目的 了解临床分离的纹带棒状杆菌对抗菌药物的敏感性及其感染或定植患者的临床特征.方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院2020年7月—2022年9月临床分离纹带棒状杆菌72株,采用肉汤微量稀释法检测细菌对18种抗菌药物的敏感性.PCR扩增检测喹诺酮类耐药决定区相关基因gyrA并进行测序以分析氨基酸突变位点,PCR扩增核糖体甲基化酶基因ermX和氨基糖苷修饰酶基因aphA1并进行测序分析.病史资料分析纹带棒状杆菌感染或定植患者的临床特征.结果 药敏试验结果显示,所有菌株对万古霉素、利奈唑胺和达托霉素均100％敏感,对头孢曲松、环丙沙星及莫西沙星均100％耐药,对青霉素(87.5％)、头孢吡肟(95.8％)、美罗培南(95.8％)、甲氧苄啶-磺胺甲唑(90.3％)、红霉素(98.6％)和克林霉素(98.6％)的耐药率较高,对庆大霉素(25.0％)、四环素(30.6％)和利福平(23.6％)耐药率较低.PCR及DNA测序结果显示,3株纹带棒状杆菌发生gyrA基因单点突变(Ser87Val),67株发生双突变(Ser87Phe、Asp91Ala或Ser87Tyr、Asp91Ala),2株发生三位点突变(Ser87Phe、Ala88Pro和Asp91Ala),其中三位点突变是本研究首次发现的突变模式.所有的纹带棒状杆菌均检出ermX基因,aphA1基因检出率为43.1％.病史资料结果显示,72株纹带棒状杆菌主要分离自ICU(占65.2％),标本来源以下呼吸道标本为主(占91.6％),患者平均年龄(68.0±15.3)岁,感染和定植患者比例分别占72.2％(52/72)和27.8％(20/72),两组患者在住院时长≥28 d、合并脑出血、意识障碍及病情恶化方面差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 该院临床分离的纹带棒状杆菌均为多重耐药菌,感染患者预后相对较差.

目的:探讨分析单固位体悬臂式粘接桥在个别前牙缺失修复中的临床修复效果.方法:20 例个别前牙缺失的患者用单固位体悬臂式粘接桥进行修复,分别在修复后 6、12、24、36 个月用美国公共健康协会(APHA)制定的修复临床评价标准对修复体进行评价,同时记录修复前及修复后各个时间点基牙及其邻牙的牙周指标,观察修复体临床修复效果,分析修复体对基牙牙周状况的影响,并对患者满意度视觉模拟评分法(VAS)量化分析.结果:20 例单固位体悬臂式粘接桥在修复后 36 个月期间未发生脱粘接及折裂现象,修复后 24 个月,1 例修复体边缘着色达到B级,其余均为A级;修复体完成 36 个月,3 例修复体边缘着色达到B级,其余为A级;患者对修复效果满意度为 100%,患者对缺牙区状态的满意度在修复前后差异有统计学意义(P＜0.05).修复后基牙各时间点牙周指标较修复前均无显著性差异(P＞0.05).结论:个别前牙缺失的患者,用单固位体悬臂式粘接桥进行修复,可获得较为稳定的临床修复效果.

目的 研究副溶血弧菌密度感应系统核心调控子AphA和OpaR对exsA和exsD的调控机制.方法 提取野生株(WT)和调控子基因突变株(ΔaphA或ΔopaR)总RNA,采用引物延伸实验确定exsA和exsD的转录起始位点,并根据WT和突变株中引物延伸产物的丰度,判定AphA和OpaR对exsA和exsD的调控关系;将exsA和exsD的启动子区DNA序列克隆入pHRP309质粒无启动子区的β-半乳糖苷酶基因的上游,构建重组质粒,并将其分别转入WT、ΔaphA和ΔopaR中得到LacZ菌株,用β-半乳糖苷酶检测试剂盒检测并比较各LacZ菌株中β-半乳糖苷酶活性的差异来判断AphA和OpaR对exsA和exsD的调控关系;PCR扩增exsA和exsD的上游调控序列,并表达纯化His-AphA和His-OpaR重组蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)探究重组蛋白是否可结合到exsA和exsD的上游调控序列上,并采用DNase I足迹实验鉴定具体的结合位点.结果 引物延伸实验结果显示,exsA和exsD各有一个转录起始位点,分别为C(-440)和C(-105)(翻译起始位点为+1),且在低密度生长条件下,AphA可激活它们的转录活性,而在高密度生长条件下,OpaR抑制它们的转录活性,随后的LacZ报告基因融合实验进一步确证了这种调控关系.体外的EMSA和DNaseⅠ足迹实验结果表明,His-AphA和His-OpaR均不能与exsA和exsD启动子DNA序列结合.结论 低密度生长时,AphA间接激活exsA和exsD的转录;高密度生长时,OpaR间接抑制exsA和exsD的转录.

目的 观察IPS e.max单端全瓷粘接桥在修复单个前牙缺失中的临床应用.方法 选择35例单个前牙缺失患者,制作IPS e.max全瓷粘接桥进行单端全瓷粘接桥修复,采用美国公共健康协会(APHA)制定的评价标准对全瓷粘接桥修复后3个月、6个月、1年、2年进行临床应用观察.结果 35例单端全瓷粘接桥在修复完成后3个月、6个月和1年内APHA的6项评价指标为A级;修复完成后2年,1例修复体修复体边缘着色及龈缘密合度为B级,其余均为A级.结论 对于单个前牙缺失,IPS e.max单端全瓷粘接桥可以取得良好的临床效果.

[目的]研究副溶血弧菌群体感应(quorum sensing,QS)系统核心调控子AphA和OpaR对calR基因以及CalR对Ⅵ型分泌系统l(type VI secretion system 1,T6SS1;vp1386-1420)相关基因的转录调控关系.[方法]提取副溶血弧菌野生株(wild-type,WT)和调控子基因突变株的总RNA,采用实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)研究调控子对靶基因的转录调控关系;采用引物延伸实验研究靶基因的转录起始位点,并根据产物的丰度判断调控子对靶基因的调控关系;将靶基因的启动子区克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建LacZ重组质粒,并将该重组质粒转入WT和调控子基因突变株中,获得LacZ菌株,通过LacZ报告基因融合实验进一步研究调控子对靶基因的调控关系.PCR扩增靶基因的上游调控区DNA序列,并纯化His-重组调控子蛋白,通过凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究His-重组蛋白对靶基因调控区DNA序列是否具有直接的结合作用,若有结合作用,则进一步采用DNase I足迹实验研究具体的结合位点.[结果]在细菌生长密度(OD600)从 0.05依次增加到1.20时,CalR的表达水平呈梯度升高特征;QS系统在低细胞密度下的核心调控子AphA对calR基因的转录没有调控作用,而高细胞密度下的核心调控子OpaR对calR基因的转录具有间接的激活作用.此外,在非诱导条件下,CalR直接结合到vp1388-1390、vp1393-1406、vp1400-1406和vp1409-1407启动子区DNA序列上促进它们的转录.[结论]OpaR间接激活CalR的表达,而CalR是非诱导条件下维持T6SS1基础表达所必需的调控子.

[背景]大肠杆菌(Escherichiacoli)是引起犊牛腹泻的最主要病原菌,其耐药性菌株的不断出现引起广泛关注.[目的]了解内蒙古自治区通辽市犊牛腹泻大肠杆菌耐药性及耐药基因流行情况.[方法]从通辽市多个旗县采集犊牛腹泻样品40份,经细菌分离纯化及16SrRNA基因测序,最终鉴定出20株大肠杆菌.采用药敏试验和PCR方法对分离菌进行耐药性及耐药基因检测分析,并对其中1株多重耐药菌株进行全基因组测序.[结果]20株分离菌均具有多重耐药性,对链霉素、环丙沙星、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率达80％以上.所检耐药基因中,aphA1、strB、TEM-1和qnrS检出率达100％.通过对代表性菌株TL-13全基因组测序发现,其基因组大小为4 897 185 bp,GC含量为50.68％,同时携带2个质粒,大小分别为108 288 bp(pTL13-1)和64 018 bp(pTL13-2).质粒中共携带18个可移动耐药基因.[结论]通辽地区犊牛腹泻大肠杆菌多重耐药性普遍存在,4种常见耐药基因普遍流行.

目的:观察白花丹醌对结肠癌细胞Caco-2增殖、凋亡的影响,探究其潜在的作用机制.方法:运用CCK8法、流式细胞术检测不同浓度白花丹醌(4、8、12μmol/L)处理的Caco-2细胞的增殖抑制率、凋亡率.不做任何处理的Caco-2细胞设为Control;脂质体法将si-NC组(转染si-NC)、si-CXCL8组(转染si-CXCL8)转染至Caco-2细胞;8μmol/L的白花丹醌与0.5％DMSO处理的Caco-2细胞设为8μmol/L+DMSO组;8μmol/L的白花丹醌分别与z-VAD-FMK、740Y-P处理的Caco-2细胞设为8μmol/L+z-VAD-FMK组、8μmol/L+740Y-P组.RT-qPCR、Western blot实验检测细胞中CXCL8的mRNA、蛋白表达,CXCL8、M2-型丙酮酸激酶(M2 pyruvate kinase,PKM2)、L-乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)、人α-烯醇化酶(apha-enolase,ENO1)、葡萄糖磷酸异构酶(glucose phosphate isomerase,GPI)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的蛋白表达.结果:与Control组相比,白花丹醌(4、8、12μmol/L)呈浓度依赖性促进Caco-2细胞增殖抑制率、凋亡率升高,抑制CXCL8的mRNA和蛋白表达.与8μmol/L+DMSO组相比,8μmol/L+z-VAD-FMK组细胞的增殖抑制率、凋亡率明显降低,CXCL8的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05).白花丹醌(4、8、12μmol/L)呈浓度依赖性抑制PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达.si-CXCL8组PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达明显低于si-NC组.740Y-P明显减弱白花丹醌对Caco-2细胞增殖抑制率和凋亡率的促进作用.结论:白花丹醌抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡,其潜在的作用机制与CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路有关.

文章选择两种特征不同的微囊藻——产毒的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)和无毒的惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii),分别以不同的接种比例(1﹕2、1﹕1和2﹕1)与产土臭素(Geosmin)的柔细束丝藻(Apha-nizomenon gracile)混合培养,以探索种间相互作用对藻类生长和束丝藻土臭素合成与释放的影响.结果表明,在共培养条件下,两种微囊藻均抑制了柔细束丝藻的生长,而柔细束丝藻却促进了两种微囊藻的生长.惠氏微囊藻促进了柔细束丝藻土臭素的释放(接种比例为1﹕1时,束丝藻胞外土臭素的细胞份额达到269.43 fg/cell),仅在生长早期与生长受到抑制阶段促进了土臭素的合成;铜绿微囊藻在共培养早期促进了束丝藻土臭素的合成,但共培养却抑制了土臭素的释放,而且在共培养的中后期已检测不到土臭素.研究结果表明,在自然水体中束丝藻与微囊藻的季节演替过程中,微囊藻在与束丝藻的竞争中处于优势,且微囊藻对束丝藻的竞争压力促使后者合成异味物质,随着束丝藻的消亡可能伴随大量异味物质的释放,增加异味事件发生风险.