目的 探讨微小RNA(micro RNA, miR)-133a和miR-499a-5p对脓毒性心肌病(sepsis-induced cardiomyopathy, SIC)的诊断及预后评估价值. 方法 收集70例脓毒症患者血液样本,根据诊断标准分为SIC组(54例)和对照组(脓毒症未发生心肌病,16例).记录患者一般情况,用实时定量荧光PCR技术检测血清miR-133a和miR-499a-5p的表达情况,随访28 d,记录患者生存情况,并比较两组患者28 d病死率.采用Pearson相关性分析检验miR-133a和miR-499a-5p与血清肌钙蛋白I (troponin I, cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB, CK-MB)、N末端B型钠尿肽前体(N-terminal B-type natriuretic peptide, NT-proBNP)及左室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)的相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic, ROC曲线)分析比较miR-133a和miR-499a-5p对SIC的诊断价值;多因素Logistic回归分析SIC患者28 d病死率的危险因素;ROC曲线分析危险因素对患者28 d病死率的预测价值. 结果 与对照组比较,SIC组患者miR-133a和miR-499a-5p表达升高,28 d病死率增高(P＜0.05). Pearson相关分析结果显示:miR-133a和miR-499a-5p与cTnI呈正相关(miR-133a,r=0.329,P=0.005;miR-499a-5p,r=0.574,P=0.000). ROC曲线分析结果显示:miR-133a、miR-499a-5p以及miR-133a和miR-499a-5p联合检测诊断SIC的ROC曲线下面积分别为0.676、0.737和0.758.多因素回归结果显示:miR-133a为SIC患者28 d病死率的独立危险因素. ROC曲线分析结果显示,miR-133a预测患者28 d病死率的ROC曲线下面积为0.826 (95%CI 0.703～0.948). 结论 miR-133a和miR-499a-5p可作为诊断SIC的生物标志物,miR-133a对SIC患者的28 d病死率具有预测价值.

目的 研究微小RNA-499(miRNA-499)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)在急性心肌梗死(AMI)诊断中的价值.方法 抽取本院2017年1月—2018年5月收治的53例AMI患者为观察组,同期体检健康人群45例为对照组.通过全自动实时分辨免疫荧光法测定血浆cTnI、CK-MB水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血浆miRNA-499含量.比较二组平均血浆miRNA-499相对表达水平、cT-nI、CK-MB水平及其阳性率;动态观察患者发病0～h、2～h、4～h、8～h、12～16 h血浆miRNA-499、cTnI、CK-MB水平变化;miRNA-499、cTnI、CK-MB之间相关性行Pearson分析;受试者工作特征曲线(ROC)分析miRNA-499诊断AMI曲线下面积(AUC).结果 观察组血浆miRNA-499相对表达水平、cTnI及CK-MB水平分别为(3.70±1.41)ng/ml、(24.02±6.38)ng/ml、(67.00±16.18)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05);观察组发病2～h血浆miRNA-499相对表达水平最高(4.30±1.21),血浆cTnI水平于发病4～h最高(24.86±4.10)ng/ml,CK-MB发病8～h最高,为(81.64±9.63)ng/ml;血浆miRNA-499相对表达水平与cTnI、CK-MB水平均呈正相关(均P<0.05);血浆cTnI、CK-MB阳性率观察组均显著高于对照组(均P<0.05);miRNA-499诊断AMI曲线下面积(AUC)为0.957;cTnI诊断灵敏度、特异度分别为83.02％、95.56％,CK-MB诊断灵敏度、特异度分别为75.47％、84.44％.结论 miRNA-499、cTnI、CK-MB诊断AMI各有优势,联合诊断价值更大.

目的 探讨血清微小RNA(miRNA)-499-5p和铁调素(Hepc)-20联合检测对急性心肌梗死(AMI)的诊断价值.方法 选取2020年6月至2021年6月于该中心收治的AMI患者96例作为AMI组.同时,选取同年龄段的心绞痛患者及体检健康者各96例作为心绞痛组和健康组.检测血清中的miR-499-5p、Hepc-20及心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平.采用二元Logistic回归分析AMI的独立危险因素.采用Pearson分析评估miR-499-5p、Hepc-20与cTnI的相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-499-5p、Hepc-20单项及联合检测对AMI的诊断价值.结果 AMI组血清中的miR-499-5p、Hepc-20、cTnI、低密度脂蛋白(LDL)及三酰甘油(TG)较心绞痛组和健康组升高(P<0.05).AMI组血清中的高密度脂蛋白(HDL)较心绞痛组和健康组降低(P<0.05).二元Logistic回归分析显示,miR-499-5p、Hepc-20、cTnI及LDL水平升高是影响AMI发生的独立危险因素(P<0.05).ST抬高型心肌梗死(STEMI)患者和非ST抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者血清中miR-499-5p和Hepc-20水平比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-499-5p和Hepc-20均与cTnI呈正相关(r=0.746、0.871,P<0.05).ROC曲线结果显示,miR-499-5p联合Hepc-20检测的曲线下面积(AUC)明显大于miR-499-5p或Hepc-20单项检测的AUC(P<0.05),联合检测的灵敏度和特异度分别为90.24％和78.05％.结论 AMI患者血清中miR-499-5p和Hepc-20水平均升高,且是AMI发生的独立危险因素.二者联合检测对AMI具有良好的诊断效能,可为临床实施进一步治疗提供有利支持.