目的 本研究对忍冬花中均一多糖结构和抗新生血管生成活性进行研究,为忍冬的活性物质基础研究提供新的理论数据.方法 水提醇沉并结合阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱法获得忍冬均一多糖LF-02-2,并通过分子量检测、单糖组成分析、糖残基连接方式分析、部分酸水解、糖醛酸还原结合核磁共振数据推导出LF-02-2的结构.同时,运用人微血管内皮细胞管腔形成实验测定其体外抗新生血管活性.结果 对LF-02-2的结构解析表明,均一多糖LF-02-2的重均分子量为74.1 kDa,其单糖组成由鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)、半乳糖醛酸(GalA)和阿拉伯糖(Ara)组成,摩尔比分别为10.43∶14.94∶6.66∶67.97.其主链由1,4-连接的α-Galp A、1,2-连接的α-Rhap和1,2,4-连接的α-Rhap组成.分支由末端连接和1,4,6-连接的β-Galp,末端连接和1,5-连接的α-Araf连接,取代发生在1,2,4-连接的α-Rhap的O-4位.管腔形成实验结果表明LF-02-2能显著抑制人微血管内皮细胞(Human Microvascular Endothelial Cell,HMEC)的管腔形成.结论 忍冬花中一种类RG-I型果胶多糖LF-02-2具有显著抗血管生成活性,具有开发为抗血管生成药物的潜力.

目的 比较不同发育时期忍冬花酚酸类成分含量,评估忍冬花在不同发育时期的药用价值,为确定适宜采收期提供参考.方法 高效液相色谱电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)测定 12 种酚酸类成分含量,多元统计分析忍冬花不同发育时期酚酸类成分含量差异.结果 忍冬花酚酸类成分总含量高低为二白期>三青期>大白期>米蕾期>银花期>金花期.结论 不同发育时期忍冬花酚酸类成分含量差异显著,开放花中原儿茶酸和绿原酸甲酯含量较高,提示开放花具有独特的开发利用价值.

目的 鉴定灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides MADS-box家族基因并进行生物信息学分析与表达模式验证,克隆湘蕾型和野生型灰毡毛忍冬MADS-box家族成员CMB1 全长.方法 基于转录组数据,利用在线工具对灰毡毛忍冬MADS-box进行生物信息学分析,并利用qRT-PCR验证MADS-box基因在不同品种中的表达模式,通过RT-PCR、RACE技术克隆湘蕾型和野生型灰毡毛忍冬CMB1基因全长.结果 28个灰毡毛忍冬MADS-box蛋白长度为89～359 aa,碱性蛋白占比85.7%,不稳定蛋白占比96.4%,亲水性蛋白占比 96.4%,均定位于细胞核,均为无跨膜结构的非分泌蛋白.转录组显示,与野生型比较,湘蕾型中 28个MADS-box基因有 17.86%表达下调,MIKCC型基因中有 18.75%表达下调.克隆得到在两个品种的灰毡毛忍冬花中高度特异性表达的CMB1基因全长,均包含一个738 bp的ORF,编码245个氨基酸.CMB1基因在两个品种的花中表达量存在显著差异(P<0.01),且与茎、叶相比,在花中高度特异性表达(P<0.01).结论 基于灰毡毛忍冬转录组数据,鉴定了 28个MADS-box家族基因,克隆得到湘蕾型与野生型灰毡毛忍冬CMB1 基因全长,为进一步研究灰毡毛忍冬花发育、优良表型形成的分子机制提供研究基础与理论依据.

目的 研究不同发育阶段灰毡毛忍冬花部的挥发油含量和品质.方法 采用水蒸气蒸馏法提取不同发育阶段开花型和闭蕾型灰毡毛忍冬花部的挥发油,使用GC-MS联用仪对挥发油进行成分分析鉴定,并用面积归一法测定挥发油各成分的百分含量.结果 开花型和闭蕾型灰毡毛忍冬花部不同发育阶段挥发油的含量和成分存在明显差别.开花型在大白期挥发油含量最高,挥发油化学成分种类最多.闭蕾型在黄白期挥发油含量最高.结论 根据挥发油含量及其成分变化,确定灰毡毛忍冬花部适宜采收期,开花型为大白期,闭蕾型为黄白期.

目的 克隆灰毡毛忍冬苯丙氨酸解氨酶(LmPAL1)基因全长序列,并进行生物信息学和表达模式分析.方法 提取灰毡毛忍冬花总RNA,通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和RACE技术克隆LmPAL1基因的全长cDNA序列;运用相关软件对该基因序列进行生物信息学分析;利用qRT-PCR测定灰毡毛忍冬茎、叶和不同花期花中该基因的相对表达量.结果 克隆的LmPAL1基因开放阅读框(ORF)长度为2 145bp,编码714个氨基酸,生物信息学分析预测为亲水性蛋白,定位于叶绿体中,包含PAL shielding结构域(527～641 aa),并且含有PAL/HAL活性中心序列GT兀TASGDLVPLSYIAG(196～212 aa),与其他LmPAL1具有较高的相似度;LmPALl基因qRT-PCR结果显示,7个花期材料以金黄色开花期相对表达量较高;与茎、叶比,白色花蕾期花的相对表达量最高,叶的最低.结论 成功克隆了LmPAL1基因,为进一步研究该基因的功能以及遗传改良灰毡毛忍冬品质奠定基础,同时为探究灰毡毛忍冬绿原酸生物合成和调节机制提供了依据.

目的:研究不同发育时期忍冬花蕾或花外观性状、产量、折干率以及活性成分含量的变化,为金银花质量标准的制定提供依据.方法:对不同发育时期忍冬花蕾或花进行外观性状测定、产量及折干率测定、13种活性成分含量测定,并对其动态变化进行分析.结果:对不同发育时期的忍冬花蕾或花的外观大小进行范围界定,6个发育期中,三青期折干率最高,为33.82％.13种活性成分含量中酚酸类成分随花的发育逐渐降低,环烯醚萜类成分先降低后升高,黄酮类成分先升高后降低.结论:综合考虑,三青期忍冬花活性成分含量相对较高,达5.46％,建议三青期进行采收.

目的 研究忍冬Lonicera japonica Thunb.花不同发育期颜色、气味的变化.方法 采用色差仪测定不同发育期忍冬花蕾或花颜色,通过气相离子迁移谱测定气味.结果 不同生长发育期的忍冬花蕾或花的L*值(亮度)呈现先升高后降低的趋势,a*值(红绿色度)逐步升高,但二白期和金花期均有稍下降趋势;b*值(黄蓝色度)除金花期稍有下降外,整个生长发育期均稳步增大;BI值(褐变指数)逐渐升高,金花期稍有下降;忍冬花蕾或花在发育过程中,挥发性成分有的增加、有的降低、有的从有到无、有的从无到有.结论 该方法稳定可靠,可作为药材成熟度的鉴定指标.

目的:研究灰毡毛忍冬中花、茎、叶的挥发油成分.方法:以水蒸气蒸馏法分别对灰毡毛忍冬花、茎、叶的挥发油进行提取.采用GC-MS-DS技术分析检测鉴定其成分组成.结果:分析鉴定出灰毡毛忍冬花、茎、叶挥发油中的34、29、58种成分,其中相对含量超过1％的分别为:花16个、茎12个、叶14个.结论:灰毡毛忍冬花、茎、叶的挥发油成分差异明显.

为研究灰毡毛忍冬花中次生代谢产物生物合成的调控机制,该文探究了参与其次生代谢产物生物合成调控的关键基因与差异代谢物的作用机制.该研究利用Illumina Hiseq高通量测序技术对不同发育时期的灰毡毛忍冬花进行转录组测序,借助LC-MS/MS技术,对其代谢物进行定性、定量以及合成累积规律研究,并根据差异表达基因筛选出酚酸、黄酮类物质生物合成的关键酶基因.代谢组学及转录组学分析共获得111个差异代谢物和6653条差异表达基因,二青期的代谢物和关键酶基因与大白期和银花期存在明显差异.在灰毡毛忍冬苯丙氨酸生物合成通路中,绿原酸、柚皮素、槲皮素、芦丁、松柏醇等代谢物的离子丰度随花的发育逐渐降低,阿魏酸、香豆素和紫丁香苷等代谢物的离子丰度随花的发育逐渐升高;关键酶基因CHS、HCT、CCR、FLS、COMT等正向调控下游代谢物,PAL、C4H、4CL等负向调控下游代谢物.该研究为进一步挖掘灰毡毛忍冬花中次生代谢产物生物合成关键酶基因,为利用分子生物学手段调控其次生代谢产物累积量提供候选基因及相应的理论基础.

目的 对灰毡毛忍冬苯丙氨酸解氨酶(LmPAL2)基因进行克隆与表达分析.方法 以灰毡毛忍冬花总RNA为模板,在灰毡毛忍冬转录组数据的基础上,利用RT-PCR与RACE技术克隆LmPAL2基因的cDNA序列全长,并通过一系列软件对LmPAL2基因进行生物信息学分析.应用qRT-PCR技术测定其在灰毡毛忍冬不同花期及不同器官(茎、叶)中的相对表达量.结果 克隆得到LmPAL2(GenBank:MH779889)基因,开放阅读框(ORF)长度为2124 bp,编码707个氨基酸,具有苯丙氨酸解氨酶(PAL)保守结构域和活性中心,与其他植物PAL基因同源性较高;qRT-PCR结果显示,LmPAL2基因在绿白色花蕾期的相对表达量最高;在不同器官中,叶>白色花蕾期花>茎.结论 克隆得到LmPAL2基因,并探索其在不同器官的表达模式,推测其可能与灰毡毛忍冬绿原酸的生物合成有关.